复方罗布麻颗粒中木犀草苷含量测定方法研究

武琳 黄菲 杨光

摘要：目的 建立复方罗布麻颗粒中木犀草苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定复方罗布麻颗粒菊花中木犀草苷的含量，采用Phenomenex luna C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86），流速为0.8 mL/min，检测波长为348 nm。结果 木犀草苷在0.031 9～0.796 3 μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 6），平均回收率为100.85%（n=6）。结论 本试验所建立的方法专属性强、简便，提高了制剂的质量标准，增强了本品的可控性。

关键词：复方罗布麻颗粒；木犀草苷；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.04.025

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）04-0091-03

Study on Determination Method of Luteolin-7-O-glucoside in Compound Luobuma Granule WU Lin， HUANG Fei， YANG Guang （Beijing Tongrentang Technologies Co. Ltd. Pharmaceutical Factory， Beijing 100079， China）

Abstract：Objective To establish determination method of luteolin-7-O-glucoside in Compound Luobuma Granule. Methods Phenomenex luna C18 column （4.6 mm×150 mm， 5 μm） was used；aceto-0.5% acetic acid （14∶86） was set as the mobile phase at flow rate of 0.8 mL/min；the detection wavelength was 348 nm. Results The linear range of luteolin-7-O-glucoside was in the range of 0.031 9-0.796 3 μg （r=0.999 6）， and the average recovery was 100.85% （n=6）. Conclusion The method is specific， simple， and can improve quality standard and increase the controllability of Compound Luobuma Granule.

Key words：Compound Luobuma Granule；luteolin-7-O-glucoside；HPLC

復方罗布麻颗粒为《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂·第六册》收载的品种，由罗布麻叶、菊花、山楂组成，功能清热、平肝、安神，用于高血压、神经衰弱引起的头晕、心悸、失眠等症。原质量标准中只收载了理化鉴别和罗布麻叶的薄层色谱鉴别，对本品的质量可控性较低。本试验采用高效液相色谱法（HPLC）对菊花中木犀草苷进行测定，以提高复方罗布麻颗粒的质量标准，增强其质量可控性。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪（二极管阵列检测

器），METTLER TOLEDO XP205型电子分析天平（梅特勒-托利多国际股份有限公司），KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率250 W，频率40 kHz）。

木犀草苷对照品（供含量测定用，含量以99.3%计，批号11720-201106）购自中国食品药品检定研究院。复方罗布麻颗粒由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供，批号分别为20110901、20110902、20110903。配制溶液所用试剂均为分析纯，HPLC用试剂为高效液相级，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Phenomenex luna C18（150 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相为乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）；流速0.8 mL/min；柱温40 ℃；检测波长348 nm；理论塔板数按木犀草苷峰计算应不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1 mL含30 ?g的溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备

取本品适量，研细，取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，超声处理（功率250 W， 频率40 kHz）30 min，放冷，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方中药味比例，自配不含菊花的其他药材，按其制备工艺制成阴性制剂，按“2.3”项下方法制备，即得。

2.5 空白干扰试验

精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL，在上述色谱条件下进样，记录色谱图。结果木犀草苷可与其他成分基线分离，阴性对照溶液在与木犀草芩苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为空白无干扰。色谱图见图1。

2.6 线性关系考察

分别精密吸取32.08 μg/mL木犀草苷对照品溶液（实际木犀草苷含量按99.3%计）1、3、5、7、10 μL和160.4 μg/mL木犀草苷对照品溶液（实际木犀草苷含量按99.3%计）3、4、5 μL注入液相色谱仪，测得峰面积，以对照品的进样量（μg）为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为Y=421.44X-1.204，r=0.999 6，用外标一点法计算。结果表明木犀草苷在0.031 9～0.796 3 μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

取同一对照品溶液，连续进样6次，计算木犀草苷峰面积的RSD为1.45%，表明仪器精密度良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、24 h进样测定，测得木犀草苷平均含量为0.148 7 mg/g， RSD=2.55%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.9 重复性试验

精密称取同一批号（20110901）的样品6份，分别按“2.3”项下方法制成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，木犀草苷平均含量为0.153 5 mg/g， RSD=1.12%，表明本方法重复性良好。

2.10 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批号供试品（批号20110901，木犀草苷含量为0.153 5 mg/g）约1.5 g，分别精密加入8.02 μg/mL木犀草苷对照品溶液（实际木犀草苷含量按99.3%计）25 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定木犀草苷含量，平均回收率为100.85%，RSD=2.77%。结果见表1。

2.11 样品含量测定

取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，每批样品测定3次，结果见表2。

3 讨论

本试验在选择复方罗布麻颗粒的含量测定指标时，摸索过绿原酸、槲皮素、金丝桃苷、异槲皮苷的含量测定方法，但罗布麻叶、山楂、菊花中均含有上述4种成分，不能作为专属性成分进行鉴别和含量测定[1-5]，而木犀草苷只存在于菊花中，罗布麻叶和山楂中不含木犀草苷，故选择菊花中的木犀草苷作为专属性成分进行含量测定[6]。

供试品溶液制备中，根据木犀草苷的性质，比较了甲醇、50%乙醇、70%甲醇、乙醇超聲提取对木犀草苷提取率的影响，结果表明，70%甲醇超声提取，所得木犀草苷的提取率最高，故选用70%甲醇。试验比较了超声提取20、30、40 min不同时间木犀草苷的提取率，结果表明提取30 min已基本提取完全，因此确定提取时间为30 min，试验比较了20、30、40 ℃不同柱温对分离度的影响，结果柱温40 ℃时木犀草苷的分离度较好。

取木犀草苷对照品，加甲醇溶解，注入液相色谱仪，用二极管阵列检测器进行紫外全波长扫描（200～400 nm）。结果表明，木犀草苷在348 nm附近有最大吸收峰，且样品空白无干扰，故选择348 nm作为检测波长。

试验对流动相进行了选择，比较了乙腈-0.5%冰醋酸（15∶85）和乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）2种流动相，发现用乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）比乙腈-0.5%冰醋酸（15∶85）作为流动相所得木犀草苷峰的峰型好且阴性无干扰，故采用乙腈-0.5%冰醋酸（14∶86）作为本品含量测定的流动相[7]。

综上所述，本研究建立了HPLC测定复方罗布麻颗粒的菊花中木犀草苷含量的方法，该方法操作简单、方便，专属性强，提高了复方罗布麻颗粒的质量可控制性。

参考文献：

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[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：292.

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（收稿日期：2014-08-29）

（修回日期：2014-09-15；编辑：陈静）