脐血干细胞联合人参促分化合剂治疗失代偿期肝硬化疗效研究

陈玉梅，王丽华，李炳茂，孙建顺，张丽贤，杨彬

脐血干细胞联合人参促分化合剂治疗失代偿期肝硬化疗效研究

陈玉梅，王丽华，李炳茂，孙建顺，张丽贤，杨彬

目的 探讨脐血干细胞联合人参促分化合剂治疗失代偿期肝硬化的疗效。方法 选择2012年2月—2013年4月衡水市哈励逊国际和平医院消化内科确诊的失代偿期肝硬化患者30例，术前行常规保肝治疗，采用细胞分离技术从脐带血中提取干细胞，经肝固有动脉将干细胞悬液移植入肝脏。移植成功后给予人参促分化合剂辅助治疗，治疗14 d。治疗后第16周观察患者肝功能指标，包括ALT、AST、清蛋白（Alb）、总胆红素（TBiL）、凝血酶原活动度（PTA）；治疗后第24周观察血清学纤维化指标，包括透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）；治疗后第24周行CT检查，观察肝脏影像学变化，包括肝脏最大截面积和肝脏平扫CT值。结果 治疗后第16周，患者血浆ALT、AST、TBiL低于治疗前，Alb、PTA高于治疗前（P＜0.05）。治疗后第24周，患者HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C、LN均低于治疗前（P＜0.05）。治疗后第24周，患者肝脏最大截面积多于治疗前（P＜0.05）；治疗前后，肝脏平扫CT值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 脐血干细胞联合人参促分化合剂可以改善失代偿期肝硬化患者肝功能，修复肝脏损伤，是临床治疗失代偿期肝硬化的一种有效措施。

胎血；脐血干细胞移植；肝硬化；人参促分化合剂

陈玉梅，王丽华，李炳茂，等.脐血干细胞联合人参促分化合剂治疗失代偿期肝硬化疗效研究［J］.中国全科医学，2015，18（2）:211-214.［www.chinagp.net］

Chen YM，Wang LH，Li BM，et al.Umbilical cord blood stem cell transplantation and ginseng promoting differentiation mixture in patients with decompensated cirrhosis［J］.Chinese General Practice，2015，18（2）：211-214.

肝硬化是临床上常见的慢性病，而失代偿期肝硬化又是肝硬化的难治性阶段，目前尚缺乏特效的治疗手段，肝移植是最重要的治疗方法，但供肝缺乏、免疫排斥反应及器官移植费用昂贵等问题，极大限制了肝移植的临床应用。近年来，干细胞研究为肝硬化患者的治疗提供了新思路，肝脏再生需要有干细胞和细胞因子的共同参与。如何控制干细胞的分化发育，让其分化为肝脏细胞呢？这取决于移植细胞与生存微环境的联合作用，其中干细胞生存微环境起重要作用，只要给予肝脏再生的微环境，干细胞就可以在体内分化为肝细胞［1］。本研究旨在探讨自拟方（人参促分化合剂）辅助治疗失代偿期肝硬化，提高脐血干细胞移植成功率的效果。

1　资料与方法

1.1病例入选与排除标准 入选标准：（1）依据症状、体征以及实验室检查确诊为失代偿期肝硬化患者；（2）单用药物治疗效果差；（3）知情同意。排除标准：（1）合并心、肺、肝、肾等重要脏器功能衰竭，凝血功能障碍疾病者；（2）原发性肝癌者；（3）全身感染或局部严重感染者；（4）合并其他脏器恶性肿瘤者；（5）休克、全身衰竭、生命体征不正常以及不配合检查者；（6）高度过敏体质或有严重过敏史者。

1.2一般资料 选择2012年2月—2013 年4月衡水市哈励逊国际和平医院消化内科确诊的失代偿期肝硬化患者30例，其中男24例，女6例；年龄40～66岁，平均 （54.0±8.5）岁；乙肝肝硬化27例，药物性肝硬化1例，酒精性肝硬化2例；肝功能Child-Pugh分级C级17例，B级13例。患者入院后均给予常规保肝、利尿、抗病毒、输清蛋白等治疗。

1.3方法（1）分离：无菌采取脐带血，采取细胞分离技术提取干细胞；（2）移植：经股动脉穿刺插管，置管于肝固有动脉行数字减影血管造影（DSA），观察肝内血管情况及有无占位性病变，经肝固有动脉将干细胞悬液移植入肝脏；（3）辅助治疗：移植成功后，给予人参促分化合剂（人参6 g，淫羊藿15 g，桑椹子20 g，甘草6 g，水煎，1次/d，紫河车胶囊2～3 g/次，1次/d，鹿茸粉0.5～1.0 g/次，吞服，1次/d），常规给予促肝细胞生长素120 mg/次，1次/d，生长激素4 U/次，皮下注射，1次/d，连用14 d，继续抗病毒、保肝对症支持治疗。

1.4观察指标（1）观察术后第1、4、16周症状改善程度；（2）治疗后第16周观察肝功能指标，包括ALT、AST、清蛋白（Alb）、总胆红素（TBiL）、凝血酶原活动度（PTA）；（3）治疗后第24周观察血清学纤维化指标，包括透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）；（4）治疗后第24周行CT检查，观察肝脏影像学变化，包括肝脏最大截面积和肝脏平扫CT值；（5）观察治疗后不良反应发生情况。

1.5统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，计量资料以（±s）表示，组内比较采用配对t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1症状改善程度 术后第1周，患者均精神、体力、食欲好转，肝功能无明显改善；第4周，19例患者精神、体力、食欲恢复正常，无需补充清蛋白，双下肢水肿消失，但肝功能化验改善不明显；第16周，27例患者精神、体力、食欲恢复正常，水肿、腹腔积液等体征消失。

2.2肝功能指标变化 治疗后第16周，患者血浆ALT、AST、TBiL低于治疗前，Alb、PTA高于治疗前，差异均有统计学意义（P＜0.05，见表1）。

2.3血清学纤维化指标变化 治疗后第24周，患者HA、PCⅢ、Ⅳ-C、LN均低于治疗前，差异有统计学意义（P＜0.05，见表2）。

2.4肝脏影像学变化 治疗后第24周，患者肝脏最大截面积多于治疗前，差异有统计学意义 （P＜0.05）；治疗前后，肝脏平扫CT值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。患者治疗前和治疗后第24周肝脏CT表现见图1、2。

表3　肝硬化患者治疗前后肝脏影像学指标比较　（±s）Table 3 Comparison of liver imaging indexes in patients　with　DC　before　and after treatment

表3　肝硬化患者治疗前后肝脏影像学指标比较　（±s）Table 3 Comparison of liver imaging indexes in patients　with　DC　before　and after treatment

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2.5不良反应 患者治疗后均未出现明显不良反应。

表1　肝硬化患者治疗前后肝功能指标比较　（±s）Table 1 Comparison of liver function indexes in patients with DC before and after treatment

表1　肝硬化患者治疗前后肝功能指标比较　（±s）Table 1 Comparison of liver function indexes in patients with DC before and after treatment

注：Alb=清蛋白，TBiL=总胆红素，PTA=凝血酶原活动度

时间　例数　ALT（U/L）　AST（U/L）　Alb（g/L）　TBiL（μmol/L）　PTA（%）治疗前　30　110.7±19.4　86.1±17.4　27.0±4.9　47.9±8.4　35.1±6.5治疗后　30　62.2±20.2　41.9±16.7　35.7±5.1　27.5±7.9　59.2±6.4差值　4.9±7.5　4.4±8.0　-6.4±3.3　2.7±5.9　2.4±4.3 t值3.610　3.452　2.754　2.346　2.544 P值0.001　0.002　0.010　0.026　0.017

表2　肝硬化患者治疗前后血清学纤维化指标比较　（±s，ng/L）Table 2 Comparison of serum fibrosis indexes in patients with DC before and after treatment

表2　肝硬化患者治疗前后血清学纤维化指标比较　（±s，ng/L）Table 2 Comparison of serum fibrosis indexes in patients with DC before and after treatment

注：HA=透明质酸，PC-Ⅲ=Ⅲ型前胶原，Ⅳ-C=Ⅳ型胶原，LN=层粘连蛋白

-C　LN治疗前　30　246.2±90.6　210.8±65.7　168.3±59.9　200.3±6时间　例数　HA　PCⅢ　Ⅳ3.8治疗后　30　113.9±45.7　109.3±36.5　85.3±29.3　96.4±39.6差值　115.0±63.2　98.1±64.4　68.2±71.2　92.2±40.1 t值0.001　0.002　0.001　0.001 3.936　3.438　3.893　4.003 P值

图1　治疗前肝脏CT表现Figure 1 Liver CT findings before treatment

图2　治疗后第24周肝脏CT表现Figure 2 Liver CT findings after treatment

3　讨论

间充质干细胞是一种具有高度自我更新能力和多项分化潜能的成体干细胞，其来源于中胚层，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中。近年来，有研究证明，脐带血同骨髓一样，来源于中胚层；脐带血中的干细胞，目前发现有造血干细胞和间充质干细胞［2］。脐带血中的间充质干细胞是中胚层发育的早期细胞，具有全能干细胞的特点，其形态和生物学特点与骨髓源性的间充质干细胞相似，但来源丰富，取材方便，无伦理争议，对供者无损伤，脐血干细胞较成人骨髓干细胞更原始，有更强的增殖分化能力，其免疫原性较弱，移植物抗宿主病发生率较低，脐带血中不含有肿瘤细胞，间充质干细胞易于分离，用于移植的脐血干细胞不替代原有的组织器官，不影响其发挥作用，目前，越来越多的研究者及临床医师开始选用脐血干细胞作为种子细胞进行研究和治疗各种疾病。Bassiouny等［3］和Shi等［4］研究表明，脐血干细胞具有定向分化增生的能力，在肝脏环境内能分化为肝细胞，可参与肝脏结构的修复和重构，改善肝功能，韩翠萍等［5］用脐血干细胞进行体外培养，诱导生成了肝细胞；另外一项在动物体内的实验，先向实验鼠的肝脏注入脐血干细胞，再注入肝脏营养物质，4周后成熟的肝细胞形成，持续分泌清蛋白达1年。国内多项临床研究表明，脐血干细胞移植可以修复受损的肝细胞，促进肝功能恢复，进行干细胞移植在肝脏疾病治疗中可发挥重要作用［6-8］。这为终末期肝病，尤其是终末失代偿期肝硬化和急性肝衰竭的治疗提供了一种全新治疗手段。

近年来，孔晓丹等［9］尝试用中药诱导干细胞分化，并认为具有一定的介导作用。干细胞是脐带血中的精华，细胞层面上的中药，脐血干细胞具先天之精属性，是先天之精在细胞层次的存在形式，胎盘的干制品叫紫河车，具有补精助阳、益气养血功效；《中药大辞典》记载，鹿茸具有壮元阳，补气血，益精髓，强筋骨功效；《本草纲目》记载，淫羊藿味甘气香，性温不寒，能益精气，乃手足阳明命门药也，沈自尹等［10］研究证实，淫羊藿能激活内源性干细胞，干细胞的“自我更新”和 “定向分化”，微环境起决定性作用。干细胞比如种子，而微环境（血液流通）就是土壤，肝硬化使肝脏血管变细，血流不畅，呈现明显的淤血阻络，干细胞失养，很难成活和生长。人参具有益气养血、活血通脉的功能；桑葚子具有滋阴补血的功效；鹿茸总多肤能够通过提高机体对自由基的清除能力，促进肝细胞再生，下调肝组织中基质金属蛋白酶2 （MMP-2）基因和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白的表达，增加Ⅰ、Ⅳ型胶原的降解，治疗和逆转大鼠实验性肝纤维化；多项研究证实，甘草具有抗乙肝病毒、改善肝功能的作用［11-13］。

本研究结果表明，失代偿期肝硬化患者行脐血干细胞移植术后第1周，其精神、体力、食欲明显好转；第4周时，尽管肝功能改善不明显，但19例患者精神、体力、食欲均正常，不用外源性补充清蛋白；治疗后第16周，患者血浆Alb和PTA明显升高，主要机制可能是干细胞移植后通过人参促分化合剂的辅助作用，改善肝脏内环境，促进干细胞转化为肝细胞，增加肝脏腺泡细胞数量，同时脐血干细胞与体内的肝细胞“融合”后，基因重排而行使了肝细胞的功能［14］；加之鹿茸有促进蛋白质合成的功能，同时干细胞移植后患者的饮食明显改善，蛋白摄入量增加亦有助于血浆Alb水平升高。本研究结果还显示，治疗后第24周，患者HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C、LN均低于治疗前，可能与干细胞及人参促分化合剂改善肝纤维化作用有关。且第24周时，患者肝脏最大截面积多于治疗前，肝脏体积明显增大，从根本上改变了肝脏形态学变化，是干细胞移植后转化为肝细胞，使肝细胞数量增加所致。

本研究结果表明，脐血干细胞移植联合人参促分化合剂能够显著促进失代偿期肝硬化患者肝功能恢复，与单纯脐血干细胞治疗相比，能够降低ALT、AST、TBiL的水平，改善肝纤维化。

脐血干细胞治疗从功能上、结构上不取代原有的组织器官，具有传统治疗方法难以达到的效果，且安全有效，在目前原位肝移植供肝紧缺的情况下，可以部分代替肝移植治疗，值得临床大力开展。但脐血干细胞治疗失代偿期肝硬化亦有不足之处，不能从根本上清除肝炎病毒，而且转化生成的肝细胞有可能受病毒侵袭，究竟有多少干细胞能够成功转化为肝细胞，目前在临床实验中检测难度较大，且没有一项成熟技术，仅能从肝功能及形态学变化侧面反映。

目前，脐血干细胞移植治疗肝硬化尚处在探索阶段，移植途径目前分为门静脉、肝动脉、脾动脉、外周静脉及腹腔内直接注射。本研究采用肝固有动脉途径，方法成熟，对患者损伤小，可以提高小肝癌发现率。究竟哪种途径移植成功率更高，如何控制干细胞的分化发育，让其分化为肝脏细胞，以便更有效地改善肝脏组织结构和功能，需要今后更进一步行大样本临床研究，且远期疗效如何，尚需进一步研究。

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（本文编辑：贾萌萌）

Umbilical Cord Blood Stem Cell Transplantation and Ginseng Promoting Differentiation Mixture in Patients withDecompensated Cirrhosis

CHEN Yu-mei，WANG Li-hua，LI Bing-mao，et al.Department of Gastroenterology，Harrison International Peace Hospital，Hengshui 053000，China

Objective To study the effect of umbilical cord blood stem cell transplantation（UCBCT）and ginseng promoting differentiation mixture（GPDM）therapy on decompensated cirrhosis（DC）.Methods From February 2012 to April 2013，in Department of Gastroenterology，Harrison International Peace Hospital，30 DC patients underwent conventional liver protection therapy.Cell isolation technics was used to draw UCBC from umbilical cord blood（UCB）and implanted UCBC suspension into the liver through arteria hepatica propria.After successful implantation，patients were given GPDM adjuvant therapy，14 d.We observed liver function indicators including ALT，AST，albumin（Alb），total bilirubin（TBiL），prothrombin activity（PTA）in weeks 16 after treatment，serum fibrosis markers including hyaluronic acid（HA），laminin （LN），procollagenⅢ （PC-Ⅲ），Ⅳcollagen（Ⅳ-C）in weeks 24 after treatment.In weeks 24 after treatment，patients underwent CT examination，the changes of liver imaging were observed including CT values of liver maximum cross-sectional area and liver plain scan.Results Plasma ALT，AST，TBiL were lower，Alb，PTA higher in weeks 16 after treatment than before treatment（P＜0.05），and HA，PC-Ⅲ，Ⅳ-C，LN lower，liver maximum cross-sectional area larger in weeks 24 after treatment than before treatment（P＜0.05）.There was no significant difference in liver plain scan value between before and after treatment（P＞0.05）.Conclusion UCBCT combined with GPDM，which can improve the liver function and repair liver damages in DC patients，is a effective clinical treatment of DC.

Fetalblood；Cordbloodstemcelltransplantation；Livercirrhosis；Ginsengpromote differentiation mixture

R 657.31

B

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.02.022

河北省中医药管理局科研基金项目（2012234）

053000河北省衡水市，哈励逊国际和平医院消化内科

王丽华，053000河北省衡水市，哈励逊国际和平医院消化内科；E-mail：clywlh@126.com

2014-06-15；

2014-10-12）