非小细胞肺癌患者术后循环肿瘤细胞的检测及其意义

赵士伟，楚慧丽，李艳云，陈 雯，毕经旺

肺癌是我国病死率最高的癌症之一，其发病率呈逐年上升趋势。非小细胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）患者约占肺癌的85%，且多数患者在疾病进程中出现转移和复发，严重影响患者预后。其中，循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）的存在与转移复发有很大相关性，提示在常规的影像学和显微镜下诊断的临床转移之前可能已有肿瘤微转移的发生。笔者于2013年10月—2014年4月利用免疫磁珠阴性富集法对35例NSCLC患者术后外周血中CTCs进行检测，并探讨CTCs与临床分期的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象 选择在笔者所在医院首次手术治疗并经病理确诊的肺癌患者35例。男19例，女16例；年龄43～80岁，中位年龄58岁。其中腺癌31例，鳞癌4例。均经根治手术治疗，术后原发肿瘤、淋巴结、转移（Tumor，Node，Metastatis，TNM）分期为Ⅰ期13例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例。

1.2 方法 所有研究对象在手术后第1天采用真空采血管采集肘正中静脉血3.2ml（不含抗凝剂）于ACD抗凝管中。采血后应在48 h内完成所有实验。采用免疫磁珠富集技术分离CTCs，用荧光原位杂交和免疫荧光染色鉴别CTCs，在荧光显微镜下观察并统计CTCs。判读标准为DAPI＋（单核），细胞核内FISH信号点＞2个，且无血源性白细胞表面抗原着色，即 CD45－。外周血中 CTCs计数≥2 个／3.2ml定义为CTCs阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0统计学软件分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期各组间的CTCs阳性率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

35例NSCLC患者术后外周血中CTCs阳性率为28.6%（10／35）。Ⅰ期阳性率为 7.7%（1／13），Ⅱ期为 33.3%（2／6），Ⅲ期为43.8%（7／16）。阳性率Ⅲ期与Ⅰ期相比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。具体检测结果见表 1。

表 1 35例NSCLC患者术后外周血中CTCs检测结果

3 讨论

循环肿瘤细胞（CTCs）是指由原发灶或转移灶脱落入血的肿瘤细胞，由Ashworth于1869年首次提出[1]。绝大部分的CTCs可以由机体自身免疫系统清除，但是极少数的CTCs可以是逃离清除，最后定植在组织器官内从而形成转移病灶。对于肺癌微转移患者，仅从影像学无法找到病灶。CTCs对于微转移的诊断，可以提高肺癌治愈率，改善患者预后。Okumura 等[2]研究表明，在可手术切除的肺癌患者中，96.7%的患者在肺静脉血中可检测出CTCs，29.4%的患者可在外周血中检测出CTCs。

由于CTCs在外周血中数量较少，所以从采集血中分离富集CTCs是进行检测的关键。目前用于循环肿瘤细胞的检测方法主要有免疫磁珠阳性富集分离法、流式细胞检测法以及多聚合酶链式反应核酸扩增法等[3]。

本研究采用免疫磁珠阴性富集法进行富集，通过去除血浆，裂解红细胞，利用表面包被磁珠的抗白细胞共同抗原的抗体去除白细胞，从而富集得到稀有细胞，最后在荧光显微镜下进行鉴定判读。本组35例应用上述方法检测NSCLC患者外周血中CTCs阳性率为28.6%。对于肺癌患者，随着肿瘤的进展或远处转移，CTCs数量明显增加[4]。存在高水平的CTCs数量提示有远处转移的风险更高，因此对于原发性肺癌CTCs水平可作为评判远处转移的预后指标[5]。血液中检出的CTCs数量与肿瘤分期具有明显的相关性。本文结果也表明，CTCs阳性率与肿瘤TNM分期相关，随着分期进展，CTCs阳性率也相应增高。因此，外周静脉血中CTCs的水平应作为临床分期的一个必要条件，若发现术后患者存在高水平的CTCs，则应采取积极的治疗措施。通过检测CTCs来判断是否存在复发和转移，进而重新确定临床分期、评估预后、并用来指导个体化治疗[5，6]。这对于完善NSCLC术后的综合治疗，探讨NSCLC术后复发的机制，降低术后肿瘤复发及转移率，提高生存率具有重要的意义。

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