VEGF、OPN的表达与胃癌浸润、转移的相关性及联合检测的临床意义*

朱栋良，尹小平，王芳元

(咸宁市中心医院肝胆胰胃肠外科，湖北咸宁437100)

VEGF、OPN的表达与胃癌浸润、转移的相关性及联合检测的临床意义*

朱栋良，尹小平，王芳元＊＊

(咸宁市中心医院肝胆胰胃肠外科，湖北咸宁437100)

目的研究血清血管内皮生长因子(VEGF)和骨桥蛋白(OPN)的表达与胃癌浸润、转移等病理分期的相关性，探讨二者联合检测诊断胃癌的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测40例胃癌患者(胃癌组)，30例健康体检者(健康组)血清中VEGF、OPN的浓度，并分析其与胃癌患者临床病理因素之间的关系。结果胃癌患者血清VEGF、OPN水平明显高于健康组(P＜0.01);胃癌患者血清VEGF和OPN的浓度与胃癌病理分期、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移及分化程度相关(P＜0.05);胃癌患者血清OPN浓度与VEGF浓度呈正相关(r=0．5431，P＜0.05);VEGF、OPN单独检测诊断胃癌其敏感性分别为67.5%、77.5%，二者联合检测敏感性提高至92.7%。结论血清中VEGF、OPN的表达水平与胃癌的浸润、转移密切相关，VEGF、OPN表达具有正协同作用，两者联合检测能更准确预测胃癌的浸润、转移等病理分期。

血管内皮生长因子;骨桥蛋白;胃癌;浸润;转移

胃癌是我国最常见的消化道肿瘤，具有起病隐匿，早期易漏诊、易转移、复发率高等特点，根据2008年癌症统计结果，我国大陆地区人群胃癌发病率和死亡率均仅次于肺癌，位居第二位［1，2］，而临床上缺乏准确的早期筛查手段，术前对预测胃癌的浸润和转移缺乏高效的检测方法。血管内皮生长因子(VEGF)是一种最重要的血管形成因子，能增加血管通透性，促进内皮细胞增殖，对活体血管形成有强烈的诱发作用。在肿瘤的生长过程中，肿瘤细胞分泌血管生长因子，增加肿瘤血管形成，促进肿瘤发展、转移［3，4］，并成为肿瘤发生发展及治疗中的研究热点课题。骨桥蛋白(OPN)是一种磷酸化糖蛋白，为非胶原基质蛋白，在促进细胞增殖、移行、重塑细胞外基质、降低细胞黏附中发挥重要作用，且和血管因素密切相关［5～7］。本研究通过检测胃癌血清中VEGF和OPN水平与胃癌浸润、转移和术前CT征象的相关性，探讨二者联合检测并与术前CT扫描相结合，为病情分析和判断预后提供可靠依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2012年1月至2013年3月在我院就诊的40例胃癌患者(胃癌组)，其中男23例，女17例;年龄26～81岁，中位数57.2岁;术前均未接受过放化疗，术前胃镜活检证实为胃腺癌;同期在我院健康体检者30例(健康组)，其中男18例，女12例;年龄27～71岁，中位数54.8岁;均经胃镜确诊无胃部疾病，排除其他恶性肿瘤及严重心血管、代谢性疾病(获得伦理委员会批准，并签知情同意书)。两组患者年龄、性别等一般资料比较差别无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 标本采集抽取术前患者和健康体检者5ml清晨空腹静脉血，注入无抗凝管，离心(2000rpm，10min)，吸取血清100μl体积分装，－80℃冷冻备用。

1.3 检测方法及试剂VEGF采用ELISA方法检测，试剂盒由深圳晶美生物有限公司提供，最低敏感浓度为46.9pg/ml，变异系数小于5.0%。OPN应用ELISA检测，鼠抗人OPN单抗(100μl，1mg/ml，CHEMICON公司)，兔抗人OPN多抗(100μl，CHEMICON公司)，OPN标准品1mg(CHEMICON公司)，生物素化羊抗兔IgG(H+L，1.5mg/100μl，北京中山生物技术有限公司)，亲和素－辣根过氧化酶复合物(Avidin HRP，200μl，华美公司)。所有操作严格按照说明书检测。

1.4 评判标准以健康体检组VEGF、OPN 2s作为上下警戒值，血清VEGF、OPN的上界水平分别为106.0 μg/ml，32.7μg/ml。

1.5 CT扫描技术评定标准应用64排螺旋CT，常规上腹部平扫加增强明确胃癌术前分期，并经两位对普外科疾病诊断经验丰富的影像科副主任医师分别阅片确认。

1.6 统计学方法使用SPSS 13.0软件分析所有数据。计数资料采用卡方检验，两变量之间的关系采用Pearson相关分析。以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清VEGF和OPN水平比较胃癌组血清VEGF、OPN浓度均高于健康组，其差异有统计学意义(P＜0.01)，在胃癌患者中VEGF、OPN阳性检出率分别为77.5%、67.5%，健康组其阳性检出率分别为13.3%、10.0%，明显低于胃癌组，其差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 两组间血清VEGF、OPN浓度比较

2.2 VEGF、OPN联合检测效能评价VEGF、OPN单独检测诊断胃癌其敏感性分别为67.5%、77.5%，特异性分别为90.0%、87.7%，两者联合检测诊断胃癌敏感性、特异性分别为92.5%、83.3%。与单独检测相比，联合检测敏感性升高，且差异有统计学意义(P＜0.05)，特异性差别无统计学意义(P＞0.05)。

2.3 VEGF、OPN的相关性胃癌患者血清VEGF与OPN水平呈正相关(r=0．5431，P＜0.05)。

2.4 血清VEGF、OPN与临床特征的关系胃癌患者血清VEGF、OPN水平在术后病理分期、有无区域淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤直径大小、分化程度等方面比较其差别均有统计学意义(P＜0.05)，而在不同年龄、性别胃癌患者VEGF、OPN水平比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 胃癌组临床、病理特征与血清OPN与VEGF水平的关系(¯x±s，μg/ml)

3 讨论

目前暂无单一指标能够对肿瘤的生物学行为和预后作出准确预测，临床上多用标记物联合检测。目前常用的胃癌肿瘤标志物有CEA、CA19－9、CA72－4几种，但因这些标志物的特异性不高，某些指标在肿瘤性及炎症应激性疾病中均有明显升高，而且缺乏组织特异性，对于肿瘤的病理分期分级也没有明确的提示意义，远远不能满足临床需要，因此开发新的有效的胃癌标志物迫在眉睫［8～10］。

本研究结果显示:在胃癌组的血清VEGF、OPN水平显著高于健康组，并且与胃癌的术后病理分期、远处转移、肿瘤大小及淋巴结转移和分化程度相关。胃癌患者血清中VEGF、OPN的表达水平呈正相关，两者联合检测在胃癌患者中敏感性明显高于单独检测。VEGF作为一种最常见最有效的促血管生长细胞因子，可以结合于血管内皮生长因子受体，激活细胞内信号级联途径，导致内皮细胞增殖加快，血管生成增多［11］。胃癌患者VEGF高表达，加速血管形成，促进肿瘤生长，促使癌细胞转移，形成肉眼不能识别的新癌灶。目前针对VEGF及其受体已有商品化的单克隆抗体，如贝伐单抗等在临床中应用于晚期肿瘤患者，有效的延长患者生存期［12，13］。

OPN是一种非胶原性骨基质糖蛋白，广泛的分布于多种组织和细胞中，既往研究表明其可与细胞表面整合素受体相互作用，调控细胞粘附，还可以调控基质金属蛋白酶家族中某些蛋白的表达，从而调控肿瘤的侵袭迁移能力［14］。OPN在巨噬细胞、T淋巴细胞、成纤维细胞等多种免疫细胞中合成并在刺激下大量分泌，可能与肿瘤细胞的免疫微环境失衡相关，进而促进肿瘤的生长和转移［15］。胃癌患者血清中高水平的OPN可能来自于肿瘤细胞过度增殖分泌到血液中，使肿瘤细胞逃避宿主免疫系统的识别和杀伤，从而导致肿瘤的发展和转移。在胃癌进展过程中，肿瘤细胞分泌的OPN可能通过激活细胞内多种信号传导途径，促使癌细胞的趋化粘附和浸润迁移，OPN能够上调VEGF的效应，故体内的OPN表达量增加，促进VEGF的表达，促使胃癌的血管生成，增加血管通透能力，加速肿瘤的浸润和转移，在胃癌的发生、发展中可能有相互协同作用。血液中的OPN及VEGF含量异常升高，提示肿瘤的生长和侵袭转移处于活动期，具有更高的恶性程度。本研究中证实OPN及VEGF含量与胃癌的临床病理分期相关，可以作为胃癌术前诊断的重要血清学指标。

综上所述，检测VEGF和OPN有助于筛选转移高危病例，两者联合检测的意义更为显著，能更准确的预测胃癌浸润、转移等临床病理学特征，为胃癌早期诊断、病情分析和判断预后提供可靠的依据。因此，我们认为VEGF和OPN可以作为胃癌临床检测新的肿瘤标志物。

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Correlation of Combined Detection of Serum VEGF，OPN and Gastric Cancer Invasion，Metastasis

ZHU Dong－liang，YIN Xiao－ping，WANG Fang－yuan
(The Department of Hepatobiliary Gastrointestinal Surgery，Xianning Central Hospital，Xianning Hubei 437100，China)

ObjectiveStudy of serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and osteopontin (OPN)the relationship between the expression of gastric cancer invasion，metastasis and other pathological staging to study the serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and osteopontin(OPN)expression and the correlation with tumor invasion and metastasis，and investigate the clinical significance of combined detection of both.MethodsSerum VEGF and OPN concentrations in 40 patients with gastric cancer(gastric cancer group)and 30 healthy subjects(healthy group)were detected by enzyme－linked immunosorbent assay (ELISA)and the clinical pathological factors relations were analyzed.ResultsSerum VEGF and OPN levels of patients with gastric cancer were significantly higher than that of the healthy group，the difference was statistically significant(P＜0.01).Serum OPN and VEGF concentrations were closely related to the clinical staging of gastric cancer，tumor size，lymph node metastasis，distant metastasis and the degree of differentiation(P＜0.05). Serum concentrations of OPN in patients with gastric cancer was positively correlated with VEGF concentrations (r=0.5431，P＜0.05).Detection sensitivity of VEGF or OPN alone was 67.5%or 77.5%respectively，while combined detection sensitivity increased to 92.7%.ConclusionSerum VEGF and OPN expression levels were closely related to the invasion and metastasis of gastric cancer.VEGF and OPN expression has a positive synergistic effect with eath other.Combined detection of the expression levels of OPN and VEGF can improve the diagnosis of gastric cancer，more accurately.

Vascular endothelial growth factor;Osteopontin;Gastric cancer;Invasion;Metastasis

R735.2

A

2095－4646(2015)01－0001－04

2014－11－23)

湖北省自然科学基金资助项目(2011CDB316);咸宁市科技研究与开发项目(2012FFC11601)

＊＊通讯作者，E－mail:xnzxyywfy@126.com