红细胞冷凝集对全血细胞计数影响分析

范红平，忽胜和

(大理学院附属医院检验科，云南 大理 671000)

全血细胞分析是临床上使用广泛的常规检验，因此准确的血细胞计数的结果为临床提供了重要的依据。标本的状态直接影响到测结果的准确性。如何提升实验室质量成为广大检验工作者面临的日益突出的问题[1]。标本的正确性是实验室质量控制的关键环节。标本的状态除了护士采血的正确操作，还与标本自身的一些异常情况相关。这些异常情况就需要检验人员来发现。血细胞分析检测中红细胞冷凝集是影响血细胞计数结果不准确的因素之一，在检验工作中时有发生。因此，我们筛选了一部分红细胞冷凝集标本进行检测，再将这些标本37°C水浴后重新检测，将两次检测结果进行比较分析，了解红细胞冷凝集对血细胞计数结果的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集我院2014年9月至2015年2月有红细胞冷凝集的血细胞分析标本46例，男29例，女17例，年龄8~75岁。标本红细胞冷凝集判断标准：平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）超过参考上限20g/L[2]，排除标本脂血，溶血，及球形红细胞等情况，并且肉眼观察有红细胞凝集的现象。

1.2 标本采集 用EDTA-K2抗凝采血管采静脉血2.0ml混匀。采血顺畅，压脉带压迫时间<1min。

1.3 仪器与试剂 日本Sysmex公司生产的XN-2000全自动血细胞分析仪。质控品及试剂均为Sysmex配套原装试剂。

1.4 检测方法 每日先进行室内质控，在控后再进行标本的检测，按红细胞冷凝集判断标准筛选出冷凝集的标本。将标本置于37°C水浴箱30min，取出观察试管内抗凝血，未发现管壁内有凝集颗粒，混匀后立即上机再次测定[3]，如管壁仍然有凝集颗粒则延长水浴时间至50min，再进行检测。

1.5 数据处理 结果用统计软件SPSS12.0处理，采用配对t检验对结果进行比较分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

冷凝集标本在水浴前后检测结果WBC，RBC，Hct，MCV，MCH，MCHC 六个项目的结果水浴前后比较有统计学意义（P<0.05），而Hb和PLT水浴前后结果无统计学意义(P>0.05)。细胞冷凝集标本在水浴前后的检测结果见表1。

表1 红细胞冷凝集标本水浴前后结果比较

3 讨论

检验质量是实验室永恒的主题，为临床提供准确可靠的检验结果是检验科工作的目标和责任。检验结果的准确，包括了实验前标本准确的采集，检测仪器的状态，试剂的质量，检验结果的审核分析等方面。其中检验结果的审核分析是实验室工作中重要的环节。通过结果的审核分析可以发现标本的异常情况，及时予以纠正则可以保证结果的准确性。红细胞冷凝集是导致血细胞计数错误结果的因素之一，在日常检验工作中时有发生。红细胞冷凝集是一种现象，当血液离体后，在低于体温环境的试管内发生肉眼可见的凝集现象，当恢复至体温条件时（37°C），冷凝集现象可解除。血液标本出现红细胞冷凝集现象明显影响到全血细胞计数的结果。从本次的数据结果显示WBC，RBC，Hct水浴后结果升高，MCV，MCH，MCHC结果在水浴后检测结果

降低，有统计学意义，而Hb，PLT的差异无统计学意义。红细胞凝集使得红细胞凝集成团，体积增大，这部分红细胞未能计数在红细胞内，导致红细胞计数假性降低，多个红细胞聚集后形成的红细胞团在通过计数孔时引起脉冲增大，引起MCV假性升高，凝集的RBC使MCV增高，同时RBC计数减低，但二者以RBC计数减少为主，因此Hct随之也降低，并造成了由 RBC，Hb，HCT 计算得到的 MCH，MCHC结果异常升高。冷凝集素除对红细胞有作用外，也可凝集淋巴细胞，中性粒细胞，单核细胞，巨噬细胞和血小板，使WBC，PLT的结果也假性减低[4]，当红细胞凝集体中包含白细胞时，其体积扩大，其体积超出血细胞分析仪在白细胞测定的阈值范围，超出白细胞散点图分布区域，从而将其排除在外，造成漏检而导致数量下降[5]。本次数据显示PLT在水浴前后结果差异无统计学意义，其原因为冷凝集素引起的红细胞凝集有别于启动正常凝血途径而发生的血液凝固[6]，红细胞冷凝集是一个可逆的过程，不消耗凝血因子及血小板。RBC与PLT虽然在相同的计数池内计数，二者计数体积相差较大，检测体积范围差别较大，因此凝集的红细胞对于PLT的计数无明显干扰，XN-2000全自动血细胞分析检测PLT采用的是鞘流计数方法，鞘流技术一定程度上降低了细胞凝集的干扰，避免了异常血细胞脉冲的发生，降低了细胞凝集的干扰，因此水浴前后PLT计数结果无显著差异性。Hb检测是通过加入SLS溶血素溶解红细胞，采用比浊法测定，红细胞凝集对该方法无干扰，因此水浴前后结果差异无统计学意义。综上所述，血液标本出现红细胞冷凝集现象可以明显影响全血细胞分析的结果，导致检测结果与标本的真实结果存在较大的差异。冷凝集素抗体可为多克隆或单克隆自身抗体，绝大多数单克隆冷凝集抗体发现于淋巴网状内皮细胞瘤患者，而多克隆冷凝集抗体则是由于感染引起[7]。冷凝集素对人红细胞I类抗原有特异性，30°C以下可使红细胞凝集，温度提高后凝集消失，健康人的血清中冷凝集素效价不高，一般在16°C以下可发生凝集，30°C以上不发生凝集[8]，所以实验室温度是避免血液标本冷凝集的一个重要环节。为了防止可能出现的RBC冷凝集现象对血细胞计数结果的影响，必需使实验室保持在合适的温度（18~22°C），低于 15℃或高于30°C均对血细胞计数结果有影响[9]。除了保证实验室温度，检测人员应该仔细审阅检验结果（如Hb与RBC的不符合）和直方图的改变[10]。实验室还应该建立复检标准，根据国际血液学标准化委员会推荐的复检规则第13条规定，平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)超过正常上限20g/L时，要求检查标本是否有脂血，溶血，凝集及球形红细胞。根据这条规则可发现标本冷凝集现象或其他的一些异常标本。因此保证实验室在适宜的温度可一定程度避免红细胞冷凝集，实验室制定恰当的复检规则对检验结果审核分析，则可以及时发现红细胞冷凝集标本，对标本进行相应处理后重新测定，保证检验结果的准确性。

[1]陆胜，季雄娟.实验室分析前质量控制浅析[J].实验与检验医学，2012，30（1）：46.

[2]中华医学会检验分会全国血液学复检专家组.全国血液学复检专家小组工作会议纪要暨血细胞自动计数复检标准释义[J].中华检验医学杂志，2007，30（4）：380.

[3]乐家新，马骏龙，徐菡，等.红细胞冷凝集对不同类型血细胞分析仪检测结果的影响探讨[J].医疗卫生装备，2009，30（2）：69.

[4]李家增，王鸿利，韩忠朝.血液实验学[M].上海：上海科技出版社，1997：241.

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[6]刘国生，卢艳平.冷凝集干扰ABO血型鉴定及血常规检测参数1例[J].中国医学创新，2011，18，（8）：196.

[7]Cooper RA，Bunn HF.Hemolytic Anemias[M].Paris：Mcgraw Hill Inc，1984：1864-1866.

[8]陈忠，张莉尼.7例抗IgM国内文献综合分析[J].临床检验杂志，2002，20（2）93.

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[10]杨宏霞，江政松，焦连婷.1例红细胞冷凝集在两台血细胞分析仪上检测结果分析[J].中国医学检验杂志，2011，12（5）：217.