迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪在临床体液细胞检测中的应用

寿爽，谭焕腾，金晓娟，成军，孙长贵

(解放军第一一七医院检验科，浙江 杭州310013)

传统胸腹水、脑脊液等体液标本的细胞学检查对临床相关疾病的诊断、治疗有较重要的意义。目前，其检测主要依赖显微镜下手工计数和分类(手工法)，并作为金标准；但操作复杂，费时费力，而且误差大、重复性差，难以标准化[1]。随着自动化检测技术的发展，一些新型号的血细胞、尿沉渣分析仪可以对体液标本进行细胞计数和分类[2-6]。我院引进了迈瑞最新型的BC-6900全自动血细胞分析仪，它增加了体液分析模式可对体液细胞进行自动化检测，但其检测结果是否准确可靠，与手工法一致性如何，需要进行验证。本研究用该仪器对104份临床体液标本进行细胞学检测 (仪器法)，并与手工法检测结果作统计学分析，以探讨迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪在临床体液细胞检测中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本 随机收集2014年5月至2015年2月住院患者的体液标本共104例 (胸水41例，腹水

33例，脑脊液23例，关节液7例)，其中血性标本

13例。所有标本收到后2h内检测完毕。

1.2 仪器与试剂 迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪及配套试剂；日本奥林帕斯BX-53显微镜；标准牛鲍氏计数板；珠海贝索生物有限公司的瑞-姬氏染色试剂。

1.3 方法

1.3.1 仪器法 先将迈瑞BC-6900全自动血细胞分析进行性能评价[7，8]，性能稳定结果可靠前提下，按照说明书进行体液标本的检测。每份体液标本在该仪器上用体液模式重复测定2次，记录红细胞数(RBC-BF)、有核细胞数(TC-BF)及分类结果并计算均数，同时观察散点图，必要的记录高荧光细胞比率。

1.3.2 手工法 同一份体液标本，按照《全国临床检验操作规程》在显微镜下用标准牛鲍氏计数板计数红细胞、有核细胞数[1]，计数2次取均值。然后将对应的体液标本1500r/min离心5min，取沉渣制片3张：2张进行瑞氏染色，由两名经验丰富的主管技师以上技术人员在双盲情况下进行有核细胞分类，1张备用。每人在显微镜下将每张涂片计数200个有核细胞并分类2次，计算两张涂片单个核细胞(MN)、多个核细胞(PMN)百分比均值。

把仪器法与手工法计数、分类的相关数据依据一定的细胞数进行分组：有核细胞计数及分类以有核细胞总数是否达100×106/L为界分组；红细胞计数以血性、非血性分组。

1.3.3 统计学方法 采用Excel和SPSS 12.0统计软件，记录各组仪器法与手工法的红细胞计数、有核细胞计数及分类百分比结果，用中位数(分布范围)表示，以手工法为参考方法，把两种方法进行相关分析。将两种方法检测结果的差值做Blant-Altman一致性检验分析，并作图。图中实线最上、下两条(有数值表明的)分别表示两种检测方法差值95%一致性界限，中间实线表示差值的均值，虚线表示差值为“0”[9，10]。

2 结果

2.1 BC-6900仪器法和显微镜下手工法计数及分类比较的相关性结果 见表1。

2.2 Blant-Altman一致性检验 用仪器法和手工法对红细胞总数测定值进行Blant-Altman一致性检验，结果见图1、图2。

3 讨论

近年来，许多仪器结合了电阻抗、激光、流式细胞术以及特殊荧光染色等原理，实现了临床体液细胞的自动化检测[2-6]。迈瑞BC-6900血细胞分析仪采用激光流式细胞术结合荧光染色的技术手段，对体液中的有核细胞进行识别和检测，采用鞘流阻抗通道检测体液中的红细胞，专用的体液模式使体液细胞的检测实现了自动化。该仪器体液模式除了报告7项常规参数，还可以提供高荧光细胞比率、白细胞计数等7项研究参数，并给出有核细胞分类散点图，可较准确、快速得到结果。

为了比较迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪体液细胞检测结果与手工法的一致性，我们对两种方法的检测结果进行了相关性分析。表1结果显示，对于体液红细胞计数，无论是血性还是非血性标本，两种方法检测结果的相关性较好(r＞0.95)；当TC-BF>100×106时，有核细胞计数和分类的相关性较好(r＞0.9)。这说明对于上述标本，两种方法检测结果一致性较好。而当TC-BF<100×106时，两种方法的有核细胞计数、单个核细胞和多个核细胞分类百分比的相关性较差 (r分别为0.713，0.663，0.751)。

表1 仪器法与手工法检测结果的相关性

图1非血性标本红细胞总数的Blant-Altman图

图2血性标本红细胞总数的Blant-Altman图

鉴于不同的体液标本由于病因不同，细胞计数差异可达上万倍，相关性分析会受个别数据的影响。为更好地衡量两种检测方法的一致性，本研究又采用了Blant-Altman检验分析。其要求两种方法检测结果的差值至少95%的点均落于95%一致性区间内，并且越接近差值为“0”虚线，说明两种方法检测结果的一致性越好[9，10]。图1~2显示：两种方法非血性标本红细胞计数差值对应的点比血性标本更为集中，更多的点接近零值线，说明两种方法对非血性标本红细胞计数检测结果的一致性比血性标本更好。这是由于血性标本红细胞总数太多，手工计数时稀释倍数过大，操作的重复性差、误差大造成两种方法测定结果的差值过大。但两者的相关系数反而是血性标本的更好，这是由于血性标本中个别标本细胞计数值太大，导致较大的偏差影响了相关系数[11-13]。同理作图，两种方法低值有核细胞计数及分类的测定差值所对应的点比高值更为分散，说明TC-BF>100×106时，有核细胞计数及分类两种方法的检测结果更一致，与相关分析的结果一致。当TC-BF<100×106时，有核细胞的计数和分类两种方法的检测结果差值较大，这是由于细胞数太少时，存在泊松分布现象，计数和分类的偶然误差非常大，造成结果重复性差，一致性低，而仪器的分类结果是否可靠值得探讨。

在本研究中有7例标本检出了恶性肿瘤细胞。这类标本仪器均显示高荧光细胞比率增高，有核细胞与白细胞总数差值较大，散点图异常等特点，这些信息对肿瘤细胞的筛查有提示作用。因为该仪器是通过检测细胞内核酸含量的多少对细胞进行分类的，肿瘤细胞不仅核酸含量高，而且细胞内容物复杂，在散点图的某一区域会出现密集现象[14]。其原理和散点图特点基本与Sysmex XE-5000血细胞分析仪相同，也有相关文献报道高荧光细胞比率越高，提示检出肿瘤等异常细胞的可能也越高[2，15]。

综上研究，迈瑞BC-6900血细胞分析仪法和显微镜下手工法检测临床体液细胞具有较好的一致性，特别是血性、有核细胞数多的标本，建议采用仪器法计数误差会小一些，可代替手工法，大大提高体液标本检测的速度，减少工作量，具有较高的临床应用价值。对于红细胞、有核细胞数都较少的标本，应结合显微镜下手工法进行修正，一般建议不需要报分类结果；血性但有核细胞数较少时应溶解红细胞后再手工法计数。当高荧光细胞比率增高、有核细胞与白细胞总数差值较大、散点图异常时，标本必须涂片进行分类，特别注意有无肿瘤细胞，并与间皮细胞、组织细胞相鉴别。

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