正交实验优选归芪无糖颗粒剂的水提工艺

张中华

甘肃省中医院药学部，甘肃 兰州 730050

正交实验优选归芪无糖颗粒剂的水提工艺

张中华

甘肃省中医院药学部，甘肃 兰州 730050

目的：优选出归芪无糖颗粒剂处方药材的最佳水提取工艺。方法：以加水量、回流时间和提取次数为因素，按正交实验设计进行实验，结果以得膏率和芍药苷含量为指标，确定最佳条件。结果：最佳提取条件为8倍量的水回流1.5小时，提取3次。结论：该工艺设计合理，稳定可行。

脑卒中；赤芍；工艺研究

结果益母草压制饮片的溶出曲线比传统饮片在较短煎煮时间方面略高，随着煎煮时间的延长两者溶出曲线相近，不同时间点盐酸益母草碱和干膏收率无明显差异。

3 讨论

从实验结果可知，中药压制饮片与未压制饮片相比其指标性成分和干膏率均有所提高。由于增加了饮片的密度使其在浸泡和煎煮时更易进入水中，避免饮片漂浮，更有利于饮片浸润及成分溶出，达到汤剂煎煮中“药力共出”的要求［2-3］。

压制饮片稳定性考察采用留样观察法。将已包装的益母草压制中药饮片置温度(40±2)℃，相对湿度 (75±5)%的综合药品稳定性实验箱中放置6个月，分别于0、1、2、3、6月取样，结果表明，6个月内益母草压制中药饮片加速稳定性良好

我们知道中药材的需求日益扩大，花类、全草类、叶类及部分质轻或不规则饮片，因密度小、流动性差、体积大而增加饮片生产、包装、贮藏、运输、调剂等环节中的困难［4-5］。压制饮片是针对这类饮片，在不改变饮片外观形状及内在质量，不添加任何辅料条件下将中药饮片压制成定量单体，制备工艺简便，设备简单，易操作也便于临床饮片的调配；中药压制饮片已获得国家实用新型专利，目前四川部分医院已用于临床，为实现传统中药配方的标准化、自动化生产做出了一定的贡献。

［1］ 宋英.金银花压制饮片和传统饮片的比较［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19(16):26-27.

［2］ 宋英，盛蓉.中药饮片的定量压制研制［J］.中国医院药学杂志，2012，32(18)：1459-1460.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京:化学工业出版社，1995：223-225.

［4］ 宋崎.益母草炮制工艺的优化［J］.时珍国医国药，2009，20(3):709-710.

［5］ 谢海洲.传统中药的精制与改革之我见［J］.中医药学刊，2003，21(2):177.

脑卒中［1］是一组以脑部缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，又称脑中风、脑血管意外，主要分为出血性脑中风和缺血性脑中风两大类，以脑梗塞最为常见。脑卒中是世界上最重要的致死性疾病之一，多发生于中老年人群，且病情缠绵，后遗症多。归芪无糖颗粒是在古方“佛手散”的基础上，按辨证论治的治疗原则，结合临床经验筛选参合而成，疗效确切，是脑卒中恢复期的常用药。本研究通过查阅文献，对方中的黄芪、赤芍和甘草的提取方法进行优化，采用水为溶剂，以得膏率和芍药苷含量为指标，按正交实验进行实验。

1 材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪(检测器：Waters 2487；进样器：Waters 1525)；ODS C18(Aglient，5 μm，4.6 mm×250 mm)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂提供)；电子分析天平(上海天平仪器厂提供)；超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司提供)；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂提供)。

1.2 药材及试剂 黄芪、赤芍和甘草(购自甘肃省中医院中药房)；甲醇(色谱纯)；磷酸；芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)。

2 方法及结果

2.1 芍药苷的含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱：ODS C18(Aglient，5μm，

4.6 mm×250 mm)；流动相：0.1%磷酸水-甲醇(66∶34)；检测波长：230nm；柱温：室温；进样量：10 μL；流速：1.0 mL/min。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品5.7 mg，用甲醇定容于5 mL的容量瓶中，作为对照品溶液(1.14 mg/mL)备用。

2.1.3 供试品溶液的制备 分别取提取的干膏0.3 g，加入适量甲醇，超声5分钟，提取2次，0.45 μm微滤膜过滤，定容于10mL容量瓶中，备用。

2.1.4 标准曲线的制备 分别精密吸取芍药苷对照品溶液(1.14 mg/mL)定容于5mL容量瓶中，浓度分别为0.45、0.4、0.32、0.205、0.164、0.131 mg/mL对照液，测其吸收度。以吸收度和对照品溶液浓度求得回归方程为Y=1.5416X+0.0478，r=0.999 2。在0.131～0.45 mg/mL有良好线性关系。

2.1.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样6次，测得峰面积，其RSD为4.24%，表明仪器精密度良好。

2.1.6 重复性实验 精密吸取1号供试品溶液10 μL，每隔1小时进样1次，共进样6次，测得峰面积，其RSD=3.6%，表明样品在6小时之内稳定。

2.1.7 样品测定 将制备好的供试品溶液在上述色谱条件下进样，代入标准曲线计算芍药苷的含量。

2.1.8 加样回收率实验 精密称取已知芍药苷含量的2号样品干膏约0.10 g共9份，于5 mL的容量瓶中，分别加入芍药苷对照品。按“2.1.3项”操作，进样测其吸收度，并计算平均回收率为99.1%，RSD为1.90%(n=9)。见表1。

表1 加样回收率

2.2 正交实验设计［2-7］

2.2.1 因素水平确定 采用正交试验法对提取工艺进行优选，根据文献报道［2-4］，本实验以加水量(A)、回流时间(B)、提取次数(C)为试验因素，每个因素设计3个水平，应用L9(34)正交表安排实验。见表2。

表2 提取溶剂及时间的因素水平

2.2.2 正交试验设计及结果 为综合考量提取工艺对两个指标的影响，本试验对测得的得膏率和芍药苷含量两个指标用权重法进行评分，将两个指标中测得的最大值定为100分，其他数据与最大值的比值计算得分。将得膏率与芍药苷含量的权重系数定为0.6和0.4。见表3—4。

综合评分=得膏率×0.6/43.57+芍药苷含量×0.4/0.76。

表3 提取溶剂及时间的正交实验

表4 提取溶剂及时间综合评分的方差分析

通过表3和表4的综合分析，3个因素对本实验结果均没有显著性影响(P＞0.05)，三因素的影响大小为：A2＞A1＞A3，B2＞B3＞B1，C3＞C2＞C1。确定的最优组合为A2B2C3，即8倍量的水回流1.5小时，提取3次。

3 讨论

多指标的正交设计实验分析方法有综合平衡法和综合评分法。综合平衡法就是对测得的各个指标，先逐一分别按单指标计算分析，找出其因素水平的最优组合，再根据各项指标重要性及其各项指标中因素主次、水平优劣等进行综合平衡，最后确定整体最优组合。综合评分法是将每个实验所得各指标实测值转化成一个总评分，然后以此评分作为单指标来进行统计分析。本实验采用综合评分法优选出最佳组合。

由主观分析可知三因素对本实验的影响顺序为提取次数、回流时间和加水量，由方差分析看出3个因素对本实验结果均没有显著性影响(P＞0.05)，最终确定工艺为A2B2C3，即8倍量的水回流1.5小时，提取3次。

参考文献

［1］ 徐伟峰，钱小刚.中药治疗脑中风的研究进展［J］.现代中西医结合杂志，2007，16(35):5389-5391.

［2］ 王云涛，王莉梅，金向群.赤芍的高效液相指纹图谱及液-质联用分析［J］.中成药，2010，32(7):1089-1092.

［3］ 王彦志，石任兵，刘斌，等.赤芍化学成分的分离与结构鉴定［J］.北京中医药大学学报，2006，29(4):267-269.

［4］ 黄海兰，王国明，徐波.赤芍抗氧化活性及其成分研究［J］.食品科学，2007，28(7):76-82.

［5］ 周红涛，骆亦奇，胡世林，等.赤芍与白芍的化学成分含量比较研究［J］.中国药学杂志，2003，38(9):654-657.

［6］ 阮金兰，赵钟祥，曾庆忠，等.赤芍化学成分和药理作用研究进展［J］.中国药理学通报，2003，20(9):965-966.

［7］ 刘鹰翔，马玉卓.白芍化学成分与药理研究进展［J］.中草药1995，26(8):437-439.

收稿日期：2014-09-27

作者简介：张中华(1984—)，男，硕士研究生，中药师。研究方向：中药鉴定与炮制。

Water Extraction Technology of GuiQi Sugar-free Granules Optimized by Orthogonal Design

ZHANG Zhonghua
Pharmacy Department of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730050,China

Objective:To optimize the best water extraction technology of the herbs in GuiQi sugar-free granules.Methods:By taking the amount of water,reflux time and extraction times and the factors,the experiments were conducted according to orthogonal design,the optimum conditions were determined through assessing the results with extract yield and peoniflorin contents.Results:The optimal extraction conditions were eight times of the amount of water,refluxing for 1.5 hours,extracting three times.Conclusion:The technology is reasonable,stable and feasible.

cerebral apoplexy;ChiShao;technical study

R284.2

A

1004-6852(2015)10-0056-03

2014-12-14

四川省科技计划项目(编号2011SZ0311)。

杨红梅(1989—)，女，在读硕士研究生。研究方向：中药炮制与制剂。

△通讯作者：宋英(1959—)，男，硕士研究生导师，主任药师。研究方向：中药炮制与制剂。