健康人与慢性牙周炎患者唾液蛋白质量浓度及白蛋白与球蛋白比值的变化

崔博淼 余宇 袁雯雯 周闻捷 周学东 张平

口腔疾病研究国家重点实验室 华西口腔医院（四川大学），成都 610041

唾液在维护口腔健康和微生态平衡的同时，也存在很多在疾病发生中起重要作用的成分。唾液作为人体自身分泌的一种生理物质，组成成分复杂多样，可以在唾液中稳定存在的蛋白质有90多种[1]。目前已经分离出40余种唾液蛋白，其中白蛋白和球蛋白是较重要的唾液功能蛋白，也是体液免疫的重要成分[2]。已知有多种口腔疾病都会在唾液中得以体现，如甲状腺炎、糖尿病、牙周炎、慢性肾炎等疾病都可以影响唾液蛋白成分[3-5]。

近几年，人们对唾液有了新的认识，并试图通过检测唾液成分作为诊断疾病的工具，开发一种无创伤疾病检测的新方法。唾液成分及量的改变与口腔疾病、机体代谢功能改变密切相关。本实验对37名健康受试者及24名发生牙周炎患者全唾液中的总蛋白和部分唾液蛋白组分进行定量分析，确定其参考范围，以便为口腔疾病的诊断治疗提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

本实验收集37名健康受试者以及24名慢性牙周炎患者的全唾液。61名研究对象为23～36岁，平均（28.57±0.69）岁。所有对象均无全身系统性疾病。健康受试者要求无口腔疾病，无饮酒吸烟史。

1.2 样品收集和保存

分别采集37名健康受试者1 d内8:00、9:30、11:30、13:00、16:30、21:00左右的全唾液以及24名牙周炎患者早晨的非刺激全唾液。在收集唾液之前，要求研究对象用清水漱口，5 min后开始收集唾液。

唾液样品收集完毕后，在10 000 r·min-1、4 ℃条件下离心10 min，所得上清液分装入两个EP管中，一管300 μL，另一管100 μL。300 μL用于白蛋白检测，100 μL用于总蛋白检测，并加入500 μL PBS液稀释6倍。标记后分别将上清液-75 ℃冷冻保存[6]。

1.3 实验方法

1.3.1 仪器与试剂 BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），Varioskan Flash（Thermo公司，美国）。GF-D800型半自动生化分析仪（山东高密彩虹分析仪器有限公司），白蛋白测试盒（长春汇力生物技术有限公司）。

1.3.2 检测方法 采用BCA法在酶标仪上测定总蛋白的质量浓度。白蛋白的质量浓度使用GF-D800型半自动生化分析仪和白蛋白测试盒采用溴甲酚绿法进行测定，仪器参数按照试剂盒说明书要求设置。得到总蛋白和白蛋白的测定结果后，再由总蛋白减去白蛋白得到球蛋白的质量浓度，然后计算白蛋白与球蛋白比值（albumin/globulin ratio，A/G）。

1.4 统计学方法

使用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。先对所得的每一组数据进行正态分布检验，再对健康组的6组数据进行单因素方差分析，并使用LSD法进行两两比较；然后使用秩和检验分析牙周炎组与健康组相应时间段的数据之间的差异，检验水准为双侧α=0.05。

2 结果

2.1 健康组唾液蛋白含量检测分析

37名健康受试者在1 d内6个时间段的唾液总蛋白、白蛋白、球蛋白的质量浓度及A/G结果见表1。

表1 健康组各时间段总蛋白、白蛋白、球蛋白质量浓度及A/G测量值Tab 1 The mean concentration of total protein, albumin, globulin and A/G of healthy group in different period of time x±s

经统计学分析，1 d内不同时间段唾液总蛋白、白蛋白、球蛋白的质量浓度有明显波动（P＜0.05）；但A/G在1 d内的变化无统计学意义（P＞0.05）。

测定的唾液总蛋白、白蛋白、球蛋白质量浓度的范围（95%可信区间）见表2，经方差分析结果表明：早晨空腹时（即8:00）不同人唾液蛋白成分的质量浓度较为相似，比较稳定，唾液总蛋白为1 197.02～1 511.68 μg·mL-1，白蛋白为128.57～150.53 μg·mL-1，球蛋白为1 066.10～1 357.50 μg·mL-1，A/G为0.094 0～0.143 2。

表2 健康组各时间段总蛋白、白蛋白、球蛋白质量浓度及A/G的95%可信区间Tab 2 95% con fi dence interval of total protein, albumin, globulin and A/G of healthy group in different period of time

2.2 牙周炎组唾液蛋白质量浓度检测及对比分析

通过对健康组唾液蛋白检测分析可以确定早晨唾液蛋白成分较为稳定，收集牙周炎患者早晨的全唾液，测定结果见表3。对健康组和牙周炎组相同时段的数据进行秩和检验，结果显示两组间总蛋白、白蛋白、球蛋白的质量浓度的差异均有统计学意义（P＜0.05），而A/G的差异无统计学意义（P＞0.05），与健康组比较，牙周炎组总蛋白、白蛋白、球蛋白95%可信区间的下限较健康组相应蛋白的上限高，但是牙周炎组与健康组的A/G并无明显的差异。

表3 牙周炎组早晨唾液总蛋白、白蛋白、球蛋白质量浓度和A/G的均值及95%可信区间Tab 3 The mean concentration and 95% con fi dence in-terval of total protein, albumin, globulin and A/Gof chronic periodontitis group in the morning

3 讨论

唾液是由下颌下腺、舌下腺和腮腺分泌的液体与口腔中众多小黏液腺分泌的黏液在口腔中混合而成的一种无色液体，包含无机物、黏液、糖蛋白、酶和包括分泌型免疫球蛋白与溶菌酶在内的抗菌化合物等。唾液中的酶是淀粉和脂肪消化过程中必不可少的一部分。这些酶在分解截留于牙齿缝隙中的食物颗粒中发挥了重要作用，保护牙齿免受细菌的损坏。此外，唾液还具有润滑功能，湿润食物使之易于下咽，并保护口腔黏膜，保持表面湿润。唾液蛋白浓度变化受多种因素的影响[7]。由于唾液蛋白的缓冲作用，唾液的pH值一般为4～5，pH值降低会导致流率增加，从而导致唾液蛋白浓度下降，即刺激性唾液蛋白的质量浓度较非刺激性唾液有所下降[8]。在患者存在接受放射治疗或化学治疗、免疫力低下和糖尿病等情况下，唾液白蛋白的浓度会升高，这对糖尿病的诊断有一定帮助[5]；此外，口腔鳞状细胞癌患者、牙周炎和牙龈炎患者的唾液总蛋白、白蛋白浓度会明显增加，因此唾液白蛋白水平可作为这些口腔疾病的诊断指标[3,9-10]。有文献[11]报道，基本已确定的牙周炎生物标志物有基质金属蛋白酶-8、白细胞介素-1β，这为有效而准确地诊断牙周炎提供了依据。

本研究取37名健康受试者在1 d内6个时间段的非刺激性全唾液，其中8:00、11:30、16:30、21:00为饭前水平，9:30、13:00为饭后水平。对所得数据进行单因素方差分析，结果显示：1 d内6个时间段唾液总蛋白、白蛋白、球蛋白的质量浓度随时间呈现出一定的变化（P＜0.05），主要是饭前水平与饭后水平间的差异，但是A/G在1 d内并无明显改变（P＞0.05）。造成饭前饭后唾液蛋白质量浓度差异的原因是多方面的，如唾液蛋白质量浓度会随着其pH值的降低而下降。此外，唾液分泌也受到副交感神经和交感神经的支配，以副交感神经为主。人体进食及其后的消化过程中唾液分泌有所改变，主要是因为副交感神经兴奋所致，使血管扩张，毛细血管通透性增强，唾液中白蛋白增多，促进腺体分泌黏稠唾液[12-13]。

本研究结果发现，早晨空腹时（8:00）唾液蛋白成分的含量比较稳定，唾液蛋白质量的浓度范围为总蛋白1 197.02～1 511.68 μg·mL-1，白蛋白128.57～150.53 μg·mL-1，球蛋白1 066.10～1 357.50 μg·mL-1，A/G 0.094 0～0.143 2。这与已报道[7,12-14]的唾液总蛋白、白蛋白量相符合。基于此，24名牙周炎患者的唾液收集时间定为早晨。使用秩和检验，对牙周炎组与健康组相应时间段的数据进行对比分析，结果显示：唾液总蛋白、白蛋白、球蛋白均有明显差异（P＜0.05），且疾病组较健康组高，但是A/G无明显差异（P＞0.05）。

目前，医院检测疾病的方法主要是采用的血液检验，其参考值为总蛋白60.0～83.0 g·L-1，白蛋白35～55 g·L-1，球蛋白19～34 g·L-1，A/G1.20～2.50。白蛋白是最丰富的血清蛋白，由肝脏合成，占血浆总蛋白质的40%～60%。A/G过低一般会考虑是否为肝损伤，而过高一般是因为机体失水过多，血液浓缩或摄入蛋白量过高所致，是评价肝功能重要的生化指标。唾液中的白蛋白被视为超滤液，可由血液扩散成为黏膜分泌物[5]。此外，有报道称唾液白蛋白含量与血清中白蛋白水平存在显著相关性[15]。这为使用唾液这种无创的疾病检测方法的研究提供了科学基础。但是，唾液白蛋白的浓度会受到很多因素的影响，比如黏膜有损伤的患者的唾液白蛋白浓度会显著升高[12]；放射治疗和牙周炎患者也都已经检测出较高质量浓度的白蛋白[5,14]。疾病发生引起唾液组分改变的作用机制以及关系还有待进一步研究。近年来，有关唾液的研究已逐渐引起关注，学者们正为开发一种无创检测方法进行疾病诊断和预防作出努力。

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