热休克蛋白90 在胃癌组织中表达的初步研究

王福根 高福平 魏 谨 马 平

胃癌是危害我国人民健康的重大疾病之一，发病率位于常见致死癌症的第2 位［1］。我国地广人多，成人幽门螺旋杆菌感染率高达40%～60%，属于胃癌高发国家，每年胃癌新发病例约40 万例，死亡约35 万例。热休克蛋白(heat-shock protein，HSPs)是一组高度保守的蛋白家族，存在于多种生物体内，当机体应激反应时新合成或合成增加。HSPs 的亚型热休克蛋白90(heat-shock protein 90，HSP90)与细胞的信号转导调控及生长发育密切相关［2］。近年来，越来越多的实验表明HSP90 与多种肿瘤的发生、发展有着密切的关系。我院采用免疫组化87-8973 二步法检测胃癌组织中HSP90 的表达，分析其与患者临床病理学参数的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集南京市高淳人民医院2009 年1月至2014 年12 月进行手术切除胃癌的80 例患者，并收集20 例癌旁正常组织作为对照(距离癌组织＞5 cm)，所有病例均经病理诊断明确。男性患者57 例，女性23 例;年龄27 ～78 岁，中位年龄62 岁;按照TNM分期，I+II 期33 例，Ⅲ+IV 期47 例。患者术前均未行放、化疗。

1.2 试剂兔抗人单克隆抗体HSP90(HSP90AB1)购自南京伟沃生物科技有限公司。87-8973 试剂盒及DAB 试剂盒均购自北京中杉金桥公司。所有标本经4%的中性甲醛固定，石蜡包埋，3 ～4 μm 厚连续切片。免疫组化采用87-8973 二步法染色，按试剂盒说明书进行规范操作。

1.3 结果判读肿瘤细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片的阳性强度分为:无着色为0 分，淡黄色1分，棕黄色及棕褐色分别2 分、3 分，高倍镜下随机对每张切片的1 000 个细胞。按阳性细胞占肿瘤细胞的百分比评分:无阳性细胞为0 分，＜25%为1 分，25%～50%为2 分，＞50%为3 分。2 项评分结果相加，0 ～2 分为阴性，3 ～6 分为阳性。由2 位高年资病理科医师经双盲法判读。

1.4 统计学方法采用SPSS 19.0 进行统计分析，计数资料以例或百分比表示，统计分析采用χ2检验，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HSP90 蛋白在胃癌组织、癌旁正常组织中的表达

80 例胃癌中，51 例呈阳性表达，阳性率为63.75%;20 例胃正常组织中，6 例阳性表达，阳性率为30.00%。胃癌组织中HSP90 蛋白表达高于其对应癌旁组织，差异有统计学意义(χ2=7.44，P=0.01)。

2.2 HSP90 的表达与胃癌临床病理特征关系不同肿瘤分化程度、侵犯深度、淋巴结有无转移及TNM 分期的胃癌组织HSP90 阳性率不同，差异有统计学意义(P ＜0.05);不同性别、年龄、肿瘤大小、部位、Borrmann 分型的胃癌组织HSP90 阳性率进行比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表1。

3 讨论

胃癌的发生、发展是一个多因素多步骤复杂的过程［3，4］。HSPs 是由Tissieres 等于20 世纪70 年代发现的一类新蛋白。HSPs 在生物体内发挥分子伴侣的功能，可维持蛋白质的稳定，提供细胞生存率，在细胞的生长、发育以及基因转录中起重要的作用。当机体受到各种理化因素侵扰时，机体激活HSP 基因表达HSPs，保护细胞免于凋亡。HSP90 是小分子HSPs 家族中的重要成员，在蛋白质的调节功能、亚基组装等过程中发挥着重要作用。HSP90 的过度表达对维护肿瘤细胞稳定起着重要作用。HSP90 是一种ATP 酶依赖的分子伴侣，HSP90 的构象可以发生改变，其ATP/ADP 结合部位有构象转换的作用，HSP90 以开放及闭合形式发挥着作用，是其作为分子伴侣的重要特征之一［5］。HSP90 的底物蛋白涉及到几乎所有的细胞过程。

HSP90 也可与其辅助的分子伴侣调控肿瘤细胞的凋亡，该调控是通过肿瘤坏死因子受体、AKT 与NFKB 介导的，然而，HSP90 另一重要作用是促进肿瘤的转化。HSP90 可与底物蛋白如突变蛋白、蛋白激酶、激素受体等相互发生作用，促使它们维持在一种易被激活的状态［6］。HSP90 在大多数肿瘤中表达增高。胰腺癌中HSP90a 呈选择性高表达［7］，且HSP90 高表达和胰腺癌的临床TNM分期、淋巴结转移存在相关性。杜文众等［8］认为HSP90的表达水平与垂体腺瘤侵袭性有关，其表达水平有可能作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后的指标。王桂兰等［9］研究发现涎腺肿瘤恶性组HSP90 阳性率显著高于良性组，HSP90 可促进涎腺恶性肿瘤的发生、发展。本文HSP90 在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织，差异有统计学意义。

正常胃组织中HSP90 存在的表达是其作为分子伴侣参与细胞生长和增殖的调节，而在胃癌组织中HSP90 的过表达，可能与HSP90 调节和稳定胃癌细胞的恶性增殖有关。对于HSP90 与不同肿瘤病理特征及预后的关系报道尚无一致结论。Pick 等［10］研究认为HSP90 与乳腺癌的肿瘤大小、病理分级及淋巴结转移相关。Kurahashi 等［11］在前列腺癌中的研究发现HSP90 与肿瘤大小、病理分级及淋巴结转移无关。本文结果发现胃癌中HSP90 蛋白的阳性率与肿瘤分化程度、侵犯深度、淋巴结有无转移及TNM 分期相关，其机制有待进一步研究。

表1 80 例胃癌患者胃癌组织中HSP90 的表达与临床病理特征关系

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