参麦宁心合剂对充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影响❋

李为党，谢秋利，李慧娜，李庆海△

(1.河南中医学院，郑州 450008;2.河南中医学院第三附属医院，郑州 450008)

参麦宁心合剂对充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影响❋

李为党1，谢秋利2，李慧娜2，李庆海2△

(1.河南中医学院，郑州 450008;2.河南中医学院第三附属医院，郑州 450008)

目的:观察参麦宁心合剂对充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影响。方法:取健康Wistar大鼠60只，随机选出8只作为正常对照组，52只大鼠采用结扎左冠状动脉前降支复制充血性心力衰竭大鼠动物模型，4周后做心脏彩色多普勒超声评价，EF≤50%为合格。按EF≤50%入选标准分为3组，即西药治疗组(培哚普利0.1 mg/kg·d;美托洛尔0.5 mg/kg·d)、中药治疗组(参麦宁心合剂3 mg/kg·d)、模型对照组(生理盐水1 ml/kg·d)给予灌胃2周。于最后1次灌胃后处死动物取血，测定大鼠血清中TNF-a、IL-6的水平。结果:与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清TNF-α、IL-6水平显著增高，LVEF、SV均显著降低。中药治疗组和西药对照组血清TNF-α、IL-6水平均较模型对照组显著降低，LVEF、SV明显提高。结论:参麦宁心合剂可明显提高充血性心力衰竭大鼠的左室射血分数和每搏输出量，可明显降低充血性心力衰竭大鼠血清TNF-a、IL-6水平。

参麦宁心合剂;充血性心力衰竭;肿瘤坏死因子-α;白介素-6

充血性心力衰竭系指在有适量静脉血回流的情况下，由于心脏收缩和(或)舒张功能障碍，心排血量不足以维持组织代谢需要的一种病理状态。李庆海教授结合几十年临床实践采用自拟方参麦宁心合剂治疗心力衰竭取得良好的效果。本实验通过研究参麦宁心合剂对心衰大鼠TNF-α、IL-6的影响，进一步阐述其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

10～12周龄SPF级健康雄性Wistar大白鼠60只，体质量180～200 g，由山东鲁抗医药集团提供(生产许可证号scxk鲁20080002)。动物饲料及垫料由郑州大学动物中心生产，河南省中医院中心实验室统一消毒后提供。

1.2 实验药品

参麦宁心合剂由安阳市中医院提供(250 ml/瓶，批号z05050137);培哚普利片(规格4 mg，批号H20534053)天津;酒石酸美托洛尔，规格25 mg(批号H20065355)，石家庄以岭药业公司生产;青霉素(80万单位，批号H13020657)，华北制药有限公司生产;水合氯醛(批号20100614)，郑州派尼有限公司生产;利多卡因(5 ml∶0.1 g，H31021072);呋塞米注射液(规格2 ml∶20 mg，H12020527)，湖北天药药业股份有限公司。

1.3 实验试剂

试剂盒由郑州金城检验中心提供。

1.4 实验仪器

小型动物呼吸机(型号DW3000-B);低温高速离心机(SIGMA3-18K GERMANY SIGMA);高压蒸汽灭菌锅TMQ-CV，山东新华;心脏彩超机:ACUSON Cypress，美国 Florida;B超耦合剂:YY0299，天津;精密天平:FAII04，上海精科;微波炉:G80w23ysl-V9.格兰仕;手术针、线、剪刀、镊子、止血钳均由河南省中医院中心实验室统一提供。

2 实验方法

2.1 实验动物饲养

大鼠常规、分笼饲养，笼中垫约2～3 cm的玉米芯垫料，每笼4只。饮用水取自小动物消毒机，采用光照12 h、黑夜12 h、温度24±2℃、湿度40% ～60%。采用IVO通风设备，每2 d更换1次垫料，水与饲料由大鼠随意摄取，保持实验室环境清洁、安静，避免噪声及其他干扰。

2.2 模型复制方法

方法［1］，手术当天称重后，利用3.5%水合氯醛按大鼠体质量0.8 ml/100 g腹腔注射进行麻醉。待大鼠麻醉平稳后置于手术台，然后将心前区手术部位的体毛剪干净。随后用14 g的穿刺针套管作为气管导管插入气管，将气管导管和呼吸机相连，调整呼吸机工作状态，在无菌操作下，于胸骨左侧第3、4肋间横向切开皮肤长约1.5 cm的切口，钝性分离软组织并暴露心脏后，将呼吸机放置工作状态，潮气量为14 ml/kg，呼吸频率为60～65次/ min开始机械通气。待机械通气顺畅后用碘伏消毒皮肤，在左侧第4肋间剪开皮肤，逐层分离肌肉，利用开胸器分开肋间隙，打开胸腔，暴露心脏。用酒精棉签挡住肺叶，并用镊子撕开心包膜，清楚暴露左冠状动脉，心电示波器Ⅰ导联出现ST段抬高，术后给予大鼠青霉素40 μ/只，同时给予呋塞米、利多卡因各1ml，腹腔注射。维持1周每天1次，以抗感染。术后4周作心脏无创性心功能检测(EF≤50%)，入选30只。

2.3 分组及给药方法

EF≤50%的大鼠入选后按随机数字表法分为模型组、中药治疗组、西药治疗组3组，另设空白对照组8只。

2.4 给药方法

中药治疗组给予参麦宁心合剂3.0 mg/kg·d，基础西药组给予培哚普利0.1 mg/kg·d、美托洛尔0.5 mg/kg·d。模型对照组给予生理盐水1 ml/kg·d剂量灌胃，每天灌胃1次，持续灌胃14 d。各组大鼠在实验期间均常规饲料、清洁水喂养。至灌胃结束，剩余大鼠总计38只。

2.5 3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉后，通过腹主动脉采血。室温静置2 h，用离心机以2000转/分离心，30 min，取血清，-70℃冰箱保存，备用。

3 观察指标及测定方法

3.1 一般基本观察

观察包括进食、水量、体质量、体温、毛色、毛态、精神状态、活动情况、尿量以及排便情况等。

3.2 心电图变化

各组大鼠利用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉后待大鼠麻醉后，置于检查台上，将探针分别插进大鼠左、右上肢和左下肢的皮下，用生物信号采集、处理系统描记大鼠心电图并观察心率。

3.3 心功能测定方法

3.5 %水合氯醛0.8 ml/100 g腹腔浅麻醉后行超声心动图测定，探头频率7.5～12.5 MHz，用二维超声切面，选取标准左室乳头肌短轴切面和左室长轴切面结合M型和多普勒超声进行检查，微机自动作出结果分析。

3.4 利用酶联免疫吸附法测定大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-a)和白介素(IL-6)的水平。具体操作按说明书进行。

3.5 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析，运用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

4 结果

本实验动物60只，造模52只，造模过程中死亡4只，4周后复查心脏彩超，经检测成功复制心衰模型30只，EF≤50%的随机分为3组，每组10只。灌胃期间中药治疗组、西药治疗组及模型组各死亡2只共6只，至灌胃结束实际观察到大鼠32只。

4.1 参麦宁心合剂对充血性心力衰竭大鼠LVEF、SV、HR的影响(见表1)

4.2 参麦宁心合剂对充血性心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6的影响

5 讨论

本实验结果显示，与空白组比较模型组大鼠血清TNF-α、IL-6水平显著升高(P＜0.05)，差异有统计学意义;与模型组比较，西药治疗组以及中药治疗组大鼠血清 TNF-α、IL-6水平显著降低(均 P＜0.05)，差异有统计学意义，说明参麦宁心合剂可有效降低心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6浓度，增加心肌收缩力，抑制体内单核-巨噬细胞系统被激活以及炎性因子的释放，抑制心室重塑，保护心肌细胞。

表1 参麦宁心干预后充血性心力衰竭大鼠LVEF、SV、HR的情况

充血性心力衰竭属于中医学“心悸”、“喘病”、“痰饮”等范畴，乃正气不足、病久所致心失所养、气阴两虚、心脉瘀阻而发病，治宜益气养阴、化痰祛瘀之法。参麦宁心合剂主要药物由人参、麦冬、五味子、玉竹、茯苓、葶苈子、车前子、当归、丹参、生龙牡、枳实、金银花等组成，具有益气养阴、活血利水之功效。方中人参、麦冬大补元气、养阴生津，为君药;五味子、玉竹、云苓益气健脾、养阴清心安神，为臣药;葶苈子、车前子、桑白皮宣肺平喘、利水消肿;当归、丹参活血养血、化瘀行血;金银花、黄连清解郁热;生龙牡收敛固涩、镇心安神;枳实破气消积、调理气机，共为佐使，共奏活血利水、益气养阴、清郁除烦、邪去正安之效。诸药合用养阴不助湿，利水不伤阴，补而不壅、苦而不燥。补气养阴、活血利水则气血充足、鼓动有力、瘀散水行、郁热自消、心安神畅，诸证悉除。现代药理研究表明，人参总皂甙可以抑制血栓素A2的生成，通过抗氧自由基和抗脂质过氧化作用而保护心肌细胞［2］。胡爱萍等［3］研究表明，丹参可明显减少心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放，提示丹参可对抗缺氧对心肌细胞的损伤。葶苈子的水提取物具有显著强心和增加冠脉流量的作用，且不增加心肌耗氧量。枳实的有效成分可以加强心肌收缩力，减慢心率，增加心输出量、冠脉流量和肾血流量等，此外还有明显的抗血栓、抗血小板聚集、降低红细胞聚集的作用。

参考文献:

［1］田颖，王江，李振魁，等.大鼠心肌梗死后心力衰竭模型的建立和评估［J］.心脏杂志，2006，18(4):404-405.

［2］李勤，等.参麦注射液的药理作用及临床应用［M］.医学综述，2005:1141-1142.

［3］胡爱萍，潘亚梁，叶治国.丹参对缺氧/复氧心肌的保护作用涉及百日咳毒素敏感的G蛋白［J］.中国现代应用药学杂志，2004，21(5):358.

［4］王进.葶苈子的药理研究及临床新用［J］.中国中医药现代远程教育，2008，6(1):39.

R285.5

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:1006-3250(2015)11-1396-02

2015-04-15

河南省科技厅基金项目(14207254)

△通讯作者:李庆海，Tel:13838396198，E-mail:lqh960918@ sina.com。