人乳头瘤病毒16型感染及其高危因素分析

段蒙，陈秀杰，曲芃芃

人乳头瘤病毒16型感染及其高危因素分析

段蒙1，2，陈秀杰1，曲芃芃2△

目的 检测天津市市区健康筛查女性中人乳头瘤病毒（HPV）16型感染率，分析HPV16感染的危险因素。方法 通过问卷调查方式对2 000例天津市市区健康普查女性进行相关因素调查，同时收集入组女性的宫颈脱落细胞。通过巢式PCR扩增和焦磷酸测序技术进行HPV型别检测，采用χ2检验和多因素Logistic回归分析HPV16感染的高危因素。结果 2 000例筛查标本中，HPV阳性271例（13.55%），其中前3位为HPV16型阳性占39.5% （107/271），HPV58型阳性占15.13%（41/271），HPV18型阳性占9.59%（26/271）。HPV16感染率吸烟者高于不吸烟者，首次性交年龄≤25岁者高于＞25岁者，性伴侣数≥2者高于＜2者，怀孕次数≥2者高于＜2者，流产次数≥3者高于＜3者，避孕方式为非避孕套者高于避孕套者（均P＜0.05）；HPV16感染率在不同年龄、饮酒史、教育水平、以前妇科体检等因素间差异无统计学意义。吸烟史和首次性交年龄≤25岁为HPV16感染的独立危险因素。结论 天津市市区健康普查妇女HPV感染以HPV16型最常见。避免高危因素的暴露，制止女性过早发生性行为，同时改变不良生活习惯是预防HPV16感染及降低宫颈癌发生的有效措施。

人乳头瘤病毒16；感染；宫颈肿瘤；问卷调查；危险因素；焦磷酸测序技术

宫颈癌是全球范围导致女性死亡的第二大恶性肿瘤，严重威胁着妇女的生存健康，88%的死亡病例发生在肯尼亚、纳米比亚、泰国、中国等发展中国家［1］。人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是导致宫颈癌及宫颈上皮内瘤变（CIN）发生的主要病因，尤其是高危型人乳头瘤病毒（hr-HPV）的持续感染［2］。在不同的HPV型别中，HPV16是浸润性宫颈癌及其癌前病变最常见的型别，大约55%的宫颈癌组织中能检出 HPV16［3］。大多数感染HPV16的女性只是一过性的感染，并不会进展为宫颈癌，只有HPV16持续感染才会发生宫颈癌，研究表明造成高危型HPV感染及持续感染的原因之一可能与宿主潜在相关危险因素暴露有关［4］。目前，大量研究多是关于高危型HPV感染高危因素的调查，对于某一易感型别的危险因素分析资料较少。鉴于高危型HPV感染相关因素的研究数据可能存在多个型别高危因素之间的干扰及地区的差异，不能确切分析某些高危因素是具体针对哪些型别的感染，缺乏特异性，并不能有效预防高致癌型别如HPV16、18的感染或持续感染的发生，因此本研究通过调查HPV16在天津市市区健康普查人群中的感染率，了解天津地区HPV16感染及其持续感染的高危因素。

1 对象与方法

1.1 研究对象及纳入标准 2013年3—7月对2 000例自愿参加“天津子宫颈癌HPV感染中瑞合作筛查项目”的天津市市区成年女性进行宫颈癌及HPV相关情况的问卷调查，同时收集宫颈脱落细胞进行HPV的检测。纳入研究的女性年龄24～72岁，中位年龄46岁，已婚占93.95%（1 879/2 000），离婚/丧偶/未婚（有性生活史）占6.05%（121/2 000）；汉族人数占96.50%（1 930/2 000），回族占2.75%（55/2 000），其余少数名族（包括满族、朝鲜族、哈尼族、蒙古族、壮族）占0.75% （15/2 000）。入选标准：智力健全，有性生活史，年龄20～75岁，目前未妊娠，无急性生殖道炎症，无宫颈切除和全子宫切除史，无盆腔放射治疗史。受检时处于非月经期，受检前24 h内未发生性行为，3 d内阴道未用药。本研究被调查对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂与仪器 微量样品基因组DNA提取试剂盒购自北京天根生化科技公司；PCR Master Mix（即dNTP，Taq DNA聚合酶和MgCl2预混试剂）购自Fermentas公司；PCR所用引物均由上海生工生物有限公司合成；GEL200凝胶成像仪（美国，柯达）；梯度96孔热循环仪（美国，ABI）；焦磷酸测序仪及相关试剂盒（德国，QIAGEN公司）。

1.2.2 DNA的制备 所有标本的基因组DNA均使用微量DNA提取试剂盒从宫颈液基细胞残留液中提取的，具体操作步骤按试剂盒所提供说明书进行，将提取的基因组DNA放于4℃用于检测分析。所有提取的DNA样本均经过PCR扩增β-globin基因（内参照）验证模板的质量并验证PCR扩增体系的可行性。

1.2.3 HPV基因扩增 以提取的基因组DNA为模板，用巢式PCR（MY09/11，GP5+/6+）筛选出HPV阳性标本，引物序列见表1。首先用MY09/11通用引物进行扩增，对于MY09/ 11 PCR阳性标本，以MY09/11 PCR扩增产物为模板，再进行GP5+/6+引物PCR。每次PCR均设立阳性对照和阴性对照。

Tab.1 The sequences of HPV general primers表1 HPV扩增通用引物MY09/11和GP5+/6+序列

1.2.4 焦磷酸测序 HPV阳性标本的PCR扩增产物直接用于焦磷酸测序。首先用BG03检测焦磷酸测序仪的运行状态，状态良好开始检测HPV阳性PCR产物。单链序列模板转移到含有测序引物的96孔板中，20种HPV型别在4个不同的序列反应中分析。HPV序列用PyroMark Gold Q96试剂在PSQ 96 MA系统中完成，结果由人工根据各碱基序列在PSQ 96 MA软件中分析。

1.2.5 调查方式 采用调查问卷的方法对被调查对象进行资料收集。调查问卷为自行设计的“天津子宫颈癌HPV感染筛查调查问卷”。问卷内容包括调查对象基本情况，月经、婚育及性行为史等情况。由专业人员现场进行一对一询问，填写并收集完整的调查问卷。

1.3 统计学方法 本研究采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析，组间HPV16感染率的比较采用χ2检验，将其中P＜0.05的变量采用多因素非条件Logistic回归模型进行分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV检测结果 2 000例筛查标本中，HPV阳性271例（13.55%），其中前3位为HPV16型阳性占39.5%（107/271），HPV58型阳性占 15.13%（41/ 271），HPV18型阳性占9.59%（26/271）。

2.2 不同因素间HPV16型感染情况比较 HPV16感染均发生在汉族和已婚妇女中。HPV16感染率吸烟者高于不吸烟者，首次性交年龄≤25岁者高于＞25岁者，性伴侣数≥2者高＜2者，怀孕次数≥2者高于＜2者，流产次数≥3者高于＜3者，避孕方式为非避孕套者高于避孕套者（均P＜0.05）；HPV16感染率在不同年龄、饮酒史、教育水平、以前妇科体检等因素间差异无统计学意义，见表2。

Tab.2 Potential risk factors for HPV16 infection表2 HPV16型感染的相关因素分析 例（%）

2.3 影响HPV16感染相关因素的Logistic回归分析 以是否为HPV感染（是=1，否=0）为因变量，以吸烟史、首次性交年龄≤25岁、性伴侣数≥2、怀孕次数≥2、流产次数≥3和避孕方式为避孕套（以上均赋值是=1，否=0）为自变量，进行多因素非条件Logistic逐步回归模型分析，纳入标准为P＜0.05，排除标准为P≥0.05，结果显示，吸烟史和首次性交年龄≤25岁为HPV16感染的独立危险因素，见表3。

Tab.3 Logistic regression analysis of risk factors for HPV16 infection表3 HPV16感染相关因素的Logistic回归分析

3 讨论

研究表明大部分的性活跃女性感染过HPV16［5］，仅有一小部分HPV16感染者会发展成持续感染，继而发生宫颈癌，提示HPV16的感染及持续性感染是多种因素相互作用的结果。虽然针对HPV16感染的多价预防性疫苗已经问世，但是由于经济和疫苗不良反应等多因素影响，目前中国大陆地区并没有投入使用，而且这些疫苗对于已感染HPV16的女性没有清除作用，亦不能阻断HPV16的持续感染，故仅仅依靠目前研发的预防性疫苗降低宫颈癌的患病率预计耗时较长，因此，了解HPV16感染的高危因素并将干预措施普及化，从妇女自身主观方面预防其感染，可以达到降低宫颈癌发生的预期效果。

有流行病学研究表明，不同地区、人群HPV感染基因型的分布存在差异［6-7］，本研究结果显示，天津市市区以HPV16型感染最常见，其感染率为5.35% （107/2 000），HPV16型感染率的地区差异，考虑与地域、经济文化、工作性质等多因素有关。有研究显示70%的宫颈癌患者合并HPV16或18型感染，其中宫颈鳞癌多伴有HPV16型感染［8］，且宫颈鳞癌是子宫颈癌最常见的组织学类型，提示预防HPV16型感染，可以有效降低宫颈鳞癌的发生率。

本研究中虽然不同年龄间HPV16感染率差异无统计学意义，但20～30岁年龄组HPV16感染率在数值上最高，提示年轻女性易感染HPV16，与Baan⁃drup等［9］研究结果基本一致，这可能与该阶段女性处于性行为活跃期有关，年轻女性HPV16的易感也可能是宫颈癌年轻化的部分原因。另外，本研究结果显示，吸烟史、首次性交年龄、性伴侣数、怀孕次数、流产数及避孕方式与HPV16感染有关。吸烟和首次性交年龄≤25岁是HPV16感染的独立危险因素，与Vinodhini等［10］调查结果一致，但是性伴侣数并不是HPV16感染的危险因素，与国内其他多个地区研究结果并不相符［11］，可能与本研究仅分析HPV16单一型别感染因素有关。本研究中有吸烟史者发生HPV16感染的风险是无吸烟史者的1.965倍，可能与香烟烟雾中可溶性的致癌物质如尼古丁、可替宁等可直接作用于宫颈上皮细胞，从而影响宫颈上皮化生，损伤宫颈上皮细胞相关［10，12］，且香烟烟雾中的有害物质还可以改变宫颈上皮细胞内朗罕氏细胞、T淋巴细胞及免疫调节剂的密度，从而影响机体的体液和细胞免疫反应，增加HPV16感染的敏感性，使宫颈上皮易发生HPV16持续感染［12］。

由于25岁以下女性宫颈癌发生率及因宫颈癌造成的死亡率非常低，且有较高的假阳性筛查结果，此年龄段参与宫颈癌HPV筛查弊大于利，推荐25岁之前主要以细胞学筛查为主，HPV筛查应从25岁以后开始［13］。本研究为调查所有年龄人群HPV16的分布情况，对25岁之前有性生活的年轻女性也进行了HPV筛查，发现首次性交年龄≤25岁的女性HPV16感染的风险较高，其原因可能是年轻女性子宫颈生理不成熟，宫颈阴道部的移行带扩大易造成上皮轻微损伤、无周期性孕激素分泌等生理特点，为HPV16侵入宫颈及驻留提供有利条件，易造成HPV16感染及持续感染。且首次性交年龄较小的女性，因缺乏对HPV的认识，不了解怎样预防性传播疾病尤其是HPV感染，也可能会从对方感染HPV16。Giuliano等［14］研究显示，每年约6%的男性感染HPV16型，且男性不具备通过自身免疫清除病毒的能力，这也可能是年轻女性HPV16易感的因素之一。对于已感染HPV16的女性，应尽可能避免暴露于高危因素，从而阻止HPV16的持续感染或再感染。

人群筛查和宫颈癌的早期发现、早期治疗是降低子宫颈癌发病率和死亡率最有效的方法，尽管宫颈癌的筛查可以降低宫颈癌发生的危险，却不能避免HPV16的感染，不能从病因上减少宫颈癌的发生。因此，避免高危因素的暴露，制止女性过早发生性行为，同时改变不良生活习惯是预防HPV16感染及降低宫颈癌发生的有效措施。

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（2014-07-24收稿 2014-12-18修回）

（本文编辑 陈丽洁）

Incidence and risk factors of human papilloma virus type 16 infection

DUAN Meng1，2，CHEN Xiujie1，QU Pengpeng2△
1 Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；2 Tianjin Central Hospital of Gynecology Obstetrics
△Corresponding Author E-mail：qu.pengpeng@hotmail.com

Objective To investigate the incidence and risk factors of human papillomavirus type 16（HPV16）infec⁃tion among women through health screenings in Tianjin urban area.Methods A total of 2 000 women from Tianjin urban area were recruited for this study，and potential risk factors were investigated by questionnaire as well as by collecting cervi⁃cal exfoliated cells from the participants.HPV type was examined using polymerase chain reaction and pyrosequencing tech⁃nology，then the risk factors of HPV16 infection were examined by chi square test and the multiple factor logistic regression analysis.Results Among those 2 000 women who received health screenings，a total of 271 cases were HPV positive （13.55%）.HPV16 accounts for the most common human papillomavirus types（39.5%，107/271）while HPV58 account for 15.13%（41/271）and HPV18 account for 9.59% （26/271）.Factors related to HPV16 infection were investigated include smoking history，initial age of sex（＞25 years old or not），number of pregnancies（≥2 or not），number of sexual partners（≥2 or not）and contraception measures（condom or other ways）with χ2=6.268，8.540，4.951，7.123，6.053，5.019，respectively.（P＜0.05）.Age，alcohol intake，education level and previous gynecologial examination did not differ significantly among HPV16 positive patients compared to those with negative HPV.Multiple factor Logistic regression model analysis showed that the independent factors were smoking history and initial age for sex（≤25 years old）（P＜0.05）.Conclusion HPV16 is the most common type of cervical infection among women in Tianjin urban area.Changing inappropriate sexual behavior and smoking cessation are effective measures to prevent HPV16 infection and reduce incidence of cervical cancer.

human papillomavirus 16；infection；uterine cervical neoplasms；questionnaires；risk factors；pyrosequencing

R711.32，R737.33

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.04.012

天津市科技计划（09ZCZDSF0390）

1天津医科大学（邮编300070）；2天津市中心妇产科医院

作者信息：段蒙（1989），女，硕士在读，主要从事妇科肿瘤研究

△E-mail:qu.pengpeng@hotmail.com