甘肃不同产地板蓝根中多糖含量分析*

李成义，杨苗苗，张樱山，陆国弟

1甘肃中医学院，甘肃兰州730000；2甘肃奇正藏药有限公司

甘肃不同产地板蓝根中多糖含量分析*

李成义1，杨苗苗1，张樱山2，陆国弟1

1甘肃中医学院，甘肃兰州730000；2甘肃奇正藏药有限公司

目的：建立板蓝根中多糖的含量测定方法，分析比较甘肃省内不同种植区域的板蓝根多糖含量差异。方法：采用水提醇沉法提取板蓝根中多糖，利用苯酚-硫酸法测定板蓝根中多糖的含量。结果：甘肃不同产地板蓝根中多糖含量相差较大，最高为16.22%，最低为10.59%，平均回收率为99.42%，相对标准偏差(RSD)为1.15%（n=6）。结论：该测定方法简单、准确、真实，可用于测定板蓝根中多糖含量。整体看甘肃地区板蓝根中多糖含量相对较低，且不同市县及乡镇其多糖含量存在较大差异，有必要对其种植区域进行科学合理规划。

板蓝根；多糖；含量测定

板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica For t.的干燥根，性寒味苦，具有清热解毒，凉血利咽之功效，常用于温毒发斑、舌绛紫暗、大头瘟疫、痄腮、烂喉丹痧、丹毒、痫肿等症［1］。全国各地均有分布，现主要产于安徽、河北、甘肃、黑龙江等地。板蓝根中含有较丰富的化学成分［2-3］，其中多糖具有调节免疫、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降血糖，护肝等多重功效。近年来随着板蓝根药材种植区域的逐年扩增，一些地区不合理开发板蓝根种植区域的行为比比皆是，使得人们对板蓝根药材的质量与疗效提出了质疑。为此，笔者采集甘肃省内20个不同种植区域的板蓝根药材，采用苯酚-硫酸法对其多糖含量进行分析比较研究，为甘肃地区优选板蓝根药材种植区域提供科学合理的依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器及主要设备 XS205DU型梅特勒-托利多分析天平 (梅特勒-托利多上海有限公司提供)；ACY-2001-U型艾科薄超低元素型超纯水机(重庆伊洋企业发展有限公司提供)；HSY2-SP电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂提供)；WFH-201B紫外分析仪(上海精科实业有限公司提供)。

1.2 试药 D-无水葡萄糖标准品(中国食品药品检定研究院提供，批号：110833-201205，供含量测定用)；苯酚，浓硫酸、无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、三氯乙酸均为分析纯，水为超纯水。所有板蓝根(序号与来源见表2)药材样品均经甘肃中医学院李成义教授鉴定，为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica For t.的干燥根。

2 方法与结果

2.1 粗多糖的提取和精制多糖的制备 取经破碎的板蓝根生药200 g，置1 000mL的圆底烧瓶中加80%乙醇过夜，次日取出回流2小时，冷却后滤过，滤液弃去，滤渣挥干溶剂加适量水，回流提取2次，2 h/次，合并两次提取液并浓缩至150mL，给浓缩液中加无水乙醇直至溶液含醇量达80%，充分搅拌后于4℃冰箱中静止过夜，次日滤过并将滤渣除醇后冷冻干燥至恒重，即得板蓝根粗多糖。准确称取以上制得的板蓝根粗多糖，加蒸馏水200mL，再加氯仿多次萃取，随后加5.0%三氯乙酸适量除去蛋白质［4］，并采用透析袋除去无机盐离子，以活性炭脱色，滤过，滤液加无水乙醇使含醇量达80%，4℃冰箱中静止过夜，离心，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，低温烘干至恒重，制得精制板蓝根多糖。

2.2 对照品溶液的制备 取D-无水葡萄糖标准品约10mg，精密称定，置于100mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.106 1mg/mL的葡萄糖对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取板蓝根药材粉末各0.2 g，精密称定，置于150mL具塞瓶中，加80%乙醇100mL，回流1小时，放冷，滤过，滤渣连同滤纸挥干溶剂一起放入具塞瓶中，再加蒸馏水60mL，加热回流2小时，趁热滤过，用蒸馏水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移入100mL容量瓶中稀释至刻度，摇匀即可。

2.4 精制板蓝根多糖的配制 精密称取105℃干燥至恒重的板蓝根粗多糖10mg，置于50mL棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀置于冰箱中备用。

2.5 苯酚试液的配制 取苯酚300 g，加碳酸氢钠0.15 g和铝片0.25 g，常压蒸馏182℃馏分，精密称取该馏分25 g，定溶于500mL棕色容量瓶中，得5%苯酚溶液，置于冰箱中备用。

2.6 最大吸收波长的选择 分别精密移取上述对照品溶液和供试品溶液各0.5mL，均置于20mL的具塞刻度试管中，补水至1.5mL，各加5%苯酚溶液1.5mL，混匀，再分别小心滴加浓硫酸5mL，充分摇匀，至沸水浴中煮沸15分钟后，迅速冷却，同上操作制得空白溶液，以空白溶液作参比。用紫外-可见分光光度计在400～600 nm全波长扫描，结果对照品溶液和供试品溶液均在487 nm处有最大吸收峰，故选择487 nm为测定波长。

2.7 标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖对照品溶液0，0.2，0.5，0.8，1，1.2 mL，分别置于20 mL的具塞刻度试管中，补水至1.5mL，各加5%苯酚溶液1.5mL，混匀，再分别小心滴加浓硫酸5mL，充分摇匀，至沸水浴中煮沸15分钟后，迅速冷却，同上操作制得空白溶液，以空白溶液作参比。用紫外-可见分光光度计在487 nm波长处测定吸光度值，以葡萄糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=43.295X-0.004 3(R=0.999 5)，结果表明葡萄糖对照品溶液在0.002 7～0.015 9mg/mL内线性关系良好。见图1。

图1 葡萄糖对照品标准曲线

2.8 换算因子的测定 取“2.4”项下精制的多糖储备液0.5mL，按“2.6”项下测定吸光度，平行3份，每份测定2次，由回归方程求出板蓝根精制多糖中葡萄糖的浓度，并按公式f=W/CD［公式中W为板蓝根精制多糖的质量(mg)，C为多糖溶液中葡萄糖的浓度mg/mL，D为板蓝根多糖的稀释倍数］，计算换算因子f，求得f均值为1.05，RSD为1.81%。

2.9 精密度试验 取“2.2”项下制得的葡萄糖对照品溶液0.5mL，按照“2.6”项下方法连续测定6次，吸光度均值为0.344，RSD为2.21%，结果表明仪器精密度良好。

2.10 稳定性试验 取同一产地的板蓝根药材样品溶液，按照“2.6”项下方法操作，每隔20分钟测定1次，连续测定6次，RSD为1.66%，结果表明样品溶液在2小时内显色稳定。

2.11 重复性试验 称取同一产地板蓝根药材粉末6份，按“2.3”项下分别制备溶液，测定其吸光度，结果多糖含量均值为13.38%，RSD为2.96%，表明重复性良好。

2.12 加样回收试验 精密称取已知含量同一产地板蓝根药材样品约0.1 g，精密称定，平行6份，分别加“2.2”项下制得的葡萄糖标准品溶液适量，按“2.3”项下制备供试品溶液，测定吸光度，结果见表1。

2.13 样品测定 按“2.6”项下方法分别测定甘肃省20个不同产地板蓝根药材样品吸光度，每个样品平行测定3次，由回归方程求出各供试品溶液中葡萄糖浓度，测定结果见表2(以干燥品计算)。

3 讨论

多糖作为板蓝根药材中增强免疫力的主要成分，其本身结构复杂，种类繁多，在分离纯化以及结构测定上难度很大。本试验结合前人研究成果，比较了回流提取法与超声法提取板蓝根多糖的提取效果，结果回流提取法效率高于超声法提取法。另外，采用苯酚-硫酸法测定板蓝根中多糖［5-6］，依次对水的用量，苯酚溶液用量，硫酸溶液用量，加热时间及加热温度作了优化，得出了测定板蓝根多糖最佳显色条件为：板蓝根多糖在水1mL，苯酚溶液1.5mL，硫酸溶液5mL，100℃水浴中加热15分钟显色效果相对明显。

表1 板蓝根药材加样回收试验结果(n=6)

表2 板蓝根药材样品中多糖含量测定结果(n=3)

目前，板蓝根多糖虽还未列入2010版《中国药典》必测成分中，但基于多糖本身所具有的特殊性，无论是在医药还是保健品方面都有其不可代替的地位，因此研究板蓝根中多糖具有一定的现实意义。本试验比较了甘肃不同产地板蓝根中多糖含量，结果发现不同产地多糖含量差异较大，其中以张掖市山丹县位奇镇十里堡村产的板蓝根多糖含量最高，民乐县三堡镇韩庄村产的多糖含量最低，出现这种含量差异可能与两地土壤类型、光照时间、气温高低及海拔高低等多条件方面有关。此外，也有文献报道［7］不同产地菘蓝种质内在品质差异除与遗传因素有关外，很大程度与其所处环境密切相关。这进一步说明生长环境对板蓝根药材内在质量影响甚大。因此，合理规划药材种植区域将成为药材品质优劣的关键，本试验将为甘肃地区合理规划板蓝根种植区域和保证药材质量方面提供借鉴性的资料。

［1］ 国家药典委员会.中国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：191.

［2］ 黄家娣.板蓝根化学成分和药理作用综述［J］.中国现代药物应用，2009，3(15)：197-198.

［3］ 雷黎明.板蓝根化学、药理、质量及提取方法的研究进展［J］.时珍国医国药，2007，18(10)：2578-2580.

［4] 孔凡例，张名位，于淑娟，等.荔枝粗多糖脱蛋白方法的研究［J］.食品科技，2008，10(20)：142-145.

［5］ 朱婷，尹溽纹.张贵强，等.板蓝根多糖提取工艺及对活性成分影响的研究［J］.中国新药杂志，2013，22(12)：1390-1395.

［6]苏玉顺，李艳君，赵方振，等.紫外-可见分光光度法在植物多糖含量测定中的应用［J］.光谱实验室，2011，28(3)：1101-1105.

［7］ 陈宇航，郭巧生，邓乔华，等.菘蓝不同种质活性成分动态积累及其药材品质比较［J］.中国中药杂志，2012，37(11)：1541-1544.

Determ ination of Polysaccharides in BanLanGen from DifferentHabitatsof Gansu Province

LIChengyi1,YANGMiaomiao1,ZHANG Yingshan2,LU Guodi1
1 Gansu University of Chinesemedicine,Lanzhou 730000,China; 2 Gansu Qizheng Tibetan Pharmaceutical Joint Stock Co.,Ltd

Objective:To distinguish the contentdifferencesof polysaccharides in BanLanGen(isatis tinctoria) from differenthabitats of Gansu Province by establishing a determ inationmethod.Methods:The polysaccharides in the Banlangen were extracted by water-extraction and alcohol-precipitationmethod and the polysaccharide contents were determ ined by phenol-sulfuric acid method.Results:The differences in different regions in Gansu province were great;the highestwas 16.22%,the lowest10.59%,the average recovery rate 99.42%and RSD 1.15%(n=6). Conclusion:The determiningmethod adopted,whichwas simple,accurate and practical,can be used tomeasure the contentof polysaccharides in Banlangen.Wholly,the polysaccharide contents of Banlangen in Gansu province are relatively low;because there exists great differences in the polysaccharide contents of Banlangen from different cities,countiesand towns,a scientific and rationalplanning for Banlangen′s planting division isnecessary.

BanLanGen;polysaccharides;contentdeterm ination

R259

A

1004-6852(2015)02-0005-03

2014-05-05

2013年甘肃省自然科学基金项目(编号1308RJZA176)。

李成义(1964—)，男，博士研究生导师，教授。研究方向：中药品种与质量研究。