日本鳗鲡COX-2基因的克隆、鉴定及表达分析

张芳芳，熊 静，2，段明珠，李春艳，彭喜霞，黄文树，2，3

（1.集美大学水产学院，福建厦门 361021；2.鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心，福建厦门 361021；3.福建省海洋生物资源开发利用协同创新中心，福建厦门 361021）

日本鳗鲡COX-2基因的克隆、鉴定及表达分析

张芳芳1，熊 静1，2，段明珠1，李春艳1，彭喜霞1，黄文树1，2，3

（1.集美大学水产学院，福建厦门 361021；2.鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心，福建厦门 361021；3.福建省海洋生物资源开发利用协同创新中心，福建厦门 361021）

应用PCR及RACE技术从日本鳗鲡（Anguillajaponica）中克隆获得一个2463 bp环氧化酶基因（Cyclooxygenase-2，AjCOX-2）的cDNA序列.AjCOX-2前体为606肽，含有脊椎动物COX-2的保守结构域，以及加氧酶和过氧化物酶的活性位点.在正常生理条件下，AjCOX-2基因在日本鳗鲡的鳃、鳔和皮肤中高水平转录表达.脂多糖刺激后8 h，AjCOX-2基因在皮肤和鳔中的转录表达显著上调（P＜0．05）；多聚胞苷酸刺激后8 h，AjCOX-2在皮肤、鳔和鳃中的转录表达显著上调（P＜0．05）；迟缓爱德华氏菌（Edwardsiellatarda）刺激后8 h，AjCOX-2在鳔中的转录表达也极显著上调（P＜0．01）．结果表明，AjCOX-2基因是对外来病原刺激的早期响应基因，参与机体抵抗外来刺激物的先天免疫应答.

日本鳗鲡；COX-2；脂多糖；多聚胞苷酸；迟缓爱德华氏菌

0 引言

环氧化酶（Cyclooxygenase，COX）也称为前列腺素内过氧化物G／H合成酶（Peroxide G／H synthetase）（EC 1.14.99.1），具有催化花生四烯酸形成前列腺素内过氧化物G2（Prostaglandin endoperoxides G2，PGG2）的双加氧酶（或环氧合酶）活性，以及还原PGG2形成PGH2（Prostaglandin endoperoxides H2，PGH2）的过氧化物酶活性［1］.PGH2是前列腺素（prostaglandins）、环前列腺素（prostacyclins）及血栓烷（thromboxanes）的前体.前列腺素类物质在发热、炎症反应、维持妊娠、调节离子运输、水平衡和止血等多种生物过程中起重要作用［2］.

COX属于血红素依赖的髓过氧化物酶超家族，普遍存在于动物、单细胞生物和微生物中.此外，在植物和真菌中也发现了COX类似物，分别是病原诱导的加氧酶和亚油酸酯二醇合成酶［3］.已有研究表明，COX存在三种同工酶，即：COX-1、COX-2和COX-3.COX-3亦称为COX-1B或COX-1变体（COX-1V），是COX-1的可变剪切体［4］.哺乳类COX-1和COX-2的氨基酸序列的一致性约为60%，其三级结构相似［2］，但表达模式不同［5］.COX-1在多种组织／细胞中是组成型表达，以维持细胞的正常功能；而COX-2是组织特异性表达，并受炎症反应、细胞因子、生长因子和渗透力等诱导而上调［6］.

在硬骨鱼类中，COX同源物已从虹鳟（Oncorhynchusmykiss）［7］、金鱼（Carassiusauratus）［8］、斑马鱼（Daniorerio）［2］、青鳉（Oryziaslatipes）［9］、美洲红点鲑（Salvelinusfontinalis）［10］、塞内加尔鳎（Soleasenegalensis）［11］、波纹绒须石首鱼（Micropogoniasundulatus）［12］及狼鲈（DicentrarchuslabraxL）［13］等中得到克隆鉴定，并参与多种生物学过程.LPS、重组IL-1β和鳗弧菌（Vibrioanguillarum）可诱导狼鲈的头肾白细胞中的COX-2基因上调转录表达［13］；LPS、重组IL-1β和天蚕抗菌肽B可上调虹鳟COX-2a在性腺细胞RTG-2中的转录表达［7］，表明COX-2参与炎症反应.此外，在佛波酯PMA（phorbol-12-myristate-13-acetate）／A23187作用下，美洲红点鲑COX-2在皮肤中转录表达量显著上调［10］.而PMA／A23187诱导鱼类合成前列腺素PGF及PGE，后者参与排卵的生理过程［11］，因而认为PMA／A23187可通过诱导COX-2上调表达，促进类固醇的合成，进而促进卵母细胞的成熟和排卵［13］.海水养殖的底鳉（Fundulusheteroclitus）鳃中COX-2的表达量比淡水养殖时高出3倍，并且在淡水—海水和海水—淡水急性转移时COX-2的表达量迅速发生改变，表明COX-2可调节氯化钠分泌［14］.在二恶英的诱导下，斑马鱼脑中COX-2的表达增加，进而促进了血栓素形成，导致中脑的静脉循环衰竭［15］.

鳗鲡（Anguillaspp）是世界主要水产养殖种类之一，也是中国重要的经济鱼类，近十年来，鳗鲡养殖发展迅速，根据《2014年中国渔业年鉴》统计，2013年中国鳗鲡产量达到2.06×105t，有着巨大的经济效益.然而，目前对其免疫反应机理的研究仍然匮乏，因此，期望通过研究中国主要养殖种类日本鳗鲡（Anguillajaponica）的COX-2基因及其表达规律，揭示其在免疫过程中的作用，这对于深入了解鱼类抗病机制，对养殖鱼类病害防治的免疫学基础具有十分重要的意义.

1 材料和方法

1.1 实验材料及样品的采集

日本鳗鲡体重（200±53）g，购自福建省厦门市集美大学水产养殖基地，养殖水温（28±2）℃、溶解氧（6.27±0.23）mg／L、亚硝酸盐氮（1.60±0.39）mg／L及氨氮（17.99±7.82）mg／L.迟缓爱德华菌（Edwardsiellatarda）为本实验室保存菌种.

用含丁香酚的冰水麻醉日本鳗鲡后，断尾，采集血液于经肝素钠预处理过的离心管中，混匀，2919 r／min离心20 min，收集下层细胞；随后，解剖鳗鲡，采集肝脏、肠、皮肤、胃、头肾、中肾、鳔、脾脏和鳃等组织／器官，分别于液氮中冷冻.保存于-80℃.

免疫原刺激试验采用腹腔注射法.实验分为：脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）刺激组（Sig-ma，美国，货号：L2880），注射剂量0.1 g／kg；多聚胞苷酸（polyinosinic-polycytidylic acid，Poly I∶C）刺激组（Sigma，美国，货号：GE27-4732-01），注射剂量0.1 g／kg；迟缓爱德华氏菌刺激组，注射剂量为105cfu／g；阴性对照组为磷酸盐缓冲液（PBS）.注射后分别于8，16，24，72 h采样，每组每个时间点各采集日本鳗鲡6尾.

1.2AjCOX-2基因克隆

RNA提取：加1 mL Trizol试剂（Invitrogen，美国）和5颗直径3 mm玻璃微珠至约100 mg日本鳗鲡各组织样品中，匀浆（3000 r／min，20 s，Retsch MS100（日本））后，按照Trizol试剂盒说明书（Invitrogen，美国）提取总RNA.用琼脂糖凝胶电泳法检测总RNA的完整性，用分光光度计（Thermo，NanoDrop 2000，美国）检测总RNA的浓度及纯度.

RACE扩增及全长cDNA序列验证：取日本鳗鲡脾脏总RNA（约2μg）进行反转录（SMARTerTMRACE cDNA Amplification kit，Clonetech，美国），制备RACE模板.根据日本鳗鲡脾脏cDNA文库中COX-2的EST序列，用Premier 6.0软件设计特异性引物（见表1），进行RACE（SMARTerTMRACE cDNA Amplification kit，Clonetech）和巢式PCR扩增，获得日本鳗鲡COX-2（AnguillajaponicaCOX-2，简称AjCOX-2）cDNA的3′和5′末端序列.根据5′RACE和3′RACE序列，设计引物进行PCR验证Aj-COX-2全长cDNA序列.PCR产物纯化、回收和测序等参照文献［16］的方法.

1.3 定量PCR

根据AjCOX-2 cDNA序列与AjCOX-2基因组序列（未发表数据），设计跨内含子区域引物（qAj-COX-2F和qAjCOX-2R，见表1），用Light Cycler®480 SYBR Green I试剂盒（Roche，德国）在LightCycler 480 IIRealtime PCR仪（Roche，德国）上进行AjCOX-2基因表达量分析，同时，以β-actin作为内参基因.每块96孔PCR反应板设有系列已知拷贝数的含AjCOX-2或内参基因的质粒样品，与cDNA样品一起扩增，以获得标准曲线及扩增效率.取4μg总RNA，用GoScripTMReverse Transcription System（Promega，美国）进行反转录，产物用TE buffer稀释，qPCR反应体系及相关参数参考文献［16］，并绘制产物的熔解曲线以验证扩增的特异性.

表1 引物序列Tab.1 List o f prime r sequences

数据处理：以β-actin表达量为基准，对样品进行标准化处理.不同组织／器官的AjCOX-2基因表达水平是以标准化样品中靶基因的绝对表达量乘以1000来表示.免疫源刺激后基因的表达水平研究，是以同一时间点刺激组样品中靶基因的绝对表达量除以生理对照组样品中靶基因的绝对表达量来表示.

1.4 序列生物信息学分析

在NCBI网站（http：／／blast.ncbi.nlm.nih.gov／）进行序列基础分析.利用ExPASy工具（http：／／web.expasy.org／translate／）翻译氨基酸序列；SignalP 4.1 Server（http：／／www.cbs.dtu.dk／services／SignalP）分析信号肽；NetPhos Server（http：／／www.cbs.dtu.dk／services／NetPhos）分析糖基化位点；PROSITE（http：／／us.expasy.org／tools／scanprosite）分析蛋白质的功能域；SIAS（http：／／imed.med.ucm.es／Tools／sias.htm l）比较氨基酸序列一致性及同源性；使用MEGA 5.0软件的邻接法（N-J法）构建基于氨基酸序列的系统进化树.氨基酸序列数据源于Ensembl网站（http：／／asia.ensembl.org／index.html）.

1.5 数据统计分析

数据结果使用Excel软件计算，采用单因素变量方差分析法（ANOVA）分析免疫原刺激样品间AjCOX-2表达量差异，利用Dunnett t-Test（2-sided）进行多重比对.所有数据均用平均值±标准误差（SEM）的方式表示，P＜0．05表示差异显著，P＜0．01表示差异极显著.利用GraphPad Prism v5.0软件作图.

2 结果

2.1AjCOX-2基因的序列分析

根据AjCOX-2的EST序列，进行RACE和巢式PCR扩增，获得5′RACE产物906 bp、3′RACE产物1801 bp及中间产物443 bp，经序列拼接后得到AjCOX-2的全长cDNA序列，并用引物AjCOX-2 fl-F和AjCOX-2 fl-R验证其开放阅读框.结果显示：AjCOX-2 cDNA全长2463 bp，GenBank登录号为KP888157，其中5′UTR为120 bp，开放阅读框为1821 bp编码一个607肽，3′UTR为523 bp.3′UTR中包含保守的终止信号（AATAAA）、PolyA序列，及6个与RNA不稳定性相关的ATTTA位点.生物信息学分析结果：AjCOX-2前体肽相对分子质量为69 320，pI为7.06，N-末端21个氨基酸残基为信号肽（见图1）.此外，还含有脊椎动物COX-2前体肽保守的12个半胱氨酸残基（其中C25—C36、C26—C149、C30—C46、C48—C58和C559—C566分别形成五对二硫键）、3个环氧化酶活性位点（Y375，H378和S520）、2个过氧化物酶活性位点（Q203和H207）、4个糖基化位点（N-57、-134、-406、-585）、2个血红素结合域（212-KALGH-216和291-WLREHNRVCD-304），以及C-端的内质网滞留信号（604-TSEL-607）（见图1）.

2.2AjCOX-2基因的氨基酸序列多重比对及系统进化树构建

选取哺乳类、鸟类、两栖类和硬骨鱼类代表物种COX-2同源物与本研究AjCOX-2的全长氨基酸序列进行多重比对.结果显示，AjCOX-2与其他物种COX-2的氨基酸序列一致性和相似性分别为0.678～0.777及0.7781～0.8515，其中与美洲红点鲑COX-2a的一致性和相似性均最高，有趣的是，与其一致性最低的是两栖类爪蟾，而与其相似性最低的却是人类（见表2）.脊椎动物COX-2前体肽都含有信号肽序列，其中高等脊椎动物（两栖类、鸡以及哺乳动物）的信号肽长度小于20个氨基酸残基，而硬骨鱼均大于20.在脊椎动物COX-2蛋白质序列中含有1到多个糖基化位点，其中糖基化位点N-53（相对于人类COX-2氨基酸的位置）普遍存在于所选的物种中.

多数硬骨鱼的COX-2有两个亚型，即COX-2a和COX-2b，选取的代表性的硬骨鱼类COX-2a和COX-2b进行多重比对，结果显示，COX-2a和COX-2b的蛋白质都含有6个保守的结构域，从N-末端至C-末端分别为信号肽、二聚化作用结构域1、膜结合结构域、二聚化作用结构域2、催化作用域，以及C-端的内质网滞留信号［17］.二聚化作用结构域1中的7个半胱氨酸残基位置高度保守，预测可形成3对二硫键（C21—C31、C26—C41、C43—C52），另一个半胱氨酸（C22）与催化作用域中的一个半胱氨酸（C145）形成二硫键（见图2）.在催化作用域内，存在3个环氧化酶的活性位点（Y375，H378，S520）、2个过氧化物酶活性位点（Q203和H207）及2个血红素结合域.此外，COX-2a和COX-2b前体肽分子的不同之处：COX-2a前体肽中第一个血红素结合域为“XXLGH”，而在COX-2b中为“XGXXH”；COX-2a中内质网滞留信号为“S（S／T）EL”，而在COX-2b中则为“T（S／T）EL”.

用MEAG 5.0软件的N-J法对上述16条COX-2全长氨基酸序列构建进化树，如图3所示，以人类COX-1全长氨基酸序列作为外参比.结果显示，在COX-2支中，两栖类、鸟类和哺乳类聚为一小支，鱼类聚为另一小支，其中COX-2a聚为一簇，COX-2b聚为另一簇，AjCOX-2与硬骨鱼的COX-2a聚在一簇.结果表明，COX-2的蛋白质符合传统的进化模式，进化树与物种之间的进化关系基本对应.

表2AjCOX-2与代表性脊椎动物的COX-2基因编码蛋白的比对Fig．2 Between pro teins encoded byAjCOX-2 andCOX-2 gene in rep resentative vertebrates

图2 A jCOX-2与其他代表物种的COX-2基因的氨基酸序列多重比对Fig.2 Multiple a lignmentof AjCOX-2 with COX-2s from some representative species

图3 COX-2s的NJ统进化树Fig.3 Phylogenetic analysis ofCOX-2s in vertebrate using neighbor joiningmethod

2.3AjCOX-2在正常养殖的日本鳗鲡中不同组织／器官的表达

用引物qAjCOX-2F和qAjCOX-2R扩增日本鳗鲡cDNA得到长度为346 bp片段，产物的熔解曲线呈单一对称的峰图，说明无特异性扩增，扩增效率为1.857～1.915，同时以日本鳗鲡基因组为模板，无法获得有效扩增.以引物β-actinF和β-actinR扩增得到长度为178 bp的β-actin片段，其产物的熔解曲线也呈单一对称的峰图，扩增效率为1.903～1.927.

利用上述建立的qPCR检测方法，分别单独检测了6尾正常养殖日本鳗鲡的鳃、鳔、皮肤、肾脏、脾脏、心脏、肠、胃、性腺、肝及血液等12个组织／器官中AjCOX-2的转录表达量，结果显示，AjCOX-2 mRNA在所检测组织／器官中均有不同程度的转录表达（见图4），其中表达量较高的依次为鳃、鳔和皮肤，显著高于其他各组织器官（P＜0.05），但是，该三者间差异不显著（P＞0.05）；其次是肾脏（头肾和中肾）、心脏、脾脏和肠，其表达量显著高于其他被检测样品（性腺、血细胞、胃和肝）（P＜0.05）.

图4 AjCOX-2在日本鳗鲡多组织中的表达谱Fig.4 Expression pro file of AjCOX-2 in multiple tissues of Anguilla japonica

2.4 LPS、E.tarda及Poly I∶C刺激后AjCOX-2基因表达变化

AjCOX-2在日本鳗鲡不同组织／器官中不同程度地表达，并且在鳃、鳔及皮肤中大量表达.因此，本文进一步检测了LPS、Poly I∶C、E.tarda活体刺激后，该基因在鳃、鳔和皮肤中的转录表达变化情况，结果显示：

1）LPS刺激.在皮肤中，LPS刺激后，短期内（8 h）AjCOX-2的转录表达量极显著升高，是对照组的7.3倍（P＜0．01），至16 h已下降，但是仍显著高于对照组（P＜0．05）（见图5a）；在鳔中，LPS刺激后8 h，AjCOX-2转录表达也显著上调（P＜0．05）（见图5b）；然而，在鳃中，受LPS刺激后，前72 h，AjCOX-2的表达量不但没有上调反而显著下调，显著低于对照组（P＜0．05）.

2）E.tarda人工感染.不同于LPS刺激结果，迟缓爱德华氏菌刺激后，皮肤中AjCOX-2基因的表达无显著变化（P＞0．05）.在鳔中，刺激后8 h，AjCOX-2的表达量极显著增加（P＜0.01），是对照组的6.08倍；16 h时，无显著差异；而在24 h和72 h时显著高于对照组（P＜0.05），但是上升的幅度不大，分别为2.31和2.19倍.在鳃中，刺激后8 h无显著变化；在16 h时，AjCOX-2的表达量极显著上调（P＜0．01）；24 h时，不显著下降；而在72 h时却极显著下调（P＜0．001），仅为对照组的0.43倍（见图5b）.

3）Poly I∶C刺激.在刺激后8 h时，AjCOX-2在鳃、皮肤及鳔中均显著或极显著上调（P＜0.05）；在刺激后16 h时，在鳃和皮肤中AjCOX-2的表达仍呈极显著（P＜0．01）和显著（P＜0．05）上调，随后下降；在刺激后72 h，AjCOX-2在鳃中的表达量极显著下调（P＜0．001）（见图5c）.

图5 AjCOX-2受LPS、E.tarda和Poly I:C诱导表达模式Fig.5 Modulation ofexp ression of AjCOX-2 in skin,swim bladderand gillafter intraperitonea linjection with LPS,E.tarda and Poly I:C

3 讨论

COX-2是一种具有环氧化酶和过氧化酶活性的酶，参与发热、维持妊娠、调节离子运输、炎症反应、水平衡和止血等多种生物过程［2］.本研究克隆了日本鳗鲡的COX-2（AjCOX-2）全长cDNA序列，解析其分子特征并研究了其表达模式.

3.1AjCOX-2属于硬骨鱼COX-2a基因

哺乳类、鸟类和两栖类等高等脊椎动物体内仅存在一个COX-2基因，而在低等脊椎动物如硬骨鱼中，可能由于进化过程中选择性染色体区域的叠加作用，出现两个COX-2基因，即COX-2a与COX-2b［7］.系统进化分析发现，本研究的AjCOX-2与其他硬骨鱼的COX-2a聚在同一簇，支持率为100%；氨基酸序列多重比对的结果也支持AjCOX-2应归属于COX-2a，其与美洲红点鲑COX-2a及虹鳟COX-2a的一致性及相似性都最高；此外，AjCOX-2的第一个血红素结合域和C端的内质网滞留信号分别为KALGH与TSEL，符合硬骨鱼COX-2a的“XXLGH”与“S（S／T）EL”，而明显不同于COX-2b的基序.综上，AjCOX-2应属于硬骨鱼COX-2a.

3.2AjCOX-2基因的表达具有组织特异性

硬骨鱼COX-2基因的转录表达具有组织特异性.在正常养殖的日本鳗鲡中，AjCOX-2主要在鳃中高水平表达，该结果与其他硬骨鱼COX-2基因的转录表达结果基本一致.比如，在塞内加尔鳎，COX-2在睾丸、输卵管和鳃中高水平转录表达［11］；底鳉COX-2在鳃和肾脏中大量转录表达［14］；斑马鱼COX-2a在鳃、肠及睾丸中的高水平转录表达量，而COX-2b在鳃，心脏和卵巢中大量表达［2］.此外，有研究报道，COX-2在硬骨鱼的卵巢／睾丸中高水平转录表达［2，10-11］.而本研究AjCOX-2在性腺中的转录表达量较低，原因可能是，前人报道的性腺高水平表达的鱼类皆为性成熟的成鱼［18-20］，而本研究中所选择的日本鳗鲡虽然达到商品规格，但其性腺远未成熟.然而，AjCOX-2在性腺表达量水平较低是否真与鳗鲡的性腺不成熟有关，有待进一步研究.此外，本研究发现AjCOX-2在鳔和皮肤中高水平转录表达，然而，有关COX-2基因在硬骨鱼的鳔中转录表达的研究报道甚少，因此，本研究发现的COX-2基因在鱼类鳔中高水平表达的现象，是日本鳗鲡特有，还是普遍存在于其他硬骨鱼中，有待进一步研究确认.

此外，本文还发现COX-2基因在日本鳗鲡的玻璃鳗阶段具有极高的转录表达水平，其表达量甚至是本研究日本鳗鲡黑仔鳗的鳃（转录水平最高的器官）的1.5倍（未发表数据）.分析原因，可能与玻璃鳗是从半咸水的河口中捕捞到的有关.有研究发现海水养殖的鳉COX-2在鳃中的表达量比淡水养殖时高出了3倍，并且在淡水—海水和海水—淡水急性转移中会快速短暂地改变COX-2的表达量［14］.AjCOX-2是否参与氯化钠的调节，及其调控模式有待进一步研究.

3.3 外源刺激物调节AjCOX-2基因的转录表达

有研究发现，受LPS刺激后6 h，金鱼头肾细胞中COX-2转录表达水平极显著上调；受LPS刺激后6 h虹鳟COX-2a在性腺细胞RTG-2中的mRNA表达也显著上调［7］；在LPS和重组IL-1β诱导后24 h狼鲈COX-2在其头肾白细胞mRNA中的表达上调并达到最大值［13］；在鳗弧菌（Vibrio anguillarum）感染后2周，COX-2基因在狼鲈的头肾白细胞中的表达达到了最大值，诱导后3周表达量下调［13］.这些结果与本研究相似，LPS刺激后8 h，AjCOX-2在皮肤和鳔中的转录表达显著上调（P＜0．05）；Poly I∶C刺激后8 h，AjCOX-2在皮肤、鳔和鳃中均显著上调表达（P＜0．05）；E．tarda刺激后8 h，AjCOX-2在鳔中的表达也极显著上调（P＜0．01）.本研究表明，AjCOX-2是对外来病原刺激的早期响应基因，参与机体抗外来刺激物的先天免疫应答.

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［20］SORBERA L A，ASTURIANO JF，CARRILLOM，et al.Effects of polyunsaturated fatty acids and prostaglandins on oocytematuration in a marine teleost，the European sea bass（Dicentrarchuslabrax）［J］.Biology of Reproduction，2001，64（1）：382-389.

（责任编辑 朱雪莲 英文审校 张子平）

M olecular Cloning，Characterization and Expression ofCOX-2 in Japanese eel，Anguillajaponica

ZHANG Fang-fang1，XIONG Jing1，2，DUANMing-zhu1，LIChun-yan1，PENG Xi-xia1，HUANGWen-shu1，2，3
（1.Fishery College，Jimei University，Xiamen 361021，China；2.Engineering Research Center of the Modern Technology for Eel Industry，Ministry of Education，Xiamen 361021，China；3.Fujian Collaborative Innovation Center for Exploitation and Vtiligation of Marine Biological Resources，Xiamen 361021，China）

In this study，a full-length cDNA forCyclooxygenase-2（AjCOX-2）was successfully cloned from the Japanese eel（Anguillajaponica）by PCR and RACE.The predicted protein ofAjCOX-2 is606 amino acids in length，which contained all the conservative structural domains and the active sites for both the peroxidase and cyclooxygenase as in its vertebrate homologues.In physiological condition，AjCOX-2 mRNA was highly expressed in gill，skin and swim bladder in Japanese eel.Additionally，a significant increasingAjCOX-2 mRNA was detected in both skin and swim bladder（P＜0．05）at 8 h afterinvivointraperitoneal challenged with LPS and Poly I∶C，whilst a significant up-regulation ofAjCOX-2 mRNA was found only in swim bladder at8 h after challenged byEdwardsiellatarda，a pathogenic bacterium isolated from Japanese eel.The results suggested thatAjCOX-2 might be an early immediate gene in response to the immune stimuli and involved in the innate immune response against the pathogens infection in Japanese eel.

Anguillajaponica；COX-2；LPS；Poly I∶C；Edwardsiellatarda

S 917

A

1007-7405（2015）05-0321-12

2015-05-14

2015-06-05

国家自然科学基金项目（31172438）；福建省自然科学基金项目（2012J06008）；福建省科技项目（201311180002）；福建省教育厅项目（JA12195）

张芳芳（1990—），女，硕士，从事水产动物病害防治方向研究，通信作者：黄文树（1973—），男，副教授.E-mail：wshuang＠jmu.edu.cn.