G试验和GM试验对儿童恶性血液病侵袭性真菌感染的诊断价值

李泰阶，李萌，郭世辉，梁宏洁，李山，秦雪，刘志明

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)

恶性血液病患儿由于长期或反复接受化疗、广谱抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂以及造血干细胞移植等治疗，免疫功能损伤加重，侵袭性真菌感染(IFI)的发生率急剧升高。目前临床确诊IFI的传统方法耗时长、敏感度低，难以实现IFI的早期诊断。目前，(1，3)-β-D-葡聚糖检测(G 试验)和半乳甘露聚糖检测(GM试验)在国内外已广泛用于IFI的诊断，且被证实效果良好。为此，本研究就G试验和GM试验单独和联合诊断儿童血液病患者IFI的价值进行了探讨。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择广西医科大学第一附属医院2013年4月～2014年5月临床怀疑IFI的住院患儿246例，男165例、女 81例，年龄 1～14(5.43±3.64)岁。其中，急性淋巴细胞性白血病134例，急性髓性白血病58例，地中海贫血31例，淋巴瘤5例，噬血细胞综合征6例，再生障碍性贫血3例，其他12例。根据欧洲癌症研究和治疗组织/IFI协作组和美国国立变态反应和感染病研究院真菌病研究组共识组修订的侵袭性真菌病诊断标准［1］将患儿分为两组:感染组27例，男18例、女9例，年龄(5.00±2.83)岁;非感染组219例，男147例、女72例，年龄(5.48±3.74)岁。

1.2 方法

1.2.1 G试验 MB-80微生物动态快速检测系统、冰浴漕、T01智能恒温仪及GKT-1M动态真菌检测试剂盒均采用北京金山川科技发展有限公司产品。G试验严格按照仪器和试剂盒说明书操作，具体步骤如下:将待测血清0.1 mL加入0.9 mL的样品处理液中，混匀后70℃孵育10 min，取出后立刻放入冷却槽中冷却5 min;然后取0.2 mL混合液直接加入酶反应主试剂中，溶解后使用加样器转移至9 mm×65 mm标准无热源平底试管中;插入MB-80微生物动态快速检测系统中进行反应，反应结束后仪器自动计算出待测血清中(1，3)-β-D-葡聚糖的含量。

1.2.2 GM试验 ELISA检测血清半乳甘露聚糖试剂盒为美国BIO-RAD公司产品。GM试验严格按照试剂盒说明书操作，具体步骤如下:取待测血清300 μL 加入100 μL 处理液混匀，100 ℃ 水浴3 min。10 000 g离心10 min，取上清备用。ELISA检测孔每孔加入50 μL结合液、50 μL处理后上清液，37℃孵育90 min。清洗后，每孔加入375 μL清洗液，吸干;每孔加入显色液200 μL，室温避光孵育30 min后，每孔加入终止液100 μL;在波长450 nm波长酶标仪下读数，检测血清半乳甘露聚糖含量。

1.2.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件，按照厂家推荐标准，G试验以(1，3)-β-D-葡聚糖100 pg/mL为诊断界值;GM试验以半乳甘露糖0.5 pg/mL为诊断界值。以感染组、非感染组、阳性及阴性作四格表资料分析G试验和GM试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值的差异。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 G试验结果 感染组G试验阳性24例，阳性率为88.89%;G试验阴性3例，假阴性率11.11%。非感染组G试验阳性18例，假阳性率为8.22%;G试验阴性201例，阴性率为91.78%。见表1。G试验以100 pg/mL为临界值时，其诊断IFI敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值见表2。

2.2 GM试验结果 感染组GM试验阳性18例，阳性率为66.67%;GM试验阴性9例，假阴性率为33.33% 。非感染组GM试验阳性63例，假阳性率为28.77%;GM试验阴性156例，阴性率为71.23%。见表1。GM试验以0.5 pg/mL为临界值时其诊断IFI敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值见表2。

2.3 G试验和GM试验并联检测结果 即G试验或GM试验其中一项试验为阳性时判断为阳性病例。感染组阳性27例，阳性率为100%;阴性0例，假阴性率0。非感染组阳性75例，假阳性率为34.25%;阴性144例，阴性率65.75%。其诊断IFI敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值见表2。

2.4 G试验和GM试验串联检测结果 即G试验或GM试验其中一项试验为阴性时判断为阴性病例。感染组阳性15例，阳性率为55.56%;阴性12例，假阴性率为44.44%。非感染组阳性6例，假阳性率为2.74%;阴性213例，阴性率97.26%。其IFI敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值见表2。

表1 两组G试验和GM试验结果(例)

表2 G试验和GM试验单独和联合运用诊断IFI的效能(%)

3 讨论

血液病患儿在治疗中因化疗药物的影响，骨髓长时间处于抑制状态，此时机体免疫力低，极易发生IFI。IFI的早期发现及早期诊断有利于原发疾病的治疗，并能进一步改善预后。(1，3)-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的组成成分，它广泛分布于除接合菌及隐球菌以外的真菌细胞壁中，包括念珠菌、曲霉菌、枝顶孢属、毛孢子菌、镰刀菌、组织胞质菌等。当人体吞噬细胞吞噬真菌后，能持续释放(1，3)-β-D-葡聚糖，使血液和体液中含量增高;而浅部真菌感染或真菌定植时，(1，3)-β-D-葡聚糖极少释放入血液中，所以G试验可应用于深部真菌感染的辅助诊断［2］。本研究结果显示儿童血液病患者G试验的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为88.89%、91.78%、57.14%和98.53%;提示G试验用于诊断IFI具有较好的临床价值。这一结果与国外报道和国内外学者研究工作［3，4］基本吻合。G试验影响因素较多，下列情况可出现假阳性:如使用纤维素膜进行血液透析、静脉输注血液制品、链球菌菌血症等。本研究中，非感染组有18例G试验出现假阳性，其中15例患儿有使用血液制品输注史，包括5例患儿输注血小板，4例患儿输注去白红细胞，6例患儿同时输注去白红细胞和血小板，提示非感染组假阳性可能与血液制品的输注有关。

半乳甘露聚糖是曲霉菌细胞壁上的多聚抗原，曲霉菌感染患者出现临床症状或影像学检查异常前数天，其体内循环的半乳甘露聚糖即可呈阳性反应［5］。本研究结果显示儿童血液病患者GM试验的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为66.67%、71.23%、22.22%和94.55%，该结果与国内研究报道［6］基本相符。GM试验影响因素较多，下列情况可出现假阳性:如使用半合成青霉素类尤其是哌拉西林/他唑巴坦［7］、食用含有半乳甘露聚糖的牛奶等高蛋白食品或污染的大米等。本研究中，非感染组有63例GM试验出现假阳性，其中59例患儿有抗生素使用史，包括28例患儿使用哌拉西林/他唑巴坦。

G试验和GM试验检测的物质不同，原理不同，代谢规律存在差异，影响因素复杂，二者不能相互代替。本研究结果显示，G试验和GM试验并联分析的敏感性为100%、特异性为65.75%、阳性预测值为26.47%、阴性预测值为100%，串联分析敏感性为55.56%、特异性为97.26%、阳性预测值为71.43%、阴性预测值为94.67%。G试验和GM试验并联分析时灵敏性和阴性预测值高，而串联分析时特异性、阳性预测值较高。在日常工作中，可以通过对G试验和GM试验同时进行并联分析和串联分析，提高儿童血液病患者IFI诊断的效能。总之，G试验联合GM试验诊断IFI具有早期、快速、敏感性和特异性高的特点，是诊断IFI的安全、高效的方法。

［1］De Pauw B，Walsh TJ，Donnelly JP，et al.Revised definitions of invasive fungal disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycoses Study Group(EORTC/MSG)Consensus Group［J］.Clin Infect Dis，2008，46(12):1813-12461.

［2］Theel ES，Doern CD.beta-D-glucan testing is important for diagnosis of invasive fungal infections［J］.J Clin Microbiol，2013，51(11):3478-3483.

［3］曾淑英，刘霆，孟文彤，等.恶性血液病患者IFIGM和BG抗原检测的价值［J］.中华血液学杂志，2011，32(1):43-46.

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