显脉旋覆花根中总黄酮提取方法的研究

张 虹,李树伟,李春燕,袁 寒,白红丽,郭俊明

(1.红河学院 云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南 蒙自 661100; 2.云南民族大学 民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室，云南 昆明 650500)

显脉旋覆花根中总黄酮提取方法的研究

张 虹1,李树伟1,李春燕1,袁 寒1,白红丽2,郭俊明2

(1.红河学院 云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南 蒙自 661100; 2.云南民族大学 民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室，云南 昆明 650500)

以显脉旋覆花根为试验材料，用乙醇和甲醇为提取剂，采用浸提法分别对显脉旋覆花根中总黄酮进行提取，并用紫外分光光度法进行了测定.结果表明：乙醇70%,甲醇体积分数50%，浸提时间均为24 h时，总黄酮的提取效果较好，乙醇和甲醇提取的总黄酮得率分别为2.33%和1.84%，乙醇的提取效果优于甲醇，总黄酮测定方法平均回收率为99.89 %，相对标准偏差RSD为0.89%，结果可靠.

显脉旋覆花根;总黄酮;提取

显脉旋覆花(inulanervosawall)，又称小黑药，云威灵仙，草威灵，黑威灵等，哈尼语为Ciqnav(迟那)[1，2].为菊科多年生草本植物，高30～50 cm，根茎短，茎圆柱形，淡红色或红褐色，密生锈色柔毛，产于四川、广西、贵州、云南，越南、缅甸、泰国等，在主要云南主要分布省红河、玉溪、昆明、丽江等地，生于海拔 1 500～2 000 m的山坡草丛、灌木丛中.主要以根入药，秋季采收，其性平，味微苦，有滋补的作用，功能为祛风除湿、活络止痛，健胃消食等[3-4].是一种药食两用的保健食品，显脉旋覆花炖肉是人们青睐的美食赵丽等[3]研究了显脉旋覆花的化学成分，显脉旋覆花含有50多种化学成分，主要有百里香酚、异丁酸百里香酯、戊酸百里香酯等，这些成分具有杀菌、防腐的功能等.目前国内尚未见有显脉旋覆花黄酮类物质的研究的报道，而黄酮类化合物具有多种生物活性和药理作用,无毒副作用，有显著的的清除人体内清除自由基[5-6]，增强心血管功能，抗氧化,增强免疫力降血糖和血脂、降低心肌耗氧量、软化血管、抗心律不齐、使冠脉和脑血管流量增加等功能等功能，在防癌和脂肪酶等方面有明显的效果，并且具有抗炎、抗菌、抗病毒等作用[7-12].

本试验以显脉旋覆花根为试验材料，用不同浓度乙醇、甲醇为总黄酮提取剂，采用浸提法，提取显脉旋覆花根中的总黄酮，并用紫外分光光度法进行了测定，为显脉旋覆花根的药用研究提供一定依据.

1 材料与方法

1.1 试验材料

新鲜显脉旋覆花根购于蒙自市草药市场.

1.2 仪器及主要试剂

紫外分光光度仪(UV-4802S型紫外-可见分光光度计，上海尤尼柯仪器有限公司).

试剂：芦丁标准品，氢氧化钠，甲醇、乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠等均为分析纯试剂.

1.3 试验方法

将新鲜显脉旋覆花根洗净，晒干后，剪成小段，置于高速粉碎机中粉碎，过 0.441 nm 筛，备用.

1.3.1 配制标准品溶液及标准测定

准确称取干燥的芦丁标准品20 mg，置100 mL容量瓶中，加入适量60 ℃的70%乙醇或甲醇使其溶解，冷却后分别用70%乙醇或甲醇稀释至刻度，摇匀.标准溶液质量浓度为0.20 mg/mL.精确吸取标准溶液0，1，2，4，6，8，10 mL分置于25 mL容量瓶中；加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，混匀，放置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.3 mL，混匀，放置6 min；加4%氢氧化钠溶液4.0 mL，加30%乙醇或甲醇分别定容至刻度，摇匀，放置16 min.以试剂空白为参比，在510 nm波长处测定溶液的吸光度[13].

以吸光度A为纵坐标，质量浓度C为横坐标，绘制标准曲线，分别得到线性回归方程：甲醇：A=10.354C-0.005 9，R2=0.999 1.乙醇：A=9.892 9C-0.000 9，R2=0.999 4.

1.3.2 样品提取液的制备

分别称取4 g显脉旋覆花根干粉置于100 mL带塞三角瓶中，分别加入50 mL 30%、50%、70%、80%、95%的乙醇或甲醇溶液，在室温下，浸泡12、24、36 h后过滤，滤液用相应体积分数的乙醇或甲醇定溶到100 mL的容量瓶中，为样品提取液.

1.3.3 显脉旋覆花根总黄酮含量的测定

准确吸取2 mL提取液，置于25 mL容量瓶中,按1.3.1节的方法操作，在510 nm下平行测定3次.根据回归方程，计算总黄酮的浓度.总黄酮得率%=[提取液浓度×稀释倍数×体积/样品干重×1000]×100%.

1.3.4 稳定性试验

准确吸取2.0 mL 70%乙醇的提取液于25 mL容量瓶中，按1.3.1节方法操作，放置1 h，每隔10 min测定一次吸光度.

1.3.5 加样回收率试验

取70%乙醇提取液2.0 mL置于25 mL容量瓶中，加入芦丁标准1.0 mg，余下部分按1.3.1节方法操作，平行测定5次，计算加标回收率.

2 结果与分析

表1 乙醇提取显脉旋覆花根总黄酮得率 %

表2 甲醇提取显脉旋覆花根总黄酮得率 %

由表1～2可知，显脉旋覆花根以乙醇和甲醇为总黄酮提取剂时，在相同体积分数下，均表现出在浸提时间24 h时总黄酮得率最高，乙醇在36 h最低，甲醇在12 h时最低.

在相同浸提时间内，随体积分数的增加总黄酮得率也不同，乙醇在70%时的总黄酮得率最高， 与80%时总黄酮得率相比最高相差0.27%，以50%时的总黄酮得率相比最高相差0.75%，而甲醇在50%时的总黄酮得率最高，甲醇80%次之，乙醇和甲醇均以30%时的总黄酮得率最低.

以乙醇和甲醇为显脉旋覆花根总黄酮提取剂时，在相同体积分数下，乙醇的提取效果比甲醇好，乙醇总黄酮的最高得率与甲醇总黄酮的最高得率相比相差0.49%.

2.1 稳定性试验

结果表明，1 h内显脉旋覆花根总黄酮提取液的稳定性良好，RSD为0.90%.

2.2 加样回收率试验

显脉旋覆花根中总黄酮提取方法的加样平均回收率为99.89%，相对标准偏差RSD为0.89%，表明测定结果准确可靠，符合测定要求.

3 结论与讨论

本试验采用30%、50%、70%、80%乙醇和甲醇为显脉旋覆花根中总黄铜的提取剂，乙醇体积分数70%和甲醇体积分数50%时，浸提时间为24 h时的总黄酮得率最高分别为2.33%和1.84%，乙醇体积分数为30%时，乙醇浸提时间为36h时的总黄酮得率最低为1.13%.甲醇体积分数均为30%时，浸提时间为12 h总黄酮得率最低为1.01%.乙醇的提取效果好于甲醇.

黄酮类化合物广泛存在于植物各个部分，一般是以甙的形式存在，高体积分数的乙醇适宜于提取黄酮甙元，60%左右体积分数的乙醇适宜于提取黄酮甙类[14-16].而本试验在甲醇50%和乙醇70%时显脉旋覆花根的总黄酮得率最高,说明显脉旋覆花根中黄酮类物质可能与黄酮甙类物质有关.

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(责任编辑 庄红林)

Study on the extraction method of the total flavonoids in the roots ofInulanervosa

ZHANG Hong1,LI Shu-wei1,LI Chun-yan,YUAN Han,BAI Hong-li2,GUO Jun-ming2

(1. Key Laboratory of Crops with High-quality and Efficient Cultivation and Security Control of Yunnan Higher Education Institutions, Honghe University,Mengzi 661100,China; 2. Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resources,State Ethnic Affairs Commission and Ministry of Education of China,Yunnan Minzu University,Kunming 650031,China)

In this test,the roots of Inula nervosa were used as the test materials,and their total flavonoids were extracted by alcohol- and methanol-based cold-maceration. The content of the extracted total flavonoids was determined with UV spectrophotometer. The results were the following: while alcohol was 70% and methanol 50%,and the extracting time was 24 h,the extraction of the total flavonoids had a good effect. The extraction rate of alcohol and methanol was 2.33% and 1.84% respectively. Alcohol had a better effect than methanol. The average recovery of this method was 99.89%,and the relative standard deviation(RSD) of the method was 0.89%. Its results are reliable.

roots ofInulanervosa; total flavonoids; extraction

郭俊明(1962-)，男，硕士,教授,硕士生导师.主要研究方向:无机非金属及生物化学.

2014-12-02.

民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室开放基金(MZY1405).

张虹(1962-)，女，教授.主要研究方向:生物技术.

R284.2

A

1672-8513(2015)02-0112-03