血液核酸筛查中的质量控制探讨

朱守兵，刘祎，章雪江，傅立强（绍兴市中心血站，浙江　绍兴312000）

血液核酸筛查中的质量控制探讨

朱守兵，刘祎，章雪江，傅立强
（绍兴市中心血站，浙江绍兴312000）

目的探索建立以内对照循环数（CT）为监控对象的血液核酸筛查质量控制方法，为血液核酸筛查的有效开展提供质量保障。方法对8993份标本使用Cobas s201核酸筛查系统进行6混样检测，以±3s作为内对照CT质控上下限，CT＞+3s为失控，即检测结果无效，CT＜-3s为告警，检测结果有效，但必须进行关注。结果3个混样池 （pool）内对照CT＜-3s，5个pool内对照CT＞+3s；检出阳性pool 25个，有效拆分16个，阳性pool有效拆分率64.0%，阳性标本均为HBV DNA阳性，核酸筛查总阳性率1.78‰。结论建立了以内对照CT为监测目标的质量控制方法，该质量控制方法能够保障核酸筛查结果稳定有效。

核酸检测；质量控制；内对照循环数；质控图

目前血液核酸检测在全国血液系统逐步推广，核酸检测灵敏度高，可以有效缩短病毒检测窗口期，并能筛查出隐匿性乙肝，在保障血液安全方面与现有的酶联免疫吸附试验（ELISA）具有很重要的互补作用［1-3］，然而对于核酸检测的质量控制还处于探索阶段。作者在核酸检测中进行了一些探索，在借鉴ELISA质量控制方法的基础上结合核酸检测自身的特点建立了以内对照为监测目标的质量控制体系，最终检测结果说明该质量控制体系能够保障核酸检测结果稳定有效。

1　材料与方法

1.1标本来源与检测2014年4～10月本血站行ELISA检测 （项目包括HBsAg、HCV抗体、HIV抗体、梅毒螺旋体抗体）且ALT阴性标本8993份，每份标本5mL，采用非可替EDTA-K2分离胶抗凝管，标本采集后4小时内离心分离血清，标本检测采用6混样同时检测HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA，检测结果阴性的混样池（pool）内所有标本均判为阴性，对阳性的pool进行单检拆分，如果阳性pool内所有标本单检拆分结果均为阴性则pool内所有标本均判为阴性，此pool为无效拆分pool，单检拆分时有标本为阳性结果的pool为有效拆分pool，所有检测在7天内完成。

1.2试剂与仪器Cobas®TaqScreen MPX核酸检测试剂盒（瑞士罗氏公司，批号：S00984，S00979）、50IU/mL HBV DNA质控品、50IU/mL HCV RNA质控品、200IU/mL HIV RNA质控品 （北京康彻斯坦公司，批号：201404001）、Cobas s201核酸检测系统（瑞士罗氏公司）。

1.3质量控制方法每批检测阴阳性对照及内对照必须符合试剂盒说明书要求，能检出HBV DNA质控品、HCV RNA质控品、HIV RNA质控品，以最初两天所有pool内对照CT求平均值（）和标准差（s），以±3s为质控上下限。控制后面1个月所有实验，内对照CT＞+3s为失控，此pool检测结果无效，CT＜-3s为告警，此pool检测结果有效，但必须进行关注，1个月结束。以本月所有内对照CT求和s，用与前面相同的方法控制以后所有实验。

2　结果

2.1核酸筛查结果共检测2592个pool，8993份标本，其中阳性pool 25个，pool阳性率0.96%，共有效拆分鉴定16个pool，9个pool未拆分成功，有效拆分率64.0%，经拆分共16份标本阳性，鉴定结果均为HBV DNA阳性，核酸检测总阳性率1.78‰。

表1　6～10月内对照CT变化情况

图1　5月质控图

图2　6～10月质控图

3　讨论

核酸检测从在血液系统试点到不断推进已有2年多时间，至今全国还没有形成成熟统一的质量控制方法，深圳血液中心庄乃保等［4］曾经通过检测HBV DNA质控品使用即刻法对核酸检测进行质量控制，但HCV RNA、HIV RNA并没有HBV DNA质控品稳定性高，因此对于HCV RNA、HIV RNA质控品是否可以借鉴与HBV DNA质控品相同的方法还需更多的实验。山东血液中心的张妍等［5］通过观察核酸检测过程中多项指标的变化情况对质量进行持续监测。在总结各种质量控制方法的优缺点和分析核酸检测自身特点的基础上，作者对核酸检测的质量控制进行了一些探索：由于核酸检测的过程中内对照和标本在相同的条件下进行提取和扩增，因此内对照提取和扩增情况可以很好地反映目的基因的提取和扩增情况，由于提取和扩增条件受环境影响较小，因此内对照扩增相对稳定，所有pool内对照CT的CV仅为1.21%，根据这些特点作者建立了以内对照CT为监控目标的质控法。本质量控制体系监控结果显示：6月以来共3个pool内对照CT＜-3s，与ELISA方法的质控判断标准不同，此pool结果有效，但必须作为告警点，同时注意观察是偶发还是系统误差造成，共5个pool内对照CT＞+3s，此pool结果无效，提取或者扩增抑制物对标本的污染、随机误差、仪器运行中的任何异常等均可造成这一结果。

本文共检出阳性pool 25个，有效拆分鉴定16 个pool，有效拆分率64.0%，高于山东血液中心的结果［5］，16份阳性标本经鉴定均为HBV DNA阳性，核酸检测总阳性率1.78‰，与国内其他血液系统的结果比较一致［1，3］，从核酸检测的结果来看，本质量控制方法能够保障核酸检测结果稳定有效。

［1］郑优荣，梁浩坚，李仲平，等.核酸检测技术在广州地区献血者血液筛查中的应用.中国输血杂志.2013，26（12）:1211 ［2］邹峥嵘，谢云峥，伍晓菲，等.上海地区无偿献血者乙型肝炎病毒隐匿性感染情况和突变分析.中国输血杂志，2013，26（8）:701

［3］安万新，邓雪莲，梁晓华，等.大连市血液中心 HBsAg阴性献血者 HBV感染的确认与 HBV核酸检出效率的评估.中国输血杂志，2014，27（3）:268

［4］庄乃保，叶贤林，李活，等.血液乙型肝炎核酸筛查质量控制方法的研究.中国输血杂志，2008，21（11）:844

［5］张妍，唐建华，李英莲，等.核酸检测实验室常用质量监控指标的探讨.中国输血杂志，2014，27（6）:620