燮理糖肾颗粒降糖作用的实验研究

赵 蓬，指导:张柏林

(天津市第一医院中医科，张柏林名中医工作室，天津300232)

2型糖尿病是由遗传因素和环境因素共同作用导致的慢性、进展性疾病。研究显示，高血糖毒性作用是心血管疾病的独立危险因素，随着疾病的进展，患者微血管和大血管并发症风险都相应增加，是中、老年致残、致死不可忽视的原因。临床研究［1-2］认为，糖尿病是冠心病的急危症，冠心病是2型糖尿病主要死亡原因之一，糖尿病患者80%死于心血管事件，心肌梗死更是糖尿病患者死亡的主要原因，急性心肌梗死中糖尿病患者达20%以上。本研究以中医肾主藏经泻浊理论为基础，配制燮理糖肾颗粒，观察该方药的降糖效果。

1 材料与方法

1.1 动物 自发性糖尿病KKAy小鼠、C57BL/6小鼠:均由北京华阜康生物科技股份有限公司提供〔许可证编号:SCXK(京)2009-004〕;Wibtat种大鼠、昆明种小鼠:均由天津药物研究院动物实验室提供(合格证号:津实动质R字第001号)。

1.2 药物

1.2.1 燮理糖肾颗粒 源于全国名老中医张柏林教授多年来治疗糖尿病肾病的经验方，采用广东一方制药有限公司提供的颗粒制剂，组方为淫羊藿20 g，熟地黄 10 g，黄柏 10 g，知母10 g，泽泻10 g，黄连10 g，丹参20 g，益母草20 g。

1.2.2 盐酸二甲双胍 天津中新药业集团有限公司(批号:D3813004);四氧嘧啶，Sigma产品(批号:122H33211)，临用前用生理盐水配成2%的液体;盐酸苯乙双胍，浙江亚太药业股份有限公司(批号:031101);优降糖(格列本脲片)，天津力生制药股份有限公司(批号:0309019)。

1.3 试剂及仪器 血糖试纸:ARKRAY，Factoryic生产(批号:9B5B4S);日本京都血糖仪:日本ARKRAY，inc株式会社产品。

1.4 模型方法

1.4.1 对自发性糖尿病KKAy小鼠血糖的影响 选用健康雄性KKAy小鼠，体质量25～35 g，非进食状态取血测血糖，选取血糖值在14.5～28.3 mmol/L区间的小鼠，按血糖高低，随机均衡分为模型对照组，燮理糖肾颗粒4、8、16 g生药/kg剂量组，盐酸二甲双胍260 mg/kg，每组12只，另用10只C57BL/6小鼠做正常对照组，灌胃给药，给药容积为20 mL/kg，正常及模型对照组给予等容量0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，同时喂KKAy小鼠高糖高脂饲料，喂食C57BL/6小鼠正常饲料，每周尾静脉采血用血糖试纸测定血糖(给药后1 h)1次，连续4周。

1.4.2 对四氧嘧啶致大鼠高血糖的影响 选用健康Wibtat种大鼠，体质量180～220 g，雌雄兼用，禁食不禁水18 h后，尾静脉注射2%四氧嘧啶50 mg/kg，72 h后禁食4 h，眼眶取血测血糖，选取血糖值＞11 mmol/L的大鼠，随机分为模型对照组，燮理糖肾颗粒4、8、16 g生药/kg剂量组，盐酸苯乙双胍50 mg/kg组，每组10只(雌性4只，雄性6只)，另取正常大鼠做为正常对照组。灌胃给药，1次/d，连续2周，灌胃容积均为10 mL/kg，正常及模型对照组给予等剂量0.5%CMC-Na，分别于给药后第1、2周测定禁食4 h后的大鼠血糖［3］。

1.4.3 对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响 选用健康昆明种小鼠，体质量20～22 g，雌雄兼用，禁食不禁水18 h后，尾静脉注射2%四氧嘧啶60 mg/kg，72 h后禁食4 h，眼眶取血测定血糖，选血糖值＞11 mmol/L的小鼠，随机分为模型对照组，燮理糖肾颗粒4、8、16 g生药/kg剂量组，盐酸苯乙双胍100 mg/kg组，每组12只，雌雄各半，另取10只正常小鼠做为正常对照组。灌胃给药，1次/d，连续1周，灌胃容积均为20 mL/kg，正常及模型对照组均灌胃给予等容量0.5%CMC-Na，末次给药后测定大鼠血糖［3］。

1.4.4 对正常大鼠血糖的影响 选用健康Wibter种大鼠，体质量180～220 g，雌雄各半，禁食4 h后，眼眶取血测血糖，根据血糖值，随机分为正常对照组，燮理糖肾颗粒4、8、16 g生药/kg剂量组，优降糖50 mg/kg组，每组10只，雌雄各半。灌胃给药，1次/d，连续2周，灌胃容积为10 mL/kg，正常对照组给予等容量0.5%CMC-Na，分别于末次给药后4 h测定血糖。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0软件，实验数据以均数±标准差(±s)表示，2组数据比较采用t值法，有等级关系的采用等级序值法，P＜0.05为有统计学意义。

2 实验结果

2.1 对自发性糖尿病KKAy小鼠血糖的影响 见表1。

2.2 对四氧嘧啶致高血糖大鼠血糖的影响 见表2。

2.3 对四氧嘧啶致小鼠高血糖的影响 见表3。

2.4 对正常大鼠血糖的影响 见表4。

表1 对自发性糖尿病KKAy小鼠血糖的影响(±s)mmol/L

表1 对自发性糖尿病KKAy小鼠血糖的影响(±s)mmol/L

注:与正常组比较，##P ＜0．01;与模型组比较，△P ＜0．05，△△P ＜0．01

组 别 剂量/(g生药/kg) n 给药前 给药1周 给药2周 给药3周 给药4周正常组 — 10 5．82 ±0．46 6．00±0．57 6．21±0．45 6．09±0．42 6．25 ±0．42模型组 — 12 20．79±4．01## 21．58 ±3．89## 22．18±3．84## 22．58±4．10## 22．97±3．80##燮理糖肾组 4 12 20．92 ±4．17 20．46 ±3．85 19．94 ±4．04 19．59 ±4．21 19．33 ±5．12燮理糖肾组 8 12 20．83 ±4．11 19．88 ±4．06 19．09 ±3．74 17．98 ±3．95△ 16．53 ±3．48△△燮理糖肾组 16 12 20．88 ±4．15 19．01 ±4．48 17．94 ±4．15△△ 16．38 ±4．23△△ 15．56 ±3．64△△二甲双胍组 0．26 12 20．94 ±4．14 20．00 ±3．46 17．80 ±3．61△△ 16．79 ±3．49△△ 15．40 ±3．05△△

表2 对四氧嘧啶致大鼠高血糖的影响(±s，n=10)mmol/L

表2 对四氧嘧啶致大鼠高血糖的影响(±s，n=10)mmol/L

注:与正常组比较，##P ＜0．01;与模型组比较，△△P ＜0．01

组 别 剂量/(g生药/kg) 给药前 给药1周 给药2周正常组 — 5．88±0．61 6．00±1．08 6．58 ±0．59模型组 — 22．61±2．82## 20．31±1．83## 20．08 ±2．50##燮理糖肾组 4 22．21 ±2．81 16．47 ±5．77 16．50 ±4．98燮理糖肾组 8 22．69 ±2．58 17．54 ±3．81 13．75 ±4．92△△燮理糖肾组 16 22．78±2．01 16．08±3．79△△ 12．18±2．93△△苯乙双胍组 0．05 22．44±4．19 11．74±4．86△△ 10．93±3．63△△

表3 对四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影响(±s)mmol/L

表3 对四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影响(±s)mmol/L

注:与正常组比较，##P ＜0．01，与模型组比较，△P ＜0．05，△△P ＜0．01

组 别 剂量/(g生药/kg) n 给药前 给药1周正常组 — 10 6．43±1．33 6．95±1．25模型组 — 12 18．97±5．07 16．46±4．38##燮理糖肾组 4 12 18．84 ±5．49 13．02 ±3．93燮理糖肾组 8 12 19．26 ±5．11 11．87 ±3．50△燮理糖肾组 1 6 12 19．06 ±4．96 11．55 ±2．78△苯乙双胍组 0.10 12 19．03 ±5．24 10．01 ±2．45△△

表4 对正常大鼠血糖的影响(±s，n=10)mmol/L

表4 对正常大鼠血糖的影响(±s，n=10)mmol/L

注:与正常组比较，##P ＜0．01

组 别 剂量/(g生药/kg) 给药前 给药1周 给药2周正常组组 — 6．18±0．54 6．20±0．50 6．49±0．67燮理糖肾组 4 6．35 ±0．55 6．44 ±0．61 6．58 ±0．71燮理糖肾组 8 6．46 ±0．60 6．37 ±0．61 6．59 ±0．71燮理糖肾组 16 6．32 ±0．57 6．57 ±0．59 6．65 ±0．62优降糖组 0．05 6．43 ±0．70 4．38 ±0．77## 4．55 ±0．70##

3 讨论

慢性持续性高血糖造成的糖毒性可使糖尿病并发症风险增高，包括大血管及微血管病变［4］，糖尿病与早期心血管疾病间的关系也得到确认［5］，降糖是减少糖尿病患者心血管并发症的重要前提。本实验显示，燮理糖肾颗粒各剂量组对自发性糖尿病KKAy小鼠、四氧嘧啶致大鼠、小鼠的高血糖有明显的降低作用;并呈现出剂量、时间依赖性，提示燮理糖肾颗粒具有良好的降糖治疗效果。同时，对正常大鼠的血糖无明显影响。

历代医家多以为消渴病的发生与阴虚密切相关，多年来滋补阴液一直是治疗的重要法则。笔者通过临床观察认为，阳气不足在消渴病的发生发展中同样发挥了重要作用，临床中统计气阴两虚和阴阳俱虚型患者占92.74%［6］。消渴总因禀赋不足，或过食肥甘厚味，情志失调，劳逸失度，日久化成痰、浊、热、瘀，以气阴两虚为本，浊毒内停为标，病程迁延发展，至终末期的心、脾、肾俱衰，浊毒肆虐，毒损肾络，病情危笃［7-9］，故在治疗上要阴阳虚实并重。

中医认为，肾的主要功能是藏精和泻浊，柯琴云“精者，属癸，阴水也，静而不走，为肾之体;溺者，属壬，阳水也，动而不居，为肾之用。是以肾主五液，若阴水不守，则真水不足;阳水不流，则水邪逆行。”所以，藏精与泻浊是“一阴一阳，天地之道;一开一合，动静之机”(清·罗美《古今名医方论》)在肾的具体体现。血糖本是水谷精微，是人体化生气血津液的物质基础，藏于肾则为精，而使人有生长壮老已的生命现象。但是，如果血糖过高则为浸淫人体的致病之邪，其道理有如《金匮要略·脏腑经络先后病脉证第一》所言:“风气虽能生万物，亦能害万物，如水能行舟，亦能覆舟。”和则化，乖则变，变则眚［10］。血糖超过了肾糖阈则从尿中排出而出现尿糖，2型糖尿病随着病程的发展，肾失封藏，精微下泻，肾脏的“藏精泻浊”功能受损。“浊阴出下窍”，排出的尿糖，尿蛋白则为病理的败浊之气。中医治疗强调因势利导，要取邪气易于祛除之法，使邪有出路［11］。

近年来，钠-葡萄糖协同共转体(SGLTs)的发现及其抑制剂的应用，强调了肾脏在糖代谢中的重要作用。SGLTs参与转运葡萄糖，SGLT1主要在胃肠表达，完成葡萄糖吸收;SGLT2在肾近曲小管SI段表达，以钠-葡萄糖1∶1比率转运葡萄糖，介导了90%肾小球滤过葡萄糖的重吸收，促进肾小管上皮细胞SGLT 对葡萄糖转运［12-13］。研究［14］表明，选择性抑制SGLT2减少葡萄糖的重吸收，增加尿糖排泄，有助于糖尿病的血糖控制。SGLTs抑制剂抑制了近端肾小管对糖的重吸收，降低血糖，为中医从肾论治糖尿病提供了现代医学依据。补肾即补益肾元，泄浊即通腑泄浊，治病者平治于权衡，补肾泄浊即是在虚实之间探求平衡之态［15］，补肾泄浊法能明显改善肾功能指标［16］，以循证医学Meta分析为依据，有改善整体临床症候和降低血尿素氮和血肌酐的良好作用［17-18］。

消渴之疾，治一则偏，阴阳兼调则全［19］。张柏林主任针对其虚实并见、气阴两虚、瘀阻肾络的特点，以补肾泄浊为治疗法则，从中医“肾藏精、泻浊”理论出发，配制燮理糖肾颗粒。该方以淫羊藿配合熟地黄为君，益阴养血与补气温阳两法合用，填补肾精、补肾益阴;知母、泽泻、黄柏、黄连等为臣以清热泄浊，润燥坚因;因血瘀贯穿于糖尿病的始终，丹参活血祛瘀，益母草活血行水，故选丹参和益母草相配疏瘀泄浊为佐。全方虚实兼顾、标本兼治，使肾精得固，瘀浊得去。本实验证实了燮理糖肾颗粒各剂量组对不同造模的糖尿病鼠有明显的降低血糖的作用，但对正常大鼠的血糖无明显影响，有助于2型糖尿病的治疗。本实验为今后进一步研究补肾泄浊法治疗糖尿病的临床应用提供了实验依据。

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