白术对S180致肝腹水小鼠外周血中NO和iNOS的影响

欧 燕，袁洪霞，关富敏

重庆市綦江区人民医院，重庆 401420

白术对S180致肝腹水小鼠外周血中NO和iNOS的影响

欧 燕，袁洪霞，关富敏

重庆市綦江区人民医院，重庆 401420

目的：考察白术水煎剂对S180致肝腹水的小鼠外周血中NO和iNOS的影响，探讨其抗腹水的作用机制。方法：将SPF级雄性昆明种小鼠，依体质量随机分为空白组、模型组、腹水用药组（白术水提取物高G、中Z、低剂量D3组）、阳性药物组（阳性药：环磷酰胺，CTX组）共6组，分别按照实验方案给予相应受试药物，S180造模，连续给药7天，分取各组动物静脉血，测定相应指标含量或活性。结果：白术用药组与CTX组对S180致肝腹水的小鼠均有抑制肿瘤的作用；与空白组相比，模型组小鼠外周血中NO和iNOS的含量明显上升；与模型组相比，CTX组合白术G、Z、D组的NO和iNOS的含量都有所下降，但各组的NO和INOS降低率不同。结论：白术水煎剂主要通过调节外周血中NO和iNOS的含量来起到抗S180致肝腹水的作用。

白术水提物；肝腹水；NO；iNOS

白术具有“健脾燥湿，利水消肿”的功效，多用于水湿内停之痰饮，或水气外溢之水肿，近年研究白术抗肿瘤、抗炎、提高机体免疫力的实验报道较多。经查阅文献，白术对肝腹水治疗方面的试验研究较少，仅有几篇文献报道白术对正常小鼠的利尿作用，以及白术对肝腹水的临床应用观察[1]。一氧化氮（N O）是一种存在于体内各种细胞中的生物介质，参与机体的多种生理病理过程[2]，早在1991年，Va l l a n ce[3]首先提出N O导致肝硬化高动力循环的假说，认为血清中N O产生、增加与肝硬化患者并发症的发生有一定关系。因此，本实验主要以N O和i N O S为指标来考察白术对S180致肝腹水的小鼠的影响，以期为从分子的角度来寻找肝腹水的发生机制。

1 实验材料

1.1 实验动物 实验动物：S P F级雄性昆明种健康小鼠60只，医用实验动物合格证号：111实动管制第17号，体质量28～32g，瘤株：小鼠肉瘤S180。

1.2 实验仪器 相关手术器械；万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司提供）；冷冻离心机。

1.3 试药、试剂 环磷酰胺（批号20130202，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，临用前用生理盐水配成0.6 m g/mL)；白术（安徽海鑫中药饮片有限公司，产地浙江）；生理盐水（西南药业）；无水乙醇等均为分析纯；N O试剂盒（批号：A014-3）、i N O S三型同测试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 白术水煎液的制备[4]取白术100 g，加蒸馏水适量，浸泡30分钟，煎煮2次，每次1小时，过滤，合并2次滤液，浓缩并定容至200mL，相当于生药浓度50%，并取适量50%白术水煎液，用蒸馏水分别稀释到31.8%、15.9%以及5.3%生药浓度，装瓶备用，低温保存。以30g成年小鼠与70 kg成人体表面积换算，30 g小鼠灌胃31.5%、15.7%、5.3%生药浓度的白术水煎液1mL相当于70 kg成人剂量60 g/d(高剂量组)、30 g/d(中剂量组)、10g/d(低剂量组)。

2 实验方法[5]

2.1 模型复制及取材[6]腹腔接种小鼠肉瘤S180细胞小鼠6～7天后腹水形成明显，将生长7天的腹水模型种鼠颈椎脱臼处死，蜡版固定，用碘伏、75%乙醇腹部局部消毒，在无菌条件下取出乳白色浓稠活体腹水，与生理盐水注射液1∶3稀释，移植于用75%乙醇消毒的受试小鼠，给右前腋窝皮下准确接种瘤液0.2mL。小鼠连续给药7天，最后一次给药8小时后眼球采血，室温静置2小时，冷冻离心机4℃，3 500 r p m，离心10分钟，分离血清，备用；取血后立即处死动物，称体重后颈椎脱臼处死小鼠，完整剥取瘤块。

2.2 分组及给药 所有动物适应性喂养3天按体重分层随机分为6组：空白组、模型组、腹水用药组（白术水提取物高、中、低剂量3组，分别标示为白术G、Z、D组）、阳性药物组（阳性药：环磷酰胺0.6 m g/mL，按20 m g/kg灌胃，标示为C T X组）共6组，每组10只。各实验组自实验当天开始按规定给药量灌胃给予相应药物。实验分组及试药剂量设置见表1。

表1 实验分组及试药剂量设置

2.3 观测指标[7]

2.3.1 抑瘤率 称取除空白组外各组瘤块的重量，计算抑瘤率。抑瘤率=（模型组平均瘤重-给药组平均瘤重）／模型组平均瘤重×100%

2.3.2 NO含量测定 10%生理盐水血浆，321500 r p m离心10分钟，取上清，采用硝酸还原酶法，按照N O试剂盒说明书测定组织和血液的N O含量。

2.3.3 iNOS活性测定 根据试剂盒说明书进行相关预试，选取最佳测定浓度，测定组织i N O S。

2.4 统计学方法 用S P SS 19.0软件进行统计分析。数据以(±s)表示，采用A N OVA分析，组间多重比较进行L S D-t检验，不符合正态分布的组间采用非参数检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各药物组对S180致肝腹水的小鼠的抑瘤率统计 与模型组相比，各用药组的瘤重均较模型组轻（P＜0.05）。见表2。

表2 各药物组对S180致肝腹水的小鼠肉瘤的影响

3.2 各药物组对S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量及iNOS活性的影响 与模型组相比，各实验组均可明显降低肝腹水的小鼠外周血中N O含量及i N O S活性(P＜0.05)，环磷酰胺组降低N O达53.1%(P＜0.05)，降低i N O S达74.1%，白术G组降低N O为47.5%(P＜0.05)，降低i N O S达72.3%，其他各组N O值均呈下降趋势。见表3-4及图1-2。

表3 各药物组对S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量影响

图1 各药物组对S180致肝腹水的小鼠外周血中NO含量影响

表4 各药物组对对S180致肝腹水的小鼠外周血中iNOS含量的影响

图2 各药物组对S180致肝腹水的小鼠外周血中iNOS含量的影响

4 讨论

N O是一种免疫分子和炎症介质，也是一种自由基，但又具有细胞毒性，可引起多种病理生理效应，与血管扩张、免疫、抗肿瘤、蛋白质合成等有关[8]。N O S活性增高及N O浓度的增加与炎症程度呈平行关系。体内N O S有结构型N O S(c N O S)和诱导型N O S(i N O S)2种[9]。c N O S先天性存在，生成N O数量较少，产生迅速。i N O S在生理情况下基本不表达，当受到某些细胞因子、病原微生物或肿瘤细胞刺激后，即被激活，大量产生i N O S，且持续时间长。i N O S催化的N O对细胞有杀伤毒性及促炎作用。此前有研究证实了肝硬化肝功能损害程度与N O水平密切相关，肝脏储备功能越差，N O水平越高。

[1] 宿廷敏，王敏娟，阮时宝.白术的化学成分及药理作用研究概述[J].贵阳学院学报(自然科学版)，2008，3(2):32-35.

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[3] 贝光明，李海强，韦刚.肝硬化腹水形成机制及治疗的研究进展[J].中国临床新医学，2011，4(7):677-680.

[4] 施文荣，刘艳，陈玲，等.白术燥湿利水作用的研究[J].福建中医学院学报，2007，（17）(3):48-49.

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The Influenceof BaiZhu on NO and INOS in PeripheralBlood ofM ice w ith S180-induced Liver Ascites

OU Yan,YUAN Hongxia,GUAN Fumin
Chongqing Municipality Qijiang District People's Hospital,Chongqing 401420,China

Objective:To investigate theeffectsof BaiZhu(Atractylodesmacrocephala)decoction on NO and i-NOS in peripheral blood of mice w ith S180-induced liver ascites.Methods:The m ice were randomized into six groups:the blank group,themodelgroup,liverascitesmedication groups(high dosage group of BaiZhu decoction G, moderate dosage group of BaiZhu decoction Z and low dosage group of BaiZhu decoction D3)and positivemedicine groups(positivemedicine:cyclophospham ide,CTX group),all them ice received the correspondingmedicine according to experimental program,themodelwas prepared with S180,treated for seven consecutive days,and the blood was drawn out from different groups to detect the contents and the activity of the corresponding indexes.Results: BaiZhu and CTX could inhibit tumorof them icew ith S180-induced liverascites;compared w ith the blank group,NO and iNOS in peripheral blood ofm ice increased obviously in themodel group;compared w ith themodel group,the contentsof NO and iNOS in peripheralblood ofm ice deceased in G,Z and D groupsof CTX,but the decrease ratesofNO and iNOS in peripheralblood ofm ice in all the groupswere different.Conclusion:BaiZh u decoction could fightagainstascitesofmice suffering from S180-induced liverascites through regulating the contentsof NO and iNOS in peripheralblood.

BaiZhu decoction;liverascites;NO;iNOS

R285.5

A

1004-6852(2015)08-0015-03

2014-10-25

欧燕(1987—)，女，硕士学位，药剂师。研究方向：临床药学。