vW F Annexin5在子痫前期患者母血及脐血的表达及其与胎儿生长受限的关系*

任春丽，唐兴国，刘玉兰，韩冰，郭艳巍＊＊

(1.承德医学院附属医院，河北承德 067000 2.承德护理职业学院解剖教研室，河北承德 067000）

vW F Annexin5在子痫前期患者母血及脐血的表达及其与胎儿生长受限的关系*

任春丽1，唐兴国2，刘玉兰1，韩冰1，郭艳巍1＊＊

(1.承德医学院附属医院，河北承德 067000 2.承德护理职业学院解剖教研室，河北承德 067000）

目的：研究子痫前期患者外周母血及脐血中vWF、Annexin5的表达水平及与胎儿生长受限相关性，并探讨子痫前期发病机理及其与胎儿生长受限的关系。方法：采用ELISA方法检测子痫前期患者84例、FGR患者24例及对照组29例患者母血及脐血中vWF、Annexin5的表达水平。结果：①各组孕妇母血及脐血中vWF表达，子痫前期各组均高于健康孕妇组，差异有统计学意义(P＜0.01）。且早发重度型＞晚发重度型＞轻度子痫前期患者，差异仍有统计学意义(P＜0.05）。各组与FGR组比较，FGR组高于对照组及轻度组，且分别比较差异有统计学意义(P＜0.01）。早发重度型＞FGR组＞晚发重度型，但差异均无统计学意义(P＞0.05）。②各组母血及脐血中annexin 5的蛋白表达均低于健康孕妇组，差异均有高度统计学意义(P＜0.01）。早发重度组＜晚发重度组＜轻度组，但母血中晚发重度组与轻度组比较，差异无统计学意义(P＞0.05）。各组与FGR组比较，FGR组母血及脐血中表达水平均低于对照组、轻度组及晚发重度组，差异均有统计学意义(P＜0.01）。③子痫前期各组及FGR组患者外周血中vWF与Annexin5的表达均呈明显负相关(P＜0.01）;子痫前期各组及FGR组患者脐血中vWF与Annexin5的表达均呈明显负相关(P＜0.01）;vWF子痫前期各组及FGR组在孕妇外周血与脐血中的表达均呈明显正相关(P＜0.01）;Annexin 5子痫前期各组及FGR组在孕妇外周血与脐血中的表达均呈明显正相关(P＜0.01）。结论：患者母血及脐血中vWF、Annexin 5的表达可能与子痫前期发病机制有关，通过影响胎盘中凝血－纤溶系统及血管内皮系统，参与子痫前期及胎儿生长受限发生、发展的病理生理过程。

子痫前期;vWF;Annexin 5;胎儿生长受限

子痫前期是威胁孕产妇生命安全主要原因。而子痫前期并发胎儿生长受限(FGR）一直受到产科专家的高度关注，而FGR已被列入目前我国妇产科学及williams产科学的子痫前期严重程度分类中重度子痫前期的诊断条件之一。子痫前期基本病理生理改变为全身小血管痉挛，内皮损伤及局部缺血［1］。血管性假血友病性因子(von Willbrand Factor，vWF）是血管内皮损伤重要的标记物，膜联蛋白5(annexin 5）是通过凝血系统和抗凝血系统的失衡导致胎盘组织缺血缺氧，本研究旨通过检测子痫前期患者母血及脐血中的vWF及Annexin 5水平，探讨vWF、Annexin 5与子痫前期发病机理及其与FGR的关系。

1 资料与方法

1.1 资料来源及分组：选取产科2010年10月至2011年10月住院的患者113例，其中子痫前期患者84例，分为轻度子痫前期组(mPE）29例，年龄(28.17±3.73）岁，孕周(37.76±1.07）周;早发型重度子痫前期组(EOSP）27例，年龄(29.41±5.59）岁，孕周(30.99±1.36）周;晚发型重度子痫前期组(LOSP）28例，年龄(29.00±4.24）岁，孕周(36.53±1.35）周;其中发生FGR患者24例，年龄(29.63±5.04）岁，孕周孕周(33.02±3.11）周;另外，选取健康孕妇29例行剖宫产者为对照组，年龄(28.72±4.69）岁，孕周(39.31±0.74）周。患者年龄在子痫前期各组及FGR组与对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05）。早发型子痫前期孕周界定为32周。子痫前期及胎儿生长受限的诊断标准均参照谢幸，苟文丽主编《妇产科学》第8版的诊断标准［1］。

1.2 方法

1.2.1 标本采集与处理：母血采集方法：外周血浆标本为肘静脉血4mL，在治疗前或剖宫产前无宫缩时采集。脐血采集方法：剖宫产术中断脐后，取脐血浆标本4mL。处理方法：加0.109moL/L枸橼酸钠0.3ml抗凝，离心15min，4℃，3000r/rain，分离血浆，置－70℃冰箱保存，同批待测。

1.2.2 检测方法：母血及脐血的两种因子均采用ELISA方法按试剂盒严格操作，在450nm处测得吸光度(A）值，A值为纵坐标，横坐标为标准物的浓度，绘制标准曲线，根据各A值换算出相应的水平。

1.3 统计学方法：所有数据采用SPSS19.0统计软件进行分析处理，对数据进行正态性检验和方差分析，多个独立样本均数比较，采用单向方差分析，SNK法进行多组问多重比较。采用偏相关分析进行相关性分析。P≤0.05为有统计学意义。

2 结果

各组母血脐血中vWF Annexin5表达水平，见表1。

表1 各组母血脐血中vWF Annexin5表达水平比较(ng/mL）

2.1 vWF在各组患者母血及脐血中的表达

2.1.1 外周血中vWF表达：子痫前期各组表达均高于对照组，差异均有高度统计学意义(P＜0.01）;且子痫前期各组：mPE、ESOP及LOSP比较，分别比较，差异仍有统计学意义(P＜0.01）。各组与FGR组比较，FGR组高于对照组及轻度组，差异有高度统计学意义(P＜0.01）。但早发重度型＞FGR组＞晚发重度型，但分别比较，差异均无统计学意义(P＞0.05）。

2.1.2 脐血中vWF表达：子痫前期各组表达水平均明显高于对照组，分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.01）。且子痫前期各组：mPE、ESOP及LOSP分别比较，差异仍有统计学意义(P＜0.05）。各组与FGR组比较，FGR组高于对照组及轻度组，且分别比较差异有高度统计学意义(P＜0.01）。但ESOP组＞FGR组＞LOSP组，但分别比较，差异均无统计学意义(P＞0.05）。

2.2 Annexin5在各组患者母血及脐血中的表达

2.2.1 外周血中Annexin 5的表达：子痫前期各组均低于对照组，分别比较，差异均有高度统计学意义(P＜0.01）。子痫前期患者中，轻度组与早发重度组;早发重度组与晚发重度组比较，两组分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.01）。但轻度组与晚发重度组比较，差异无统计学意义(P＞0.05）。各组与FGR组比较，FGR组annexin 5的表达水平均低于轻度组、晚发重度组、对照组，分别与各组比较，差异均有统计学意义(P＜0.01）。但FGR组与早发重度组比较，差异无统计学意义(P＞0.05）。

2.2.2 脐血中Annexin 5表达：子痫前期各组均低于健康孕妇组，分别比较，差异均有高度统计学意义(P＜0.01）。ESOP组＜LOSP组＜mPE组，两两分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.01）。各组与FGR组比较，FGR组表达水平低于轻度组、晚发重度组、对照组，分别与各组比较，差异均有统计学意义(P＜0.01）。但FGR组与ESOP组比较，差异无统计学意义(P＞0.05）。

2.3 子痫前期组及FGR组患者外周母血及脐血中vWF、Annexin5水平的相关性

2.3.1 子痫前期各组及FGR组孕妇外周血中vWF与Annexin5的表达均呈明显负相关(P＜0.01），轻度组r =－0.778，P＜0.01;早发重度组r=－0.711，P＜0.01;晚发重度组r=－0.375，P＜0.05;FGR组r=－0.685，P＜0.01;而对照组则无明显相关r=－0.031，P＞0.05。见图1。

2.3.2 子痫前期各组及FGR组患者脐血中vWF与Annexin5的表达均呈明显负相关(P＜0.01），其中轻度组r=－0.930，P＜0.01;早发重度组r=－0.742，P＜0.01;晚发重度组r=－0.845，P＜0.01;FGR组r=－0.851，P＜0.01;而对照组则无明显相关r=－0.206，P＞0.05。见图2。

2.3.3 vWF子痫前期各组及FGR组在孕妇外周血与脐血中的表达均呈明显正相关(P＜0.01），其中轻度组r=0.818，P＜0.01;早发重度组r=0.826，P＜0.01;晚发重度组r=0.622，P＜0.01;FGR组r=0.890，P＜0.01;而对照组则无明显相关r=0.133，P＞0.05。见图3。

2.3.4 Annexin 5子痫前期各组及FGR组在孕妇外周血与脐血中的表达均呈明显正相关(P＜0.01），其中轻度组r=0.643，P＜0.01;早发重度组r=0.647，P＜0.01;晚发重度组r=0.554，P＜0.05;FGR组r=0.785，P＜0.01;而对照组则无明显相关r=0.068，P＞0.05。见图4。

图1 外周母血vWF与Annexin5相关性

图2 脐血vWF与Annexin5相关性

图3 vWF在母血与脐血中表达的相关性

图4 Annexin5在母血与脐血中表达的相关性

3 讨论

3.1 vWF在子痫前期中与胎儿生长受限的关系：vWF是血管内皮损伤的敏感指标。由血管内皮细胞和巨噬细胞合成，分布于血浆、血管内皮细胞Weibel－Palade小体以及血小板a颗粒等。血浆内含量不多，当血管内皮细胞受损时，储存在Weibel－Palade小体中vWF释放入血增多，使血浆中vWF含量增高［2，3］。Parra CM等［4］研究表明，子痫前期患者发生内皮细胞及胎盘细胞损伤，致合体滋养细胞释放vWF到胎盘绒毛间隙，引起子痫前期患者血浆中vWF明显升高。Alpoim PN等［5］研究表明，重度子痫前期患者中vWF表达水平明显升高，通过损伤血管内皮细胞引起子宫胎盘血流灌注减少，减少胎儿营养物质供应，引发胎儿生长受限。在本研究中，结果显示子痫前期各组患者母体血浆及脐血中vWF水平均明显升高，随病情加重而增加，且胎儿生长受限组的vWF在母血与脐血中的表达相关系数最高，提示vWF参与子痫前期与胎儿生长受限发生。

3.2 Annexin5在子痫前期中与胎儿生长受限的关系： Annexin5是膜联蛋白家族中研究最早，在人体内分布最广的膜联蛋白之一。在妊娠期间，annexin 5主要是由胎盘滋养细胞产生，在合体细胞滋养层中高表达。［6］子痫前期对胎儿最大的影响就是导致FGR或胎死宫内。研究发现，FGR发生与凝血功能失调引起的胎盘局部血栓、栓塞和血管床灌注不足及胎盘发育异常有关。Victor G等［7］研究显示，子痫前期胎盘中annexin 5 mRNA表达水平明显下降，随着annexin5表达越低，低出生体重儿比例增加，子痫前期重度发病率亦明显升高。有研究发现子痫前期患者Annexin5表达减少，引起胎盘高凝状态，导致胎盘绒间血流灌注不足，从而引起宫内胎儿缺血、缺氧，导致FGR、胎儿窘迫，甚至胎死宫内。本研究显示：子痫前期患者母血及脐血中Annexin5表达均明显减少，但母血表达少于脐血。且胎儿生长受限组母血与脐血相关系数很高，表明Annexin5减少参与子痫前期及胎儿生长受限的发生。

［1］谢幸，苟文丽.妇产科学［M］.第8版.北京：人民卫生出版社，2013.65～66.

［2］Vischer U M，de Moerloose P.Von Willebrand factor：from cell biology to the clinicalmanagement of von Willebrand＇s disease［J］.Crit Rev Oncol Hematol，1999，30(2）：93～109.

［3］Rangarajan S.Von Willebrand factor－two sides and the edge of a coin［J］.Haemophilia，2011，17(1）：61～64.

［4］Parra Cordero M，Bosco C，Gonzalez J，et al.Immunohistochemical expression of von Willebrand factor in the preeclamptic placenta［J］.Journal ofMolecular Histology，2011，42(5）：459～465.

［5］Alpoim PN，Gomes KB，Godoi LC et al.ADAMTS13，FVIII，von Willebrand factor，ABO blood group assessment in preeclampsia［J］.Clinical Chimica Acta，2011，412(23/24）： 2162～2166.

［6］Elshamaa MF，Elghoroury EA，Helmy A.Intradialytic and postdialytic platelet activation，increased platelet phosphatidylserine exposure and ultrastructural changes in platelets in children with chronic uremia［J］.Blood Coagul Fibrinolysis，2009，20(4）：230～239.

［7］Victor Gourvas，Nikolaos Soulitzis，Anastasia Konstantinidou，et al.Reduced ANXA 5 mRNA and protein expression in pregnancies complicated by preeclampsia［J］.Thromb Res，2014，133(3）：495～500.

B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.015

1006－6233(2015）06－0925－05＊基金项目：河北省承德市科学技术研究与发展项目，(编号：20122140）

＊＊通讯作者