保元抗癌口服溶液清除超氧自由基与DPPH作用

2015-06-24李婕徐风华

医药导报 2015年3期

关键词：量瓶原液抗癌

李婕，徐风华

(解放军总医院药品保障中心制剂室，北京 100853)

保元抗癌口服溶液清除超氧自由基与DPPH作用

李婕，徐风华

(解放军总医院药品保障中心制剂室，北京 100853)

保元抗癌口服溶液；自由基；电子自旋共振

1 材料与方法

1.1 试剂保元抗癌口服溶液(解放军总医院制剂室提供，批号：20120501，每支10 mL)。DPPH(批号：STBC5115V，含量：97%)、5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(5，5-dimethyl- 1-pyrroline-N-oxide，DMPO，批号：MKBK3796V，含量：97%) 、黄嘌呤(xanthine，批号：097K5307V，含量：99.5%)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，批号：SLBB1570V，含量：98%)均购自Sigma公司，二乙三胺五乙酸 (diethlene-triaminepentaacetic acid，DETAPAC，批号：20080901，浓度：99%)购自国药集团，二氧六环等均为国产分析纯，纯化水(本院制剂室自制，批号：20131021)。

1.2 仪器 JEOLFA-300电子自旋共振仪(日本电子)，Sartorius BP211D天平，MS3型旋涡混合器(德国IKA公司)。

1.3 样品溶液的配制精密量取保元抗癌口服溶液原液1 mL，加入50 mL量瓶，加水至刻度，得稀释50倍的样品；精密量取保元抗癌口服溶液原液1 mL，加入100 mL量瓶，加水至刻度，得稀释100倍的样品；精密量取保元抗癌口服溶液原液1 mL加入250 mL量瓶，加水至刻度，得稀释250倍的样品；精密量取上述稀释100倍的样品溶液10 mL，加入50 mL量瓶，加水至刻度，得稀释500倍的样品；精密量取上述稀释100倍的样品溶液5 mL，加入50 mL量瓶，加水至刻度，得稀释1 000倍的样品；精密量取上述稀释100倍的样品溶液2 mL，加入100 mL量瓶，加水至刻度，得稀释5 000倍的样品。

1.4 DPPH的产生与检测

1.4.2 对DPPH清除的检测空白对照：精密量取2 mmol·L-1DPPH的二氧六环溶液10 μL，置于0.5 mL EP管，加入纯化水10 μL，涡旋混合器混匀，毛细管虹吸样品，封口胶封口，放入顺磁管中，上机测试。重复6次，得峰高平均值。

样品测试：精密量取2 mmol·L-1DPPH二氧六环溶液10 μL于0.5 mL EP管，分别加入保元抗癌溶液稀释液10 μL，照上述空白对照方法处理样品，上机测试，重复6次，得峰高平均值。

加入抗氧化剂后，DPPH被捕获，从ESR谱图可看出，加入抗氧化剂会降低DPPH峰高度。测量未加样品时DPPH的原始信号强度峰高(图1第3峰峰高表示自由基强度)，加入样品后自由基信号强度在此基础上增加或减少，按公式计算相对清除百分比。根据峰高变化计算自由基清除率。DPPH清除率(%)=(H0-Hx)/H0×100%。H0：空白对照组所测值；Hx：保元抗癌口服溶液稀释液组所测值[1-2]。

2 结果

2.1 保元抗癌口服溶液对DPPH的清除作用 DMPO捕集DPPH的ESR波谱(图1) 以第3 峰高(h，mm)表示DPPH的浓度。

本实验测试了不同浓度保元抗癌口服溶液清除DPPH的情况(表1)。在样品稀释50倍时，体系中的DPPH约98.47%被清除；样品稀释1 000～5 000倍时，DPPH清除率处于平台期，由17.59%降至10.64%。样品稀释50～250倍时，DPPH清除率由98.47%迅速降至34.69%。随着保元抗癌口服溶液稀释倍数增大，DPPH清除率递减，具有明显的量效关系(图2)。

图1 DPPH的ESR波谱

表1 保元抗癌口服溶液对DPPH自由基的清除作用

Tab.1 Scavenging effect ofBaoyuananticancer oral solution on DPPH free radical

原液稀释倍数清除率/%原液稀释倍数清除率/%5098．4750022．9810075．94100017．5925034．69500010．64

a,b,c,d,e,f.依次稀释50，100，250，500，1 000和5 000倍；blank.空白对照

图2 不同浓度保元抗癌口服溶液对DPPH清除作用的ESR波谱

a，b，c，d，e，f stand for 50，100，250，500，1 000 and 5 000 of diluting factor，respetively；blank stands for blank control group

Fig.2 ESR spectrum of the scavenging effect ofBaoyuananticancer oral solution at different concentration on DPPH

Fig.3 ESR spectrum of superoxide radical spin adduct of DMPO produced by riboflavin system

稀释原液倍数清除率/%稀释原液倍数清除率/%5081．3250067．9010070．29100055．1825068．46500048．42

3 讨论

a,b,c,d,e,f.依次稀释50，100，250，500，1 000和5 000倍；blank.空白对照

a，b，c，d，e，f stand for 50，100，250，500，1 000 and 5 000 of diluting factor，respetively； blank stands for blank control group

综上所述，保元抗癌口服溶液具有良好的清除自由基和抗氧化能力。

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DOI 10.3870/yydb.2015.03.008