肝细胞癌中p53和survivn的表达及临床意义*

王为东 秦 琴 陈文芳 李玉军

(1.蒙阴县人民医院病理科，山东蒙阴276200;2.青岛大学医学院附属医院病理科，山东青岛266003)

肝细胞癌中p53和survivn的表达及临床意义*

王为东1秦 琴1陈文芳1李玉军2

(1.蒙阴县人民医院病理科，山东蒙阴276200;2.青岛大学医学院附属医院病理科，山东青岛266003)

目的探讨抑癌基因p53和survivin在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化和组织芯片技术检测296例HCC中p53和survivin的表达，并采用统计学方法比较其临床意义。结果在296例HCC中，p53总的阳性率为13.9%，其阳性表达与HCC的组织学分级、术后无瘤生存时间、淋巴结转移和肝脏被膜浸润有关，差异具有统计学意义(P＜0.05或0.01)，与其他指标无关(P均＞0.05)。survivin在HCC中总的阳性表达率为72.3%，其阳性表达与HCC的组织学分级、临床分期、术后无瘤生存时间、肿瘤直径、淋巴结转移和肝脏被膜浸润有关，差异具有统计学意义(P＜0.05或0.01)，与其他指标无关(P均＞0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示，p53和survivin在HCC中阳性表达患者无论其术后无瘤生存时间还是总生存时间均缩短，差异具有统计学意义并(P均＜0.01)。Pearson相关分析显示，二者在HCC中表达呈正相关(r=0.141，P= 0.015)。结论p53和survivin在HCC中的表达与肿瘤的临床预后密切相关，两者均可作为HCC患者预后不良的判断因子。

肝细胞癌;p53;survivin;组织芯片;免疫组化

原发性肝癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，发病率逐年上升，在我国发病率居各种恶性肿瘤的第二位［1］。在所有原发性肝癌中，约90%为肝细胞癌(HCC)。抑癌基因p53被称为细胞的守门员，在各种致癌因素的作用下，使p53基因发生突变，由野生型p53突变为突变型p53，失去对肿瘤的抑制作用，从而使细胞发生癌变。Survivin，即生长素，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，同时促进肿瘤血管生长［2］，。本研究采用组织芯片和免疫组化技术研究296例HCC中p53和survivin的表达情况，探讨二者对HCC患者预后的影响及二者表达的相关性。

1 材料与方法

1.1 标本来源选自青岛大学医学院附属医院病理科2004.1－2009.12经中性福尔马林固定、石蜡包埋的386例原发性肝癌组织，在386例原发性肝癌组织中失访28例(失访率为7.25%)，另因术前行肝动脉栓塞化疗、随访时间不足、非HCC及脱片等原因，剩余296例纳入分析，296例HCC中男性249例，女性47例，年龄27～82岁，中位年龄55岁，根据WHO组织学分级标准及国际抗癌联盟制定的TNM分期标准等连同患者的术后无瘤生存时间、淋巴结转移、脉管癌栓、肿瘤大小等指标一同纳入分析。

1.2 试剂与方法

1.2.1 组织芯片构建根据HE染色选择具有代表性的部位，芯片制备系统制片时取样针直径为1.5 mm，组织间距为1 mm。

1.2.2 免疫组化染色免疫组化采用SP法，兔抗人单克隆抗体p53和survivin均来自北京中杉生物有限公司，用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判定p53阳性部位为细胞核，survivin阳性部位主要为细胞浆，部分表达于细胞核。结果判定综合细胞染色强度和阳性细胞百分数计算，染色强度分4个等级:不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。阳性细胞所占百分比分为5级计分:阳性细胞率≤5%为0分，阳性细胞率6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。两种评分标准相乘:0分为“－”，1～3分为“+”;4～8分为“++”;9～12分为“+++”。把“－～+”作为“阴性”处理，把“++～+++”作为“阳性”处理。

1.4 统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行处理，定性资料用χ2检验和pearson相关分析，生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank检验分析。

2 结果

2.1 p53和survivin的表达与HCC患者临床病理特征的关系p53的表达与HCC患者组织学分级、术后无瘤生存时间、淋巴结转移和肝脏被膜浸润相关，差异具有统计学意义(χ2=9.075，7.763，12.671，7.024;P=0.003，0.005，0.000，0.008)，与其他指标无关(P均＞0.05)。survivin的表达与HCC患者组织学分级、临床分期、术后无瘤生存时间、肿物直径、淋巴结转移和肝脏被膜浸润相关，差异具有统计学意义(χ2=5.057，22.334，4.384，5.934，6.481，15.435;P=0.025，0.000，0.036，0.015，0.011，0.000)，与其他指标无关(P均＞0.05)，见表1。

表1 HCC中survivin和p53的表达与临床病理参数的关系

2.2 p53和survivin的表达情况与HCC患者术后无瘤生存时间和总生存时间的关系Kaplan-Meier生存分析显示，HCC中p53阳性表达患者其中位复发时间和中位总生存时间较阴性表达者缩短，差异具有统计学意义(χ2=9.560，10.071;P=0.002，0.002)。HCC中survivin阳性表达患者其中位复发时间和中位总生存时间较阴性表达者缩短，差异具有统计学意义(χ2=9.822，11.453;P=0.002，0.001)。见表2、图1、2。

2.3 HCC中p53和survivin表达的相关性Pearson相关分析显示，P53和survivin在HCC中的表达呈正相关(r=0.141，P=0.015)。

表2 survivin和p53的表达情况与无瘤生存和总生存期的关系

图1 p53在HCC中的表达与术后总生存分析

图2 survivin在HCC中的表达与术后总生存分析

3 讨论

P53是人类最早发现的抑癌基因之一，其主要生物学功能是稳定染色体、促进细胞分化和衰老，诱导细胞凋亡［3－4］。在各种致瘤因子的作用下，由野生型p53突变为突变型p53，不但失去抑癌活性，后者还会促进癌细胞的生长，由抑癌基因变为癌基因［5］。野生型p53蛋白的半衰期短，免疫组化技术检测到的是突变型p53，而不是野生型p53［6］。

在HCC中，p53基因突变是最为频发的事件，突变型p53蛋白的过表达是肝癌细胞低分化、高转移、预后差的生物学标志之一［7］。在本实验中，p53阳性表达患者其组织学分级、术后无瘤生存时间、肝被膜浸润等预后不良指标均较阴性表达患者差，差异具有统计学意义，与以上实验及研究基本吻合。

Survivin是近年发现的抑制蛋白家族新成员，是最强的凋亡抑制蛋白，与肿瘤的分化、增殖密切相关，在绝大多数分化完全的组织内不表达，但在多数肿瘤中表达活跃［8］。Survivin在肿瘤组织的过表达可能是因为survivin基因在SP1位点依赖性转录失调引起，在癌细胞中survivin启动子的活性较正常细胞增加10倍以上［9］。多种研究［9－12］显示，survivin在乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结肠癌等中的高表达提示预后不良，与本实验中survivin在HCC中的高表达与组织学分级、临床分期、术后无瘤生存时间、淋巴结转移及肝脏被膜浸润等相关，阳性表达患者其中位复发时间及中位总生存时间均较阴性表达患者短，与以上研究吻合，说明survivin可作为提示HCC预后不良的一个标记物。

免疫组化只是标记肿瘤细胞中蛋白的表达情况，有时不能完全真实的反应该蛋白的基因情况，因此准确检测以上两种标记物的基因表达情况，并探讨作为基因靶点在肿瘤靶向治疗中的可行性，是今后研究的方向之一。

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The expression and clinical significanceof p 53 and survivin in hepatocellelur carcinoma(HCC)

WANG Wei-dong1QIN Qin1CHEN Wen-fang1LI Yu-jun2
(1.Dept.of Pathology，the People＇s Hospital of Mengyin County，Mengyin 276200，China; 2.Dept.of Pathology，Qingdao University Medical College，Qingdao 266003，China)

Objective:To investigate the expression of p53 and survivin and their clinical significance in HCC.Methods:The expression of p53 and survivin were determined by immunohistochemistry and tissue microarray in 296 cases of HCC and their clinical significance was observed by SPSS.Results:The positive rate of p53 was 13.9%，and was closely correlated to the histological grade，the survival months with no tumor after operation，lymph node metastasis and liver capsule invasion(all the P＜0.05 or 0.01)，but not to the rest of parameters(all the P＞0.05).The positive rate of survivin was 72.3%and was closely correlated to the histological grade，TNM clinical stage，the survival months with no tumor after operation，lymph node metastasis tumor diameter and liver capsule invasion(all the P＜0.05 or 0.01)，but not to the rest of parameters(all the P＞0.05).The positive expression of p53 and survivin were significantly related to short-term survival by Kaplan-Meier analysis(P＜0.01).The two biomarkers were positively interrelated(r=0.146，P=0.015).Conclusion:The positive expression of p53 and survivin closely correlates with multiple clinicopathological parameters，which may indicate the poor prognosis of HCC.

hepatocellular carcinoma(HCC);p53;survivin;tissue microarray;immunohistochemistry

R735.7

A

1004-7115(2015)07-0733-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.07.004

2015-02-11)

王为东(1973－)，男，主治医师，硕士研究生，主要从事病理诊断工作。

李玉军，主任医师，教授，硕士研究生导师。