蒙药沙棘中沙棘黄酮对于放射性造血损伤防护作用的研究△

2015-07-12卫守喆刘佳佳

中国民族医药杂志 2015年11期

刘伟卫守喆刘佳佳

(内蒙古自治区人民医院，内蒙古呼和浩特 010170)

由于传染性疾病的逐渐控制，人类平均寿命不断延长，恶性肿瘤对人类的威胁日益显著。随着疾病谱的变化，恶性肿瘤已经成为目前死亡的常见原因之一，是男性的第二位，女性的第三位死因。据世界卫生组织数据表明，到2013年为止，全球每年新增肿瘤患者有1400 多万例，死亡人数820 万人。我国每年新增肿瘤人数约200 万，死亡约140 万。据Tubiana1999年报道，45% 的恶性肿瘤可以治愈。其中手术治愈22%，放射治疗18%，化学药物治疗5%。同时，对于我国肿瘤患者情况的统计发现，其中65 ～75%的患者在治疗的过程中接受过放射治疗［1］。

但是，放射治疗在有效杀灭肿瘤细胞，控制肿瘤进一步增值和扩散的同时也会对正常机体组织表现出一定的损伤作用：如骨髓抑制、造血系统破坏、皮肤黏膜破溃、多脏器系统损伤等。造血组织对电离辐射极为敏感，有研究表明0.5Gy 放射线全身照射后就会引起血液学改变(放疗患者随肿瘤性质不同而接受的单次剂量总量也不同，一般为2.0～3.0Gy)。当全身或大部分机体受到较大剂量射线照射后，造血组织的损伤是机体最早出现的基本损伤之一。放射性造血损伤主要表现为造血功能障碍，由此诱发机体感染、出血、免疫功能抑制、死亡等。因此，全身照射后造血系统损伤的轻重和恢复的快慢在很大程度上影响放疗患者的生活质量［2］。

因此辐射防护剂的研发已成为一个国内外的热点课题。无毒或是低毒性的生物制品的研究是现今的趋势，而民族医药的独特作用已经愈发的引起科研工作者的重视［3，4］。在已有研究的基础上，发挥民族医药成分丰富、毒性低等优点，重视筛选和系统研究，开发出适合广大群众使用的抗辐射药品或保健品是现今国内对于防辐射保护制剂的研究方向［5］。我区具有丰富的沙棘资源，是国内出产沙棘的主要省份，沙棘作为传统的蒙药有着悠久的药用历史，1977年被收入中国药典，功能主治止咳祛痰、消食化滞、活血散瘀等，原多用于咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、跌扑瘀肿、瘀血经闭等症状，现今研究发现其含有多种维生素、微量元素、氨基酸和其他活性成分，对于抗氧化、提高机体免疫力方面均表现出较明确的效果［6］，故而其在保护辐射损伤，尤其是对于放射性造血损伤的保护作用方面有着巨大的潜在研究价值［7］。但现今关于沙棘主要集中于其对于人体保健效果的研究，而缺乏对于其药用价值的探讨。本研究拟通过动物实验和临床病例观察，探讨沙棘黄酮对放射性造血损伤防护作用。

1 实验材料

1.1 药品与试剂：沙棘黄酮胶囊(宇航人集团、内蒙古)、瑞氏染料(三明市贝真生物科技有限公司、福州)、磷酸二氢钾(国华化学试剂厂，北京)、磷酸氢二钠(国华化学试剂厂，北京)、新洁而灭溶液(华星化工、安徽)、血球计数仪(XS800I Sysmex 公司日本)、光学显微镜(莱卡、德国)、微量加样器(Gilson、法国)、电子天平(Sartorius 德国)

1.2 动物及分组：清洁级昆明小鼠，15 ～20g，购自内蒙古大学实验动物中心。取小鼠45 只，雌雄不论(16.3 ±1.4)，随机分为3 组，即正常对照组、低剂量治疗组、高剂量治疗组，每组15 只，适应性饲养1 周。

2 方法

2.1 实验模型制备：每只小鼠予以60Coγ4Gy 一次性全身照射，照射距离30cm。并于照射当日起连续7d，低剂量治疗组每只小鼠予以10ml/kg 沙棘黄酮灌服;高剂量治疗组每只小鼠予以20ml/kg 沙棘黄酮灌服，对照组予以20ml/kg食用油灌服。连续7d。

2.2 标本采集及处理：实验7d 后行眼球摘除收取外周血通过血球计数仪进行血细胞计数。脱颈处死小鼠，无菌条件下剥离股骨，分别剪断股骨头及股骨远端，暴露骨髓腔。抽取骨髓，用1ml 无菌注射器，吸取0.2ml 无菌生理盐水，轻轻插入骨髓腔，冲出骨髓，推片，行瑞氏染色。

2.3 指标观察：同时观察各组照射7d 内的体重、进食、精神、活动等日常指标。通过血球计数仪进行血细胞计数。观察骨髓涂片的细胞增殖情况。

2.4 统计学方法：结果通过SPSS11.0 统计分析，采用率及x(_)±S 的形式表示，采用检验和t 检验进行，P＜0.05 具有统计学意义。

3 结果

3.1 白细胞变化情况：取外周血行血细胞计数仪检测白细胞数量。结果显示高剂量(沙棘黄酮20ml/kg 灌服)组白细胞数量为1.799 ±0.228 ×109优于低剂量(沙棘黄酮10ml/kg 灌服)组1.447 ±0.304 ×109(P＜0.05)及空白对照组对照组1.414 ±0.212 ×109(P＜0.05)，表示沙棘黄酮对于放射性造血系统的损伤具有防护作用。(图1)

图1 各组间白细胞变化情况(10⌒9 个/L)

3.2 骨髓涂片结果分析：如下图所示，对照组中骨髓有核细胞数量减少，高剂量灌服组(图2 -C)及低剂量灌服组(图2 -B)较空白对照组(图2 -A)骨髓细胞增殖明显。提示沙棘黄酮灌服后对于小鼠自身造血系统的动员具有促进意义，使其可以较为有效的拮抗放射线对于小鼠造血系统所造成的损伤。

图2 实验7d 各组间骨髓涂片结果(100 ×)

3.3日常指标观测：实验组与对照组相比较，小鼠进食有所恢复、精神状态略有改观、日常活动尚可。就体重增加指标而言(图3)，对照组7d 体重累计增加0.71 ±1.23，低剂量实验组7d 体重累计增加1.13 ±0.68，高剂量实验组7d体重累计增加1.38 ±0.72，组间比较均有统计学差异(P＜0.05)，且各组未见死亡样本。

图3 7 天各组间体重增加情况(g/只)

4 讨论

就本实验的结果而言，我们可以清晰的观察到在对于放射线损伤的小鼠进行一定量的沙棘黄酮灌服后，对于造血功能的恢复具有一定的促进作用。通过对于外周血象白细胞数值的指标观察，我们发现，沙棘黄酮灌服较未行治疗的对照组，白细胞明显升高。同时具有一定的量效关系，较低剂量的沙棘黄酮灌服(10ml/kg)这一上升现象不明显，而随着剂量的进一步增加(20ml/kg)，白细胞的取得了明显的上升。但我们也应当清晰的认识到，虽然实验组较对照组白细胞的数值增加，但是这一增加的数值并未使得实验组小鼠的白细胞数值升为正常水平。但是这毕竟具备了上升的趋势，也为我们进一步实验提供了理论依据和可能。同时我们实验选取的作用时间间隔较短，这也限制了我们的数据未能有较为突出的变化的可能。我们有理由相信如果进一步延长作用时间，后续会取得更为理想的效果。

对于骨髓涂片的结果观察，我们发现，对照组的骨髓有核细胞数目较正常明显减少，显示其处于一种骨髓抑制的状态，这与放射线照射后骨髓细胞活性抑制，各系细胞数目减少这一现象相吻合。而治疗组(低、高剂量组)相对于对照组而言，骨髓细胞增殖明显增加，且高剂量组更为明显，骨髓增殖活性增加。提示造血系统予以动员，这也为治疗组白细胞数量有增加的趋势这一现象提供了理论依据。说明沙棘黄酮对于机体造血系统具有保护作用，其可以较为有效的拮抗放射线对于造血系统的损伤。

生命体征指标的观察中，我们也可以看到实验组与对照组相比较，小鼠进食有所恢复、精神状态略有改观、日常活动尚可。就体重增加指标而言，治疗组(低、高剂量组)相对于对照组体重有所增加。