猪圆环病毒、猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染的病例分析

刘涛 王瑞 曲哲会 赵瑜

2015年9月中旬，河南省驻马店市上蔡县某400头母猪场，体重在35～45kg阶段猪群发生顽固性拉稀、粪便潜血或鲜红。据畜主描述，该场有一栋存栏200多头该阶段猪只，已发病近半个月，发病率在40%，病程持续一周左右即可死亡。发病期间，该场使用过痢菌净、阿莫西林和柴胡注射液，但效果不佳。

1 免疫背景

该场猪瘟、伪狂犬、蓝耳病、圆环病毒病疫苗均为国产疫苗，母猪按季度普免，商品猪猪瘟断奶前免疫一次，保育后期免疫一次，伪狂犬出生滴鼻，45日龄加强一次，圆环与蓝耳病疫苗均在15日龄免疫一次。

2 临床症状

发病猪只出现严重的咳嗽、喘气现象，眼结膜潮红，皮肤颜色苍白，膘情差，行走时步履蹒跚。地面清晰可见红色或水泥色粪便，个别严重猪只肛门处粘有红色稀粪。大群猪只打堆，采食量明显下降。

3 病理变化

对发病猪只处死后解剖可见，皮肤表面有明显铁锈色出血孔，皮下浆膜面有出血斑点，全身各处淋巴结有肿大现象，断面有出血。肠系膜淋巴结呈索样肿大，肺脏膨隆不全，部分肺叶质地坚实，可见因组织增生而形成的灰白色斑块。肝肿胀淤血；胃黏膜脱落、溃疡；肠壁淋巴小结肿胀隆起，突出于肠浆膜和黏膜表面。肾脏肿大，色泽变淡，表面散有灰白色大小不一的病灶。

4 实验室检查

4.1 主要试剂及培养基

引物由上海生工公司合成。动物总RNA快速提取试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司。基因组RNA反转录试剂盒购自Thermo公司。2XPowerPCR MasterMix（北京百泰克生物技术公司）。DNAMarker（宝生物工程（大连）有限公司）。细菌培养基（杭州天和微生物试剂有限公司）。

4.2 引物设计与合成

应用PrimerPremier5.0软件，根据GenBank已发表的序列，分别设计猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒引物如下：上游引物：5'-CCTGCACCCCGTAGAACTG-3，下游引物：5'-GCGAAACGCCTCGTAAGC-3。上游引物5'-CTCCCTGCGTGGTCTAAG-3，下游引物：5'_GCITCCTCCACTCCCArITG_3。上游引物：5'-ATGGGCATCGCCGACTACCT-3；下游引物：5'- GCCAGAAGAGCTCCCAGTGCA-3。上游引物：5'-GITATCGTATGGCGGGAGG-31；下游引物：5'- CCCCTCTCTCCCCrrTGA_3'.

4.3 细菌分离鉴定

采集病死猪的淋巴结、脾脏、肠道内容物接种于营养琼脂和普通肉汤、麦康凯琼脂平板、亚硫酸铋琼脂平板上，37℃培养24h，然后挑取单个菌落涂片、革兰氏染色。

在无菌条件下，将分离纯化的细菌，接种于细菌微量生化微反应管中，在37℃下培养24～48h，观察结果。

4.4 药敏试验

采用琼脂纸片扩增法。将细菌密度为1.5×108cfu/mL的菌液，用灭菌棉拭子蘸取，在营养琼脂平板上均匀涂布，药敏纸片贴到培养基表面，37℃条件下培养16-18h。

5 结果与分析

5.1 PCR与RT-PCR检测结果（如图1）

5.2 分离培养特性

在普通营养琼脂上，形成圆形、半透明、光滑、湿润、边缘整齐的灰白色菌落，在麦康凯琼脂形成细小、无色半透明、光滑、圆整菌落，在亚硫酸铋琼脂平板上，呈黑色菌落。取分离菌纯培养物涂片，呈两端钝圆或卵圆形，不运动，不形成芽孢和荚膜的革兰氏阴性小杆菌。

5.3 生化试验结果

生化试验结果表明，能还原硝酸盐、能利用葡萄糖产气、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶反应阳性。尿酸酶试验阴性。不发酵蔗糖、水杨苷、肌醇和苦杏仁苷。不发酵阿拉伯糖。

5.4 药敏试验结果

分离出的猪霍乱沙门氏菌对18种抗菌药的敏感性试验结果（见表1）。

6 鉴别诊断

1）慢性猪瘟与慢性副伤寒的临床症状有相似地方，容易混淆，但猪瘟皮肤常有小出血点，精神高度沉郁，不食，各种药物治疗无效，病死率极高，剖检时，脾脏不肿大，无坏死灶，但常有出血性梗死，回盲瓣口有紐扣状溃疡，淋巴结出血明显。

2）猪痢疾持续性下痢，粪便带血和黏液，呈棕色、褐色或红色。剖检时可见大肠黏膜主要病变是弥漫性出血和坏死，肠黏膜及肠内容物多呈暗红色，涂片染色，可见本病病原体——蛇形螺旋体。

3）由弯曲杆菌引起的坏死性肠炎，可见急性肠出血或下痢，剖检可见回肠出血坏死，而大肠病变较轻微，其他脏器无明显变化。

7 控制措施

建议将病猪与疑似感染病猪与健康猪只隔离，及时将粪便进行清理，并对圈舍进行消毒。病猪注射恩诺沙星，灌服蒙脱石散。紧急接种伪狂犬疫苗，猪群健康状况改善后，添加七清败毒颗粒。

8 讨论

1）根据发病情况、临床症状、病例剖检、实验室检查确诊为猪圆环病毒病、猪伪狂犬、仔猪副伤寒的混合感染。

2）发病原因分析：PCV-2和PRV主要侵害机体的免疫系统，可以造成机体的免疫抑制，猪只对其它疫病的易感性增加。养殖场随着运行时间延长，病原微生物在环境当中会逐渐蓄积起来，如果猪场自身在环境卫生和消毒工作上懈怠，必然加大猪群发病的风险。该场已运行11年，加之生产条件一般，能明显在现场看到地面潮湿、污秽的情况。仔猪副伤寒是一种条件性传染病，外界各种应激因素造成猪体抵抗力降低，可促进本病发生。

3）临床治疗需要结合实验室工作该场发病是有10余天后，之前，技术员只是单一看到猪群粪便带有血色，怀疑有猪痢疾，而使用乙酰甲喹进行治疗无效，猪群开始出现一定伤亡已无法控制时，才来到实验室作诊断。

4）疫苗免疫工作有漏洞PCV2近几年从检测情况分析可知，国内猪场野毒感染率较高。目前市场所用疫苗均为灭活疫苗，理论上将需要两次免疫，将刺激机体产生高水平IgG抗体，持续时间长。但猪场为了节约成本和降低劳动强度，多为一次免疫，免疫效果将打折扣。

2011年以来，伪狂犬在国内猪场感染的发病率有明显反弹态势，应加强中大猪抗体检测，这个阶段的猪群临床症状不十分明显，容易被忽视，形成免疫防控的漏洞，致使中大猪持续感染排毒，造成野毒在场内反复循环。当猪群野毒阳性率达到一定水平时，则会导致猪场疾病的暴发。因此猪场伪狂犬的免疫在100日龄左右还应加强一次。

5）仔猪副伤寒一年四季均可发生，尤其是在多雨季节的发生率较高。6月龄以内的仔猪较易感染，2～4月龄断奶仔猪感染率很高。虽然导致该病发生的原因较多，但最主要的还是由于养殖户饲养管理不到位所致，例如猪舍内环境脏乱差、日光照射不足、圈舍环境潮湿、饲料配方不当，影响机体发育而抵抗力降低等；气温忽然变冷等诸多因素都是引发仔猪副伤寒病发生的主要因素。通常仔猪副伤寒病都是由病猪以及带菌猪传染，并且主要是通过粪便排泄进行传染，没有进行隔离的病猪通过排泄粪便，污染了整个圈舍的饲养环境，由于都是多头仔猪同住一个圈舍，因此，其他的健康仔猪很容易被感染，严重者甚至会感染到所有的猪栏圈舍，引发大规模的仔猪发病。

6）树立“防”重于“治”思想，做好免疫工作。在规模化养殖中，在对仔猪接种必要的疫苗以后，还要加强猪舍的综合管理，如清扫圈舍、定时消毒、通风干燥，使仔猪生长在良好的环境之中，不断增强仔猪机体的抵抗力。