复方苍术的初步药效学研究

奚红霞，巢艳红（.镇江市第二人民医院药剂科，江苏003；江苏大学药学院，江苏镇江03）

苍术为菊科植物茅苍术[Atractylodes lancea（Thunb.）DC.]或北苍术[1][Atractylodes chinensia（DC.）Koidz.]的干燥根茎。苍术主要含挥发油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔类及少量的酚类、有机酸类成分组成[2]，另外还含有倍半萜内酯、倍半萜糖苷、多聚糖以及少量的黄酮类成分，其中主要的活性成分为倍半萜类和聚乙烯炔类。根茎含挥发油3.125%～6.192%，挥发油中主要成分为苍术素、茅术醇、β桉油醇、苍术酮等[3]。苍术味甘苦、性温，归脾、肾、肝经，具有燥湿健脾、祛风散寒等功效。朱丹溪曰：实脾土燥脾湿乃治痰之本。苍术有燥湿健脾之功，对痰饮咳喘疗效较好。《纲目》：苍术治湿痰留饮，或挟淤血成窠囊。《本草正义》：苍术气味雄厚，较白术愈猛，能切上切下，燥湿而宣化痰饮。若湿在上焦，易生湿痰，以此燥湿行痰。现代药理学研究也证明，苍术具有止咳、祛痰、抗炎、抗菌等作用。

宋·许叔微《类证普济本事方》载有神术丸（生茅术、生芝麻和大枣）曾治愈其本人由于“膈中停饮”而引起的胁痛症。20世纪40年代中医刘氏改制其法，采用苍术复方，即以生茅术为主药，配以适量补骨脂、陈皮等，用于治疗老年人发作于冬季的痰饮咳喘，即所谓老年慢性支气管炎，颇有疗效。明·王纶首揭“痰之本，水也，原于肾；痰之动，湿也，主于脾；痰之成，气也，贮于肺。”继之张景岳提出：“五脏之病，虽具能生痰，然无不由乎脾肾，盖脾主湿，湿动则为痰；肾主水，水泛也为痰。故痰之化无不在脾，而痰之本无不在肾。”刘氏的传统验方以中药苍术为主药，燥湿健脾以达止咳、祛痰之效；补骨脂为臣药补肝肾[4]；陈皮为佐使理气健脾、燥湿化痰[5]，此为本实验选方依据。为验证该苍术复方治疗慢性支气管炎的药理活性，本文对其进行了初步药效学研究，以期为临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物及试剂 苍术由镇江江扬国药有限公司提供（批号：20130702），补骨脂由丹阳市练湖农场提供（批号：20130302），陈皮由镇江同源堂国药有限公司提供（批号：20130306），茶新那敏由南京立业制药股份有限公司提供，规格75 mg（以氨茶碱计）×100，苯酚红由SCRC国药集团化学试剂有限公司提供（批号：20121206），浓氨水为分析纯。

1.1.2 设备与仪器 挥发油提取装置，UV-2401PC紫外分光光度计由日本岛津公司制造，KQ-250B型超声波清洗器由昆山市超声仪器有限公司制造，HH-S数显恒温水浴锅由江苏金坛市医疗仪器厂制造，SC202型电热恒温干燥箱由上海申通实验电器厂制造，SHZ-D循环水式真空泵由巩义市英峪予华仪器厂制造，BUCHI旋转蒸发仪R-200。

1.1.3 动物 昆明种小鼠（KM小鼠），体质量18～22 g，由武汉大学动物实验中心提供[证书编号：SCXK（鄂）2014-0004]。

1.2 方法

1.2.1 复方苍术主成分的提取

1.2.1.1 挥发油组 称取药物适量置于1 000 mL圆底烧瓶加10倍量的水浸渍6h，用挥发油提取器水蒸馏8h，直至提尽挥发油，收集挥发油。量取所需剂量挥发油溶于0.2%吐温80待用。

1.2.1.2 水提物组 取上述提取挥发油8 h的水液，真空抽滤，得淡黄色澄清液体，旋转蒸发浓缩至稠膏，真空干燥成粉末，得水提物。称取所需剂量溶于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）待用。

1.2.1.3 醇提物组 称取药物适量置于1 000 mL圆底烧瓶加10倍量95%乙醇，水浴加热回流1.5 h，待冷后真空抽滤，得酒红色澄清液体，旋转蒸至稠膏，水浴蒸至无醇味，得醇提物。量取所需剂量溶于0.2%吐温80待用。

1.2.1.4 主成分混合组 称取药物适量置于1 000 mL圆底烧瓶加10倍量的水浸渍6 h，用挥发油提取器水蒸馏提取8 h，收取挥发油。蒸馏后的水液另器收集。药渣再加水煎煮2次，第1次加8倍量的水煎1 h，第2次加6倍量的水煎0.5 h，合并煎液，过滤，滤液与上述水液合并。浓缩合并液至一定体积，待冷至室温，加入95%乙醇使药液中醇浓度达到60%，静置24 h，抽滤，滤液浓缩至稠膏，真空干燥成粉末。称取所需剂量粉末溶于0.2%吐温80，加入上述挥发油[6]适量，混匀待用。

1.2.2 复方苍术主成分及各有效部位的药理研究

1.2.2.1 浓氨水引咳实验[7]取小鼠60只，雌雄兼用，体质量18～22 g，按体质量、性别分为6组（溶剂组、阳性药组、挥发油组、水提物组、醇提物组、主成分混合组），每组10只，给药组、溶剂组、阳性药茶新那敏[8]组，灌胃给药。连续给药7 d。于末次给药1 h后，将小鼠置于倒置的500 mL烧杯中，内放一棉球，用1 mL注射器吸取氨水0.2 mL，注入棉球，迅速倒置烧杯，以免气体逸出，观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和2 min内咳嗽次数，并与溶剂组和阳性药组比较。

1.2.2.2 酚红排痰实验 取小鼠60只，雌雄兼用，体质量18～22 g，按体质量、性别分为6组，每组10只，给药组、溶剂组、阳性药茶新那敏组，灌胃给药。连续给药7 d。（1）5%酚红溶液的制备：精密称取酚红5 g，溶解于5%（5 g/dL）NaHCO3溶液中，加生理盐水至 100 mL，摇匀。（2）酚红标准液管配制：用分析天平准确称取0.1 g酚红，以5%NaHCO3溶液溶解至100 mL，使1 mL含酚红1 000 μg。然后顺次稀释成 0.01、0.1、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、10.0 μg/mL不同浓度，各25 mL。用分光光度计测吸光度（A）值，以酚红剂量为横坐标（X），吸光度值为纵坐标（Y），绘制标准曲线[9]。Y=0.121 3X-0.006 5（r=0.999 9），线性良好。见图1。（3）实验前各组小鼠禁食不禁水12 h，于末次给药后30 min，腹腔注射酚红0.1 mL/10 g体质量，30 min后颈椎脱臼法处死，解剖分离出气管，用滤纸吸净周边血液，剪下自甲状软骨下缘至气管分叉处的一段气管，放入2mL生理盐水离心管中，超声震荡洗涤20min，加入5%NaHCO3溶液2 mL，用分光光度计测波长546 nm处A值，与酚红标准曲线比较，计算出酚红排泄量[10]，并与溶剂组和阳性药组比较。

图1 酚红标准曲线

1.3 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以ss表示，采用 t检验。Р＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 浓氨水引咳实验 阳性药组和各给药组小鼠咳嗽潜伏期均延长，小鼠2 min内咳嗽次数减少。除醇提物组外，其他各组与溶剂组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；与阳性药组比较，主成分混合组和水提物组均优于阳性药组，差异有统计学意义（P＜0.01）。说明复方苍术有良好的镇咳作用，其镇咳效果依次为主成分混合组、水提物组、挥发油组，而醇提物组无显著影响。其中主成分混合组小鼠咳嗽潜伏期延长70%，2 min内咳嗽次数减少超过75%。见表1。

2.2 酚红排痰实验 阳性药组和各给药组均能提高小鼠气管酚红排泄量。除醇提物组外，其他各组与溶剂组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；与阳性药组比较，主成分混合组和水提物组均优于阳性药组，差异有统计学意义（P＜0.01）。说明复方苍术有良好的祛痰作用，其中主成分药效由高到低依次为混合组、水提物组、挥发油组，而醇提物组无显著影响。见表2。

表1 对小鼠氨水致咳的影响（ss）

表1 对小鼠氨水致咳的影响（ss）

注：-表示未加药；与溶剂组比较，aP＜0.01；与阳性药组比较，bP＜0.01。

组别n 剂量（g/kg）溶剂组阳性药组挥发油组水提物组醇提物组主成分混合组10 10 10 10 10 10-0.51 0.54 8.37 6.74 6.30咳嗽潜伏期（s）54.60±12.83 72.10±7.78a 68.10±5.51a 91.90±10.19ab 62.00±6.65 92.50±12.61ab 2 min内咳嗽次数（次）49.60±15.96 34.00±9.90a 29.40±4.65a 16.00±9.78ab 37.00±8.87 11.90±7.96ab

表2 对小鼠的化痰作用（ss）

表2 对小鼠的化痰作用（ss）

注：-表示未加药；与溶剂组比较，aP＜0.01；与阳性药组比较，bP＜0.01。

组别n 剂量（g/kg）溶剂组阳性药组挥发油组水提物组醇提物组主成分混合组10 10 10 10 10 10-0.512 0.540 8.370 6.740 6.300气管酚红排泄量（μg/mL）0.25±0.05 0.39±0.08a 0.45±0.08a 0.56±0.16ab 0.31±0.08 0.58±0.13ab

3 讨 论

3.1 提取方式 本实验采用多种提取方式，水提、醇提、挥发油提取，然后对小鼠采用灌胃法给药[11]，水提物浓缩干燥分剂量后用水溶解；醇提物浓缩后不能干燥为粉末，实验中采用两种方法，一种为用淀粉混合浓缩物干燥后分剂量，另一种方法为浓缩至无醇味后直接按体积分剂量，对结果均无影响；挥发油直接按体积分剂量。

3.2 挥发油提取条件的选择 本实验采用正交设计法[12]考察了挥发油提取的最佳条件，以挥发油提取量为考察指标，选择浸渍时间（0、6、12 h）、加水量（8、10、12 倍）、提取时间（4、6、8 h）3 因素 3 水平的 L9（33）正交表，结果得挥发油提取的最优工艺为浸渍6 h，加10倍量水，提取8 h。

3.3 溶剂的选取 水提物的溶剂可用水或5%CMC-Na，对结果无影响；醇提物与挥发油均难溶于水，实验中采用两种方法，一种为用植物油溶解，另一种为用0.2%吐温80溶解，前者溶解效果较好，但长期灌胃条件下对小鼠健康状况有不良影响，表现为毛色不光亮，形体消瘦，影响药物吸收与实验结果；后者虽溶解效果不如前者，长久放置易积聚，但振摇后可分散均匀，且对小鼠健康无明显不良影响，药物吸收良好，故实验选用吐温溶解法。

本研究仅对复方苍术的镇咳药理作用作了初步动物实验对比研究，为合理开发传统中药，充分利用中药资源提供了理论参考，但对临床药理作用的研究没有涉及，这也是作者今后的研究方向。

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