艾灸预处理大椎穴对发热大鼠血清IL-6 的影响*

贾坤平，孙忠人△，尹洪娜，勇入琳，张建奇，侯二雷，吴 磊

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040;2.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨150001)

近年来，由于抗药性的增加，应用大量退热药或物理疗法治疗发热往往并不奏效，而大椎穴退热在临床中得到了广泛的应用并取得了满意的疗效。从临床研究报道看，常用的方法有针刺、刺血、拔罐、刮痧等，而艾灸退热的相关研究较少。本实验对酵母菌所致发热大鼠施行艾灸及艾灸预处理疗法，通过对其体温及血清IL-6 的测定，探讨艾灸的解热机制，为临床退热提供一条新途径。

1 材料与方法

1.1 实验动物

Wistar 大鼠，雄性，清洁级，体重(250 ±20)g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号:SCXK 黑2008004。实验过程中对动物的处置符合有关善待动物的规定。

1.2 药物、试剂及仪器

纯艾绒(南京安迪医疗保健品有限公司)，安痛定(山东方明药业集团股份有限公司)，安琪酵母菌(安琪酵母股份有限公司)，电子体温计(郑州豪润奇电子科技有限公司)，电热恒温水槽DK-8B 型(上海精宏实验设备有限公司生产)，IL-6 试剂盒(北京晶美生物工程有限公司)。

1.3 实验前准备

按人和动物体表面积的等效剂量比值表［1］换算剂量。每次实验前用研钵将酵母粉与生理盐水配制成浓度为20%的酵母混悬液。

1.4 动物分组及处理

将大鼠置于实验室适应性喂养3 天，每日早晚各1 次施行适应性测量肛温操作，实验前10 h 禁食不禁水，测定肛温前让动物排空粪便［2］。每次测温前将凡士林涂于电子体温计头部，插入大鼠直肠3 cm(在3 cm处用线绳固定，)确保每次插入的深度一致，待读数稳定后记录体温。实验时同法测体温2 次，每隔0.5 h 1 次，体温波动超过0.5℃者剔除，将两次体温取平均值作为大鼠的基础体温。

从40 只Wister 大鼠中以随机数字表法随机抽出8 只作为空白组，再随机抽出8 只大鼠作为艾灸预处理组，予艾灸预处理大椎穴15 min 并于结束后测量体温1 次。预处理结束后将除空白组以外的32 只大鼠分别采用20% 干酵母混悬液10 ml/kg 皮下注射造模［3］，造模成功后用随机数字表法将剩余的符合条件的24 只大鼠随机分为模型组、艾灸组、安痛定组，每组8 只。艾灸组及艾灸预处理组分别予以艾灸大椎穴治疗15 min，安痛定组予以腹腔注射安痛定0.2 mg/kg，分别测量造模前、造模后8 h 及治疗后1 h、2 h、3 h、4 h各时间点体温并于实验结束后分别测量各组大鼠血清IL-6 的值。

1.5 艾灸方法

依据《实验针灸学实验指导》［4］选取“大椎”穴，使用自制艾条进行温和灸，艾条距离大椎穴大约1 cm，大鼠穴位皮肤温度保持在37 ～42℃。

1.6 血清IL-6 的测定

摘大鼠眼球，取1 ～3 ml，3000 r/min 离心15 min，分离血清，采用双抗体夹心ELISA 法测定血清IL-6，测定方法严格按试剂盒说明操作。

1.7 统计学处理

采用SPSS16.0 统计软件，所有实验数据用均数±标准差(±s)表示，不同组间比较采用单因素方差分析，两样本间比较采用LSD’t 检验，以P ＜0.05 为有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠不同时间点体温的比较

由图1 可见，空白组大鼠体温略有增高趋势。模型组、艾灸组、安痛定组及艾灸预处理组在注射酵母菌混悬液8 h 后，体温最高升高2.22℃，达39.33℃，模型组高热持续4 h，未见明显下降;艾灸预处理组降温幅度与安痛定组差异不大，但不及安痛定组降温迅速，两组均在4 h 内降至正常;而艾灸组体温虽有下降，但始终不及安痛定组和艾灸预处理组降温效果明显。

由表1 可见，造模前，艾灸预处理组与空白组比较有显著性差异(P ＜0.01)，其余各实验组与空白组比较无显著性差异(P ＞0.05)。造模后，各实验组与空白组比较有显著性差异(P ＜0.01);艾灸预处理组与模型组、艾灸组、安痛定组比较有显著性差异(P ＜0.01)，而该3 组间无显著性差异(P ＞0.05)。给予处置1 h 后，艾灸组与模型组比较无显著性差异(P ＞0.05)，安痛定组、艾灸预处理组与模型组比较有显著性差异(P ＜0.01)，而安痛定组与艾灸预处理组比较无显著性差异(P ＞0.05)。2 h 后，艾灸组、安痛定组、艾灸预处理组与模型组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，安痛定组、艾灸预处理组与艾灸组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，而安痛定组与艾灸预处理组比较亦有显著性差异(P ＜0.01)。3 h 后，艾灸组、安痛定组、艾灸预处理组与模型组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，艾灸组、艾灸预处理组与安痛定组比较有显著性差异(P ＜0.01)，而艾灸组与艾灸预处理组比较无显著性差异(P ＞0.05)，且安痛定组与空白组比较并无显著性差异(P ＞0.05)，而余各实验组与空白组比较均有显著性差异(P ＜0.01)。4 h 后，艾灸组、安痛定组、艾灸预处理组与模型组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，艾灸组与安痛定组、艾灸预处理组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，而安痛定组与艾灸预处理组比较无显著性差异(P ＞0.05)，且与空白组比较均无显著性差异(P ＞0.05)。

图1 各组大鼠不同时间点体温的变化

表1 各组大鼠不同时间点体温的变化

2.2 对酵母菌致热大鼠血清IL-6 的影响

由表2 可见，艾灸组、安痛定组、艾灸预处理组与模型组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，艾灸组与安痛定组、艾灸预处理组比较均有显著性差异(P ＜0.01)，而安痛定组与艾灸预处理组比较无显著性差异(P ＞0.05)。各实验组与空白组比较均有显著性差异(P ＜0.01)。

表2 各组大鼠血清IL-6 的含量

3 讨论

现代医学认为发热是一个症状，是由病原微生物、抗原-抗体复合物、类固醇等刺激机体产生内源性致热源(EP)，EP 再通过多种途径作用于体温调节中枢引起的调节性体温升高。而IL-6 是多种致热源引起发热的重要介质，主要由单核细胞在IL-1 和TNF-α等诱导下分泌，也可由激活的巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞等产生，主要作用为促进B 细胞增生和分泌抗体、增强NK 细胞活性，对肝细胞T 细胞神经组织造血系统具有广泛的生物学效应，具有抗肿瘤效应。在机体发热时，IL-6 通过血脑屏障毛细血管床部位的特异性可饱和性IL-6 转运体入脑，通过中枢性发热介质而引起发热［5］。

本研究结果表明，艾灸预处理组与安痛定组大鼠体温均能在处置后4 h 内降至正常;而艾灸组体温虽有下降，但始终不及安痛定组和艾灸预处理组降温效果明显，说明艾灸具有一定的解热作用，但其退热效果不及安痛定快速有效，同时艾灸能够抑制IL-6 的生成或对抗其作用。而艾灸预处理可降低大鼠发热的峰值，比起单纯的艾灸治疗效果更优。对于以上实验结果，做出如下考虑:作为解热实验所用的实验动物，家兔最宜，而大鼠则因恒温功能差，对发热刺激反应低，故不如家兔。但考虑到大鼠模型易于复制，便于操作，故在尽量保证实验室温度恒定的条件下，选择大鼠相对敏感的酵母菌造模;也是由于大鼠体温不恒定，故在对其施行艾灸治疗后的1 h 可造成其体温的短暂升高，但处置2 h 时体温开始下降，最终体温较模型组低，故对整个实验结果影响不大;可能与中、西医各自特色有关［6］，西药的时效性较强，加之本实验观察的周期较短，单纯艾灸的长期疗效并未得到充分的体现，若延长观察周期，则可能提高艾灸治疗的疗效;艾灸预处理有降低热势的功效。

安痛定是临床常用的紧急退热药，能抑制下视丘前列腺素的合成和释放，恢复体温调节中枢感受神经元的正常反应性而起退热作用;同时还通过抑制前列腺素等的合成而起镇痛作用，但具有过敏性休克、呕吐、皮疹、发热、口腔炎及粒细胞减少等不良反应。艾灸属于绿色疗法，是借其温热刺激及药物作用，温通气血、扶正祛邪，其退热机制在于以热引热、发散透泄;开辟门户、引邪外出;行气活血、祛瘀散结;扶阳济阴、阳生阴长;热因热用、从治之法［7-9］。艾灸局部的热刺激使血液循环加快，散热增加;其产生的红外线可增强细胞的吞噬功能，改善血液循环，消除肉芽水肿，并为机体细胞的代谢活动、免疫功能提供必要的能量［10］;加之局部的灼痛感使交感神经兴奋，增加了汗腺的分泌［11］，均有利于机体退热。

艾灸预处理即“逆灸”，属于逆针灸的一部分，是以“治未病”为主要理论基础的防病保健方法。它是通过艾灸激发经络之气，提高机体抗病能力，从而达到防止疾病的发生、减轻随后疾病的损害和保健延年的目的［12］。其作用机制主要表现在:①调整阴阳，促进机体达到阴平阳秘的状态;②激发正气，调节气机，拒邪于外;③根据五行制化及经络传变规律，未病先防;④结合时间医学，择时防治［13］。而通过本实验的研究，初步探得其退热机制可能在于其通过抑制大鼠血清IL-6 的生成或对抗其作用，进而减少内生致热源对体温调节中枢的影响，使体温调定点上移幅度减低或恢复正常，从而达到降低热势及退热的作用。

［1］ 施新猷.医用实验动物学［M］.太原:山西科学技术出版社，1989:422

［2］ 汤毅珊，王宁生，张银卿.雄黄及含雄黄复方对炎症介质IL-1β、IL-6、TNF-α 和NO 的影响［J］.中药药理与临床，2007，23(5):107

［3］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.2 版. 北京:人民卫生出版社，1993:366

［4］ 陈日新.实验针灸学实验指导［M］.北京:人民卫生出版社，2002:63

［5］ 田文静.柴胡透邪退热功用与其用量、配伍及机体状态关系的研究［D］.北京:北京中医药大学，2010:23

［6］ 武月萍.中医特色的内涵、形式及其思路方法［J］.中国医药指南，2009，7(3):158-160

［7］ 邓春雷.灸法补泻作用的机理和控制［J］.中医杂志，1986(8):45

［8］ 谢茹.热证施灸机理初探［J］.中医药研究，1988(6):32

［9］ 温木生.热证可就机理刍议［J］.上海针灸杂志，1996，15(1):28

［10］ 杨华元，刘堂义. 艾灸疗法的生物物理机制初探［J］. 中国针灸，1996，16(10):17

［11］ 赵俊，张立生.疼痛治疗学［M］.北京:华夏出版社，1994:13

［12］ 杨桦.近十年艾灸预处理的实验研究进展［J］. 中国医药导报，2012，9(6):10-12

［13］ 何小琼.逆针灸治未病中医机理浅析［J］. 江苏中医药，2008，40(10):74-75