温度与抗凝剂对假性血小板减少的影响

刘晓燕，周灵玲，胡晓蕾（丽水市中心医院，浙江 丽水323000）

温度与抗凝剂对假性血小板减少的影响

刘晓燕，周灵玲，胡晓蕾
（丽水市中心医院，浙江 丽水323000）

目的探讨温度和抗凝剂对假性血小板减少（PTCP）的影响。方法 选择确定为假性血小板减少的6例，每例采2管EDTA抗凝血（E1，E2）和1管枸橼酸钠抗凝血（C1），其中E2管采血后置37℃水浴孵育15分钟后置室温，其余两管（E1和C1）采血后直接置室温测，在采血即时及15、30、45、60、90、120分钟后用仪器计数各管血小板数，比较不同抗凝剂在室温下，以及统一抗凝剂（EDTA抗凝）在37℃水浴15分钟后和在室温下的血小板计数差异。结果EDTA抗凝剂和枸橼酸钠抗凝剂在各时间点血小板计数值差异无统计学意义（均P＞0.05）；在15分钟内，两组血小板计数均维持在真值的80%左右；EDTA抗凝血在37℃水浴后和在室温下直接测定比较，15分钟内两者均可以将血小板计数保持在真值的80%以上，超过15分钟，在室温下测定的血小板计数下降非常明显（P＜0.05或P＜0.01），而37℃水浴后的血小板计数则可以在2小时内计数保持真值的80%以上。结论对于不能即时检测、手工检测以及冬季送检的标本，在37℃水浴15分钟后再测定可以避免PTCP的发生。

假性血小板减少；血小板聚集；EDTA；枸橼酸钠；温度

假性血小板减少（pseudothrombocytopenia，PTCP）是由于血小板聚集导致仪器计数血小板数减少的假象，由Mant等［1］1975年首次报道。国内大部分报道认为PTCP为EDTA依赖性［2-3］，改用枸橼酸钠抗凝标本即可排除血小板聚集的影响而得到准确的计数，这一方法甚至被应用于临床，但作者在工作中发现枸橼酸钠抗凝血血小板易聚集，并且冬天多见。国外近年来也有非抗凝剂依赖性PTCP的病例报道［4］。本文重点观察比较EDTA、枸橼酸钠不同抗凝剂及不同温度对PTCP的影响，以探讨较准确的血小板计数方法。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2012年12月～2014年2月在本院检查血常规、标本经涂片染色镜检发现血小板聚集、排除抽血不当等原因，确认为假性血小板减少的病例6例。所有观察对象在知情同意原则下参与本次测试。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂Beckman Coulter LH750全自

动血细胞分析仪及配套试剂和质控品；OLYMPUS显微镜；K2EDTA和枸橼酸钠抗凝管由BD公司提供。

1.2.2实验方法每例分别采集EDTA抗凝血2管（E1，E2）、枸橼酸钠抗凝血（1:9）1管（C1），采血后用仪器即时（5分钟内）检测三管的血小板数，后将E1，C1静置于25℃，E2置37℃水浴15分钟后，分别于采血后15、30、45、60、90、120分钟仪器计数血小板数，并同时推片染色镜检血小板聚集情况及手工计数血小板。

1.3统计学处理 用SPSS11.5统计软件进行分析，计量资料采用t检验。

3　结果

2.1总体情况采血后2小时内，室温静置的EDTA和枸橼酸钠抗凝血血小板计数越来越少，镜下聚集越来越明显，在15分钟内血小板计数下降最快，但还基本维持在正常参考范围内；37℃水浴15分钟后置室温的EDTA抗凝血血小板计数稳定在正常参考范围内 （＞100×109/L）。详见图1。

2.2抗凝剂的影响对6例PTCP患者进行分析，以血小板手工计数值为真值，计算血小板比值（血小板数比值=实际测得血小板数/真值），可见各时间点两种抗凝剂抗凝血的仪器血小板计数值无统计学差异（P＞0.05）；在15分钟内，两组血小板计数均维持在真值的80%左右，详见表1。

图1　血小板随时间变化关系图

表1　室温下EDTA与枸橼酸钠对血小板计数影响的比较（±s，%）

表1　室温下EDTA与枸橼酸钠对血小板计数影响的比较（±s，%）

抗凝剂　n　15min　30min　45min　60min　90min　120min EDTA　6　0.85±0.15　0.71±0.21　0.54±0.23　0.35±0.21　0.28±0.21　0.21±0.18枸橼酸钠　6　0.78±0.16　0.58±0.16　0.39±0.16　0.33±0.12　0.33±0.15　0.33±0.15

2.3温度的影响EDTA抗凝血在37℃水浴孵育15分钟后再进行血小板计数，可以在2小时内使计数准确性保持在真值的80%以上，而同样经EDTA抗凝血在室温中进行血小板检测，则只有在抽血后15分钟内可以将计数保持在真值的80%以上，超过15分钟后，与37℃水浴后比较，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），详见表2。

表2EDTA抗凝剂在37℃水浴后与直接室温中对血小板计数的影响（%）

与室温比较*P＜0.05，**P＜0.01

3　讨论

据国际血液学标准化委员会（ICSH）1993年的建议，血细胞计数用EDTA盐抗凝。因此，引起假性血小板减少的报道最多见的是EDTA依赖性，但是EDTA假性血小板减少的机制目前还不清楚，探索PTCP的原因对于PTCP的及时发现、解决以及临床意义的研究均大有裨益。

本文6例PTCP患者在血液离体后，血小板发生聚集，血小板计数随着时间的延长逐渐降低至100×109/L以下。不同的抗凝剂 （EDTA和枸橼酸钠）在室温下，实验显示各时间点血小板计数值无统计学差异，且在15分钟内，两组血小板计数均维持在真值的80%左右；而将经EDTA抗凝血分别置于37℃水温和室内温度中，发现经过37℃水浴后的血小板计数在2个小时内血小板计数都可以保持真值的80%，而直接放置室内的血小板计数则只在15分钟内可以保持真值的80%，两种温度下比较，除了15分钟内血小板计数差异无统计学意义，其余时间段，室温组血小板降低明显，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

本次检测结果颠覆了“改用枸橼酸钠抗凝标本即可排除血小板聚集的影响而得到准确的计数”这一结论，提示用枸橼酸钠抗凝来解决PTCP的方法并不准确。血液标本在抽血15分钟内血小板计数尚可以维持在真值的80%以上，但超过15分钟即可能造成PTCP，对于不能即时检测、手工检测以及冬季送检的标本，在37℃水浴15分钟后再测定可以避免PTCP的发生。遗憾的是，本文没有探讨经枸橼酸钠抗凝血在不同温度下的血小板计数情况，所以结论不够全面，需要进一步探讨。

［1］ Mant MJ，Doery JCG，Gauldie J，et al.Pseudothrombocytopenia due to platelet aggregation and degranulation in blood chelated in EDTA.Scand J Hematol，1975，15（3）:161

［2］张建萍.EDTA依赖性假性血小板减少症及检测方法分析.重庆医学，2010，39（20）:2782

［3］李芳，杜宗孝.乙二胺四乙酸二钠相关假性血小板减少现象及纠正方法分析.宁夏医学杂志，2011，33（2）:169

［4］KurataY，HayashiS，JouzakiK，etal.Fourcasesof pseudothrombocytopenia due to platelet cold agglutinins. Rinsho Ketsueki，2006，47（8）:78