Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

吕香茹，张小芸，孙 凯，张 煦

（1.兰州大学，甘肃 兰州 730000；2.甘肃卫生职业学院，甘肃 兰州 730000；3.西安交通大学，陕西 西安 710000）

Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

吕香茹1，2，张小芸1，孙 凯3，张 煦1

（1.兰州大学，甘肃 兰州 730000；2.甘肃卫生职业学院，甘肃 兰州 730000；3.西安交通大学，陕西 西安 710000）

目的 探讨Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白（YAP）在乳腺癌组织中的表达及意义。方法 应用免疫组织化学方法检测97例乳腺癌组织、32例癌旁正常乳腺组织中YAP的表达情况，分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果YAP在正常乳腺组织中的表达率明显高于乳腺癌组织，两者差异有显著性（χ2=17.603，P=0.000）。乳腺癌组织中YAP的阳性表达与组织学分级、肿瘤大小和有无淋巴结转移之间无明显相关性（P＞0.05）。结论 Hippo/YAP信号转导通路在乳腺癌的发生、发展中发挥着重要作用，可能为乳腺癌的早期发现与诊疗开辟新的途径。

Hippo信号转导通路；Yes相关蛋白；乳腺癌

国际癌症研究机构公布的全球最新癌症调查数据显示，乳腺癌的发病率位列第二位（肺癌13.0%，乳腺癌11.9%，结直肠癌9.7%）。此调查覆盖全球184个国家，其中140个国家中的乳腺癌是女性发病率最高的癌症。与2008年的数据相比，2012年全球乳腺癌发病率增长20%以上，死亡率增长14%。在我国，1990—2010年，男性癌症发病率总体呈下降趋势，而女性癌症发病率呈上升趋势，这主要与乳腺癌等癌症发病率显著升高有关。仅2012年，我国就新增18.7万例乳腺癌患者，因乳腺癌死亡的人数达4.8万，全国共69.7万人患乳腺癌。

目前研究表明，信号转导通路异常导致的细胞增殖和凋亡间动态平衡的破坏与乳腺癌发生发展相关。应用免疫组织化学方法检测相关通路效应因子的蛋白表达水平，并探讨其与临床病理资料间的关系，可以对乳腺癌的生物学行为进行及时有效的评估，为临床诊治提供可靠依据。

YAP（Yes-associated protein）即Yes相关蛋白，是一种连接蛋白和转录共激活因子，在正常机体细胞内发挥着信号转导和基因转录调节的作用。YAP是经典的Hippo信号转导通路的主要效应因子。

YAP在人类多种肿瘤细胞中都存在高表达，如在前列腺癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、食管癌组织中的表达水平均显著高于正常组织。国内外均有研究报道YAP在乳腺癌组织中也存在高表达［1］，但亦有研究显示，YAP在乳腺癌中的表达明显下调甚至缺失［2］。所以，YAP是癌基因还是抑癌基因，身份还不是很明确。本实验即探讨YAP在乳腺癌组织中的表达及意义。

1 材料和方法

1.1 材料

收集张掖市人民医院乳腺科2010—2013年乳腺癌行改良根治术患者的病理标本97例，患者术前均未接受放疗和化疗，全部为女性，年龄31～73岁，平均年龄52岁。组织学分级：Ⅰ级（高分化）12例，Ⅱ级（中分化）63例，Ⅲ级（低分化）22例。肿瘤直径：＜2 cm 18例，2～5 cm 55例，＞5 cm24例。按有无腋窝淋巴结转移分为：有转移58例，无转移39例。对照组为患者癌旁经病理确诊为正常的乳腺组织标本32例。YAP兔抗人多克隆抗体、免疫组织化学SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法

YAP检测采用SP免疫组织化学方法。切片常规脱蜡和水化后，PBS漂洗3次，每次3 min；于湿盒内用3%过氧化氢溶液（A液）室温孵育10 min，滴加5%～10%封闭用正常动物非免疫血清工作液（B液）。滴加一抗工作液，于37℃培养箱内孵育12 h，PBS漂洗3次，每次3 min，滴加生物素标记二抗工作液（C液）；滴加辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素工作液，配制新鲜的DAB显色剂。苏木精对比染色细胞核，染色时间2 min。

1.3 结果判断

根据细胞阳性率和染色程度进行半定量分析。（-）：无显色反应；（+）：阳性细胞数＜25%，染色呈棕黄色；（++）：阳性细胞数占25%～50%，染色呈棕黄或棕色；（+++）：阳性细胞数＞50%，染色呈棕色或深棕色。细胞染色积分=A×B，按照记分分值可以分为：阴性表达或无表达（-），0～3分：阳性表达（+），4～8分：强阳性表达（++）。

1.4 统计学方法

所得数据采用SPSS 17.0软件进行统计学处理，采用χ2检验对两组YAP阳性表达率之间的差异进行比较，计算χ2值和P值，相关性分析采用Spearman等级相关性分析，检验水准为α=0.05。

2 结果

YAP阳性染色主要为核浆表达，显示为棕黄色或棕色颗粒沉着。97例乳腺癌组织中有39例为阳性表达，而在32例正常乳腺组织中阳性表达的有27例。YAP在正常乳腺组织中的阳性表达率明显高于乳腺癌组织，两者差异有显著性（χ2=17.603，P=0.000），见表1、图1。

表1 YAP在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达（n）

图1 乳腺癌组织中YAP呈阳性表达（SP×200）

乳腺癌组织中YAP的阳性表达与组织学分级、肿瘤大小和有无淋巴结转移之间无明显相关性（P＞0.05），见表2。

表2 乳腺癌组织中YAP的表达与临床病理学指标间的关系

3 讨论

Hippo信号转导通路是由一系列蛋白激酶及转录共激活因子所组成的激酶链，通过细胞增生与凋亡之间的动态平衡调控组织器官大小及肿瘤发生发展。在正常生理状态下，当组织细胞增生密度达到细胞会合程度时，该通路被激活，发生接触抑制效应；当细胞密度降低时，这种接触抑制效应即被解除，细胞增生明显加快［3］。Hippo信号转导通路中任何因子发生异常，都会打破细胞增生和凋亡之间的平衡，促进肿瘤发生发展。YAP是经典的Hippo信号转导通路的主要效应因子。在YAP蛋白中存在多个结构域或特异氨基酸序列，通过这些结构域或氨基酸序列，YAP能与多种蛋白质相互作用并参与多条细胞内信号转导通路。

2006年，国外研究首次发现YAP为癌基因，随后在肝细胞癌中证实了这一结果，于是Hippo/YAP信号转导通路与恶性肿瘤的关系逐渐引起人们的关注，研究领域涉及消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤、女性生殖系统肿瘤等。虽然多数研究认为，YAP作为癌基因促进肿瘤发生，但经本实验研究验证，YAP在乳腺癌组织中的表达明显下调甚至缺失，因此，YAP作为癌基因的角色需要重新考虑。

乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一，随着早期检测手段及综合治疗方案的实施，其死亡率近年来有所下降，但由于乳腺癌高度异质性及较高的抗药性和易转移复发的特点，使它仍为第二大威胁女性生命的恶性肿瘤。因此，寻找个性化的综合治疗方案及有效的、联合的进展和预后判断分子标志物是现今乳腺癌研究的重点。

Shyr-Ming等［4］研究显示，YAP不能独立作为乳腺癌的预后指标，但YAP缺失的乳腺癌细胞表现出更强的浸润及转移能力。说明YAP可与其他因子联合作为预后指标。Hippo/YAP信号转导通路在乳腺癌的发生、发展中发挥着重要作用，可能为乳腺癌的早期发现与诊疗开辟新的途径。

［1］Xiao dan Wang，Li li Su，Qis hui Ou.Yes-associated Protein promotes tumour development in luminal epithelial derived breast cancer［J］.European Journal of Cancer，2012（48）：1227-1234.

［2］M Yuan，V Tomlinson，R Lara，et al.Yes-associated Protein（YAP）functions as a tumor suppressor in breast［J］.Cell Death and Differentiation，2008（15）：1752-1759.

［3］Bin Zhao，Qun-Ying Lei，Kun Liang Guan.The Hippo-YAP pathway：new connections between regulation of organ size and cancer［J］.Current Opinion in Cell Biology，2008（20）：638-646.

［4］Shyr-Ming Sheen-Chen，Chun-Ying Huang，Ching-Hua Tsai，et al. Yes-associated Protein Is Not an Independent Prognostic Marker in Breast Cancer［J］.Anticancer Research，2012（32）：3321-3326.

R737.9

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1671-1246（2015）11-0152-02