丹红注射液对大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸生精功能的影响

夏 康，吴丽琴

广州中医药大学附属重庆北碚中医院泌尿外科，重庆400700

丹红注射液对大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸生精功能的影响

夏 康，吴丽琴

广州中医药大学附属重庆北碚中医院泌尿外科，重庆400700

目的：探讨丹红注射液对大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸的组织学以及附睾精子生成的影响。方法：将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、睾丸扭转复位组(B组)、丹红注射液处理组(C组)，每组10只。按Turner法建立左侧睾丸扭转模型，A组大鼠切开左侧阴囊，使左侧睾丸充分游离暴露，不予以扭转，模拟Turner法手术过程随意搬动睾丸，随后缝合关闭阴囊;B组大鼠按Turner法制作睾丸扭转模型：左侧睾丸顺时针绕精索旋转720°，肉膜白膜缝合固定以防止复位，阴囊缝合，扭转6小时后复位固定;C组大鼠按上述相同方法制备睾丸扭转模型，于睾丸扭转复位前60分钟腹腔注射丹红注射液(2mL/kg)，同时在术后3天每天分别注射丹红注射液(2mL/kg)。各组喂养至术后4周时处死，取右侧睾丸标本行组织病理学观察，同时取右侧附睾尾部行精子计数及活动率检测。检测睾丸组织一氧化氮合酶 (NOS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果：C组与B组相比，生精上皮层数增多，平均曲细精管直径(MSTD)增大，同时附睾精子计数与活动率明显升高，其差异有统计学意义(P＜0.05)。C组大鼠睾丸组织SOD水平升高，NOS、MDA水平降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：丹红注射液能够减轻大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸组织损害，使附睾精子生成显著增多，机制可能为减少大鼠睾丸组织内自由基生成，提高其抗自由基能力。

丹红注射液；睾丸扭转；超氧化物歧化酶；一氧化氮合酶；丙二醛

睾丸扭转是泌尿外科常见病，治疗不及时可导致睾丸坏死［1］。常发生于青少年，早期手术复位后仍有36%～39%患者出现精液异常［2］。因此如何通过药物治疗减少复位手术后对睾丸生精功能的影响是研究热点之一。本实验通过建立大鼠单侧睾丸扭转模型，探讨丹红注射液对大鼠单侧睾丸扭转复位后健侧睾丸的组织学以及附睾精子生成的影响及相关作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性Wistar大鼠，SPF级，6～7周龄，体质量120～150 g，购于重庆医科大学大学动物实验中心［动物实验合格证号：SCXK(渝) 2012-0001］，丹红注射液(步长倍通制药有限公司生产，批号：70713)。

1.2 方法

1.2.1 动物分组、模型建立以及取材 30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(n=10，A组)；睾丸扭转复位组(B组，n=10)；丹红注射液治疗组(C组，n=10)。模型建立参考Turner法［3］。以3%戊巴比妥钠40 mg/kg对大鼠实施腹腔麻醉，取左下腹部小切口，显露左侧睾丸。A组将睾丸游离后缝合固定于阴囊壁。其余2组将睾丸顺时针扭转720°维持6小时后复位。C组于睾丸扭转复位前60分钟腹腔注射丹红注射液(2mL/kg)，同时在术后3天每天分别注射丹红注射液(10μ/kg)。3组均喂养至术后4周时处死，取右侧睾丸标本行组织病理学观察，同时取右侧附睾尾部行精子计数及活动率检测。检测睾丸组织一氧化氮合酶(NOS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。

1.2.2 检测方法 1)睾丸组织病理学检查：睾丸组织10%甲醛固定后，常规石蜡包埋切片，行HE染色，对睾丸组织进行形态学观察；2)精子计数及活动率测定：取附睾尾部制成精子悬液，37℃温水孵育15分钟用精子计数板检测密度。高倍镜下随机记录100个精子中活动精子百分率；3)SOD活性采用黄嘌呤氧化酶法测定，MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定，NOS活性采用化学比色法测定。

1.3 统计学方法 数据统计采用SPSS 13.0软件，计量资料用(±s)表示，多组比较用单因素方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 睾丸组织病理学观察 A组：生精细胞层次有序，精细小管结构完整。B组：生殖细胞结构松散，可见散在坏死细胞，精细小管结构连续性中断。C组：生殖细胞结构松散，未见坏死细胞，精细小管结构较完整。

2.2 附睾精子计数分析 C组精子密度与活动率明显高于B组(P＜0.05)，大鼠睾丸组织NOS、MDA水平水平显著低于B组(P＜0.05)，睾丸组织SOD水平显著高于B组(P＜0.05)。见表1。

表1 3组精子计数、活率、睾丸组织SOD、NOS、MDA含量检测

3 讨论

研究认为睾丸扭转时组织缺血，复位后血流再次恢复后大量氧分子充满再灌注组织，产生大量氧自由基，通过氧化反应以及应激炎症反应导致睾丸组织细胞损伤［4-5］。单侧睾丸扭转后可引起对侧睾丸的损害，并导致生精功能低下和生育机能障碍，其机制可能与自身免疫性的交感性睾丸炎症有关，研究发现一侧睾丸扭转后复位可导致免疫激活引起肿瘤坏死因子、炎症反应作用导致对侧睾丸生殖细胞损伤［6］。因此，如何应用药物保护复位手术后对健侧睾丸生精功能有重要意义。

丹红注射液为丹参、红花等提取物的中药制剂，其主要成分为多种丹参酮、红花黄素、红花酮苷、原儿茶醛等。研究表明，丹红注射液具有抗氧化、防止血栓形成及扩张血管等作用，能显著改善微循环，并对心、脑、肾脏缺血损伤有保护作用［7］。

本实验发现，大鼠睾丸扭转再复位模型健侧睾丸生殖细胞结构松散，可见散在坏死细胞，精细小管结构连续性中断。丹红注射液组未见坏死细胞，精细小管结构较完整。实验说明大鼠睾丸扭转再复位后健侧睾丸组织受到损害同既往研究一致［8］。丹红注射液组生殖细胞损害程度较轻。扭转复位组同丹红注射液组精子计数及精子活动率较假手术组减少(P＜0.05)，说明大鼠睾丸扭转后精子质量明显降低。丹红注射液治疗组同扭转复位组比较精子计数以及精子活动率更高。MDA是过氧化脂质的分解产物，通过测定MDA可反映体内自由基产生的程度；SOD是细胞中主要的抗氧化酶之一，它在机体清除氧自由基的过程中起着关键作用；NOS不仅是生物体内重要递质，而且能对细胞产生毒性作用。精子质膜上含有丰富的不饱和脂肪酸，极易被氧化，可引起精子结构的改变，进而影响精子功能［9-10］。本实验表明丹红注射液治疗组同扭转复位组比较SOD升高，MDA、NOS水平降低。说明丹红注射液能提高大鼠睾丸组织内SOD水平、降低MDA、NOS水平，减少NO合成，改善精子质量。

综上所述，大鼠睾丸扭转再复位后健侧睾丸精子计数以及精子活动率降低，丹红注射液能够减轻健侧睾丸组织损害，保护健侧睾丸生精功能。这可能与其能提高大鼠睾丸组织内SOD水平，降低MDA、NOS水平有关。

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Effcetsof DanHong Injection on the RatSperm atogenesis of the Healthy Testisafter Reduction of Testicular Torsion of the Affected Side

XIA Kang,WU Liqin
Urology Departmentof BeibeiHospital of Chinese Medicine Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine,Chongqing 400700,China

Objective:To study theeffectof DanHong injection on thehistology of healthy testisand the sperm production of epididym ides of rats undergoing the reduction by testicular torsion on the affected side.Methods:The30maleWistar ratswere randomized into the sham-operated group(A),the reduction group(B)and the injection group (C)w ith 10 rats in each.Themodelsw ith testicular torsion established by Turnermethod,rats in group A were cut the leftscrotum to isolate and expose the testisw ithout torsion and rotate the testis by im itating the Turner operating process and lastly stitched the wound;as in the a group themodels established,the left testis of rats in group Bwere rotated 720°clockw ise round the varicosity to be fixed by stitching the sarcolemma and albuginea and the leftscrotum were closed,after fixation for6 hours the testiswere reduced and fixed;themodelsestablished as in the A and B group,the testis in the C group were injected DanHong injection 2m L/kg in the abdomen before the reduction of torsion for 60 m inutes and after the operation the rats were injected DanHong injection 2 m L/kg for 3 days.A fter feeding for 4 weeks,the rats of three groupswere killed,the right testiswere collected to be observed histopathologically,the sperm of the rightepididymideswere counted and their activity ratio were detected.Meanwhile,the levels of the nitricoxide synthase (NOS),serum superoxide dismutases(SOD)and malondialdehyde (MDA)were determ ined respectively.Results:In the comparison of the C and B group,the quantities of sem iniferous epithelium cellof the rats in group C were increased,the diameters of the seminiferous tubuleswere enlarged, sperm counts of epididym ides and activity ratios were raised significantly,and the differences between the two groupswere significant(P＜0.05).The SOD levelsof the rats'testes in group Cwere increased,while the NOSand MDA levelswere decreased,and the differences showed statisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:The DanHong injection can lighten impairmentof the healthy testis from the reduction of torsion of the affected side and significantly increase the sperm production of epididym ides,one of themechanismsmay be relevant to its reducing the production of the free radicalsand advancing itsability in fighting against the free radicals.

DanHong injection;testicular torsion;SOD;NOS;MDA

R285.5

A

1004-6852(2015)02-0015-03

2014-07-28

夏康(1979—)，男，硕士学位，主治医师。研究方向：泌尿外科疾病的诊治。