2型糖尿病肾病不同肾功能时期血清25(OH)D与部分炎症因子的相关性分析

杨孟雪，许 洁，俞 捷，杨 波，甘 华，沈 清，李显文，高 琳

(1.遵义医学院附属医院 内分泌科，贵州 遵义 563099； 2.遵义医学院 公共卫生学院，贵州 遵义 563099；3.重庆医科大学附属第一医院 肾内科,重庆 400016)

专题研究

2型糖尿病肾病不同肾功能时期血清25(OH)D与部分炎症因子的相关性分析

杨孟雪1，许 洁2，俞 捷2，杨 波1，甘 华3，沈 清3，李显文1，高 琳1

(1.遵义医学院附属医院 内分泌科，贵州 遵义 563099； 2.遵义医学院 公共卫生学院，贵州 遵义 563099；3.重庆医科大学附属第一医院 肾内科,重庆 400016)

目的 测定正常人群和2型糖尿病肾病(Diabetic kidney disease，DKD)患者血清25 (OH)D浓度及血糖和相关炎症因子(TNF-ɑ和IL-8)的水平，探讨25 (OH)D与糖代谢和相关炎症因子的关系。方法 收集正常人群、单纯2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)和T2DM并DKD患者外周血分离血清，采用电化学发光法检测所有研究对象血清25 (OH)D水平，用ELISA法检测血清TNF-ɑ及IL-8浓度，同时测定血糖参数进行比较。结果 T2DM患者HBA1c、空腹血糖、餐后2 h血糖水平均高于正常对照人群，差异具有统计学意义(P<0.05)。血清25 (OH)D水平T2DM患者低于NGR组(12.8 ± 6.1 ng/mL比 28.0±12.0 ng/mL,P<0.05) , DKD尿毒症组明显低于单纯T2DM组和早期DKD组，单纯T2DM组和早期DKD组比较差异无统计学意义(P>0.05)。NGR、单纯T2DM患者及早、晚期DKD患者比较，血清TNF-ɑ及IL-8水平均呈逐渐升高趋势，NGR组<单纯T2DM组<早期DKD组<晚期DKD组(P<0.05)。血清25 (OH)D水平与TNF-ɑ呈负相关(P<0.05)。结论 T2DM并DKD患者血清25 (OH)D水平显著降低，与血清炎症细胞因子TNF-ɑ相关，且随着DKD病变程度的加重，维生素D缺乏逐渐加重，提示25(OH)D可能与炎症细胞因子水平的病理生理变化有关，并在DKD发病过程中可能起一定的作用，检测血清维生素D水平或许可为T2DM肾病的防治提供一些新线索。

2型糖尿病；糖尿病肾病；25羟维生素D

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是终末期肾病的一个主要病因，近年来研究发现DN与炎症相关[1-2]。2007 年美国肾脏病基金会(NKF)制定了肾脏病生存质量指导指南指南建议用 DKD(diabetic kidney disease)取代 DN。我们的前期研究发现DKD患者体内也存在微炎症状态[3]。维生素D是一组内分泌激素，维生素D除具有调控钙、磷代谢和骨稳定状态等作用外，还参与了宿主防御、炎症、免疫调节和修复等一系列病理生理过程。既往认为糖尿病和DKD是一种以自然免疫激活和低度炎症为特征的疾病[4-5]。大量研究证实维生素D缺乏或不足与糖尿病发病相关[6-9]。但维生素D缺乏或不足与DKD的关系，尤其不同时期2型DKD患者血清25 (OH)D的水平变化及其与炎症细胞因子关系如何，目前鲜见报道。因此，本研究通过测定不同时期2型DKD患者血清25 (OH)D浓度、血清TNF-ɑ、IL-8浓度及血糖代谢指标的水平，旨在探讨25 (OH)D与炎症细胞因子和糖代谢的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象纳入及排除标准 收集2009年5月至2014年10月遵义医学院体检正常者20例，男性10例，女性10例，平均年龄：59±12岁，经检查体格健康，并排除糖尿病、高血压、冠心病及肾病等内分泌代谢性疾病病史，均无糖尿病家族史。同时收集2009年5月至2014年10月重庆医科大学及遵义医学院肾内科及内分泌科2型DN尿毒症患者30例，男性16例，女性14例，平均年龄：59±10岁，早期2型DKD患者10例，男性6例，女性4例，平均年龄：56±7岁。糖尿病诊断均符合1999年世界卫生组织(WHO)糖尿病诊断和分型标准[10]。谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)水平<1.0，空腹血糖低于9.0 mmoL/L，HbAlc低于8.0%纳入。2型DKD患者诊断均符合2007年ADA的DN诊断标准。2型DKD尿毒症患者符合美国肾脏基金会制定的慢性肾衰竭(尿毒症期)的诊断标准[10]：内生肌酐清除率<15 mL/min，且病情稳定，未接受透析治疗(4组入选者基本情况见表1)。排除标准：①1型及继发性糖尿病；②急性感染性疾病；③心、肝功能不良；④近3个月发生糖尿病急性并发症及感染；⑤妊娠、哺乳；⑥其他肾病、结缔组织病和自身免疫性疾病；⑦肿瘤、心脑血管意外、哮喘、使用对研究有影响的药物等。所有入选者为中国汉族彼此间无亲缘关系的人群。本研究获得患者本人同意及重庆医科大学和遵义医学院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂与材料 GADA测定：采用美国BioMerica公司试剂盒，用酶联免疫法测定。TNF-ɑ、IL-8测定：采用美国Biosource公司试剂盒，用酶联免疫法测定。HbA1c测定：采用电化学发光法，应用Diastar 糖化血红蛋白分析仪检测。血常规应用XE-2100全自动分析仪检测。空腹血糖和血脂的测定：空腹抽取静脉血，采用奥林帕斯全自动生化分析仪检测。25 (OH)D检测采用美国罗氏公司试剂盒，用电化学发光法测定。

1.3 血标本的采集 采集研究对象晨起空腹静脉血20 mL,立即将3 mL标本送检验科检测血糖、血脂等指标，2 mL血标本室温静置30 min后，血液不抗凝，3 000 r/min，低温离心，15min，取上层血清，置-80 ℃冰箱保存待用。

2 结果

2.1 病人的基线特征 4组间性别、年龄、BMI、LDL-c和HDL-c差异均无统计学意义(P>0.05)； 2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)患者HBA1c、空腹血糖、餐后2h血糖水平高于正常对照人群，差异具有统计学意义(P<0.05,见表1)。

组别男/女年龄(岁)BMI(kg/m2)HBA1c(%)空腹血糖(mmol/L)餐后2h血糖(mmol/L)正常对照10/1059±1223．6±3．55．8±0．95．2±0．57．6±1．9单纯T2DM组13/1258±1923．9±2．17．8±0．5∗7．2±1．9∗12．5±3．9∗早期DKD组6/456±7 23．0±2．86．8±1．2∗#8．1±1．6∗#10．6±5．2∗#DKD尿毒症组16/1459±1023．6±4．27．5±0．9∗Δ8．8±2．7∗#Δ9．8±3．1∗#ΔP0．8160．520．580．0450．0240．016

*P<0.05 vs正常对照组；#P<0.05 vs单纯T2DM组；ΔP<0.05 vs早期DKD组。

2.2 不同组间血清25 (OH)D水平的比较(见图1) T2DM合并DKD患者病情由轻到重血清25 (OH)D水平逐渐降低，单纯T2DM组(15.5±5.2 ng/mL)、早期DKD组(12.8±5.6)和DKD尿毒症组(8.2±4.5)ng/mL，均明显低于NGR组(28.0±12.0 ng/mL，差异具有统计学意义(P<0.05)。与单纯T2DM组比较，早期DKD组和DKD尿毒症组血清25 (OH)D水平均低于单纯T2DM组，差异具有统计学意义(P<0.05)。DKD尿毒症组血清25 (OH)D水平比早期DKD低，差异亦具有统计学意义(P<0.05)。

NGR：正常糖调节；T2DM：单纯2型糖尿病；T2DM-E：早期DKD组; T2DM-L：晚期DKD组 。* P < 0.05 vs 正常对照组； # P < 0.05 vs单纯T2DM组；Δ P < 0.05 vs早期DKD组。

2.3 不同组间血清TNF-ɑ及IL-8水平的比较(见表2) NGR、单纯T2DM患者及早、晚期DKD患者比较，血清TNF-ɑ及IL-8水平均呈逐渐升高趋势，NGR组<单纯T2DM组<早期DKD组<晚期DKD组(P<0.05)。

组别TNF-ɑIL-8正常对照组18．5±10．74．2±0．6单纯T2DM组20．8±10．5∗5．8±0．8∗早期DKD组23．4±9．6∗#5．4±1．2∗DKD尿毒症组35．5±11．9∗#Δ6．6±1．9∗#Δ

*P<0.05 vs正常对照组；#P<0.05 vs单纯T2DM组；ΔP<0.05 vs早期DKD组。

2.4 相关分析 相关分析显示血清25 (OH)D水平与TNF-ɑ呈负相关(r=-0.368,P<0.05)。

3 讨论

糖代谢紊乱参与了DKD的发病[11]，本研究也发现类似现象。此外，近年来研究发现DKD发病还可能与炎症相关[1-3]。本研究也发现DKD尿毒症患者血清TNF-ɑ及IL-8水平明显高于其它2组T2DM患者和NGR组,提示血浆炎症细胞因子可能与T2DM和DKD的发生和发展有一定的关系。

维生素D是一种新的神经内分泌-免疫调节激素，维生素D除具有调控钙、磷代谢和骨稳定状态等作用外，还参与了炎症及免疫调节等一系列病理生理过程。 然而，维生素D缺乏或不足与DKD的关系，尤其不同时期2型DN患者血清25 (OH)D的水平变化及其与炎症细胞因子关系如何，目前鲜见报道。为此，本研究测定了糖尿病和不同时期DN患者血清25 (OH)D与相关炎症细胞因子TNF-ɑ和IL-8水平，并与NGR组进行了比较，同时分析了以上研究对象血清25 (OH)D与相关炎症细胞因子和与糖代谢指标的关系。结果表明血清25 (OH)D水平T2DM患者低于NGR组, DKD尿毒症组明显低于单纯T2DM组和早期DKD组，单纯T2DM组和早期DKD组比较差异无统计学意义。这与前人研究结果一致[12-13]。

本研究还发现4组血清TNF-ɑ及IL-8水平均呈逐渐升高趋势，NGR组<单纯T2DM组<早期DKD组<晚期DKD组，提示DKD发病还可能与炎症相关，这与前人研究结果相似[1-2]。同时，本研究线性相关分析发现，血清25 (OH)D水平与TNF-ɑ呈负相关。提示炎症细胞因子对T2DM和DKD发生发展的整个过程可能都存在影响，且25 (OH)D可能与炎症细胞因子水平的病理生理变化有关。

由于DKD患者机体存在极其复杂的代谢、免疫功能紊乱，一旦发展到终末期肾衰竭，往往比其它肾脏疾病治疗更加辣手。因此进一步探索其发病机制，以便制定更加有效的防治措施，已成为当前糖尿病和肾脏病学界十分热点的课题。

总之，本文研究结果初步揭示了DKD患者外周血25 (OH)D水平与炎症细胞因子的关系，从而可能为有效防治DKD的发生发展提供一定依据，但其具体机制目前不清楚，有待进一步研究探索。

[1] Guadalupe O M, Virginia L P, Oscar L F, et al. Suppressors of cytokine signaling abrogate diabetic nephropathy[J]. J Am Soc Nephrol, 2010, 21(5):763-772.

[2] Juan F, Navarro G, Carmen M F, et al. The role of inflammatory cytokines in diabetic nephropathy[J]. J Am Soc Nephrol, 2008, 19(3):433-442.

[3] Yang M,Gan H, Shen Q, et al.Proinflammatory CD14+CD16+ monocytes are associated with microinflammation in patients with type 2 diabetes mellitus and diabetic nephropathy uremia[J]. Inflammation,2012,35(1):388-396.

[4] Duncan B B, Schmidt M I, Pankow J S,et al. Low-grade systemic inflammation and the development of type 2 diabetes: the atherosclerosis risk in communities study[J]. Diabetes, 2003,52(7):1799-1805.

[5] Donath M Y, Shoelson S E. Type 2 diabetes as an inflammatory disease[J]. Nat Rev Immunol, 2011,11(2): 98-107.

[6] Ozfirat V,Chowdhury T A.Vitamin D deficiency and type 2 diabetes[J]. Postgrad Med J, 2010, 86(1011):18-25.

[7] Kayaniyil S,Vieth R,Retnakaran R,et al. Association of Vitamin D With Insulin Resistance and β-Cell Dysfunction in Subjects at Risk for Type 2 Diabetes[J]. Diabetes Care, 2010, 33(6): 1379-1381.

[8] Boucher B J. Vitamin D insufficiency and diabetes risks[J]. Curr Drug Target, 2011, 12(1): 61-87.

[9] Chagas C E, Borges M C, Martini L A, et al. Focus on vitamin D, inflammation and type 2 diabetes[J]. Nutrients, 2012, 4(1): 52-67.

[10] 葛均波,徐永健.内科学[M].第8版.北京：人民卫生出版社，2013：524， 741.

[11] 陈姗,刘志红,王瑞石,等. 糖尿病肾病疾病进展相关基因的基因组学研究[J].中华肾脏病杂志，2006,22(9):528-534.

[12] Diaz V A,Mainous A G,Carek P J,et al.The association of vitamin D deficiency And insufficiency with diabetic nephropathy：implications for health disparities[J]. J Am Board Fam Med,2009,22(5):521-527.

[13] 李冬梅,张颖,丁波，等. 血清25羟维生素D缺乏与糖尿病肾病的关系[J].中华内科杂志,2013,52(11):970-974.

[收稿2015-01-25;修回2015-03-10]

(编辑：王福军)

Correlation between the serum 25 (OH) D and part inflammatory cytokines levels in patients with type 2 diabetic nephropathy during different periods

YangMengxue1，XuJie2，YuJie2，YangBo1，GanHua3，ShenQing，LiXianwen1，GaoLin1

(1.Deparment of Endocrinology,The First Affliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China；2.School of Public Health, Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China；3.Department of Nephrology,The First Affliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400016,China)

Objective To measure the levels of serum 25 (OH) D concentrations, blood glucose, lipids and relevant inflammatory factors (TNF-ɑ and IL-8) in healthy people and type 2 diabetic kidney disease (DKD) patients and further determine the relationship among 25 (OH) D, glucose metabolism and relevant inflammatory factors.Methods The separated peripheral blood serum in healthy people, simple type 2 diabetes mellitus (T2DM) and type 2 DKD patients were collected. Serum 25 (OH) D levels were measured by chemiluminescence method. Serum TNF-ɑ and IL-8 concentrations were assayed by ELISA. Meanwhile, the glycemic parameters were detected and compared.Results HBA1c, fasting blood glucose, 2-h postprandial glucose levels in T2DM patients were significantly higher than those in healthy control groups (P<0.05). Serum 25 (OH) D level (12.8+6.1 ng/ml) in patients with T2DM was lower than that in NGR grourp (28+12 ng/ml). Serum 25 (OH) D level in DKD uremic group was significantly lower than that in the simple T2DM and early DKD groups, while no significant difference of serum 25 (OH) D level between early DN group and simple T2DM group was shown (P>0.05). Serum TNF - ɑ and IL - 8 levels showed an increased tendency in the following compared groups (NGR group

type 2 diabetes；diabetic nephropathy；25 (OH)D

贵州省科技攻关项目[NO：黔科合SY字(2012)3116]；贵州省科学技术基金项目[NO： 黔科合J字LKZ(2013)53]；遵义医学院博士启动基金资助项目(NO：F-588)。

R587.1

A

1000-2715(2015)02-0133-04