HCV-c Ag和HCV-Ab联合检测对HCV感染诊断价值的研究

林俊填 ，余晋林 ，伍伟健 ，陈展泽 ，龚道元

(1、佛山市中心血站，广东 佛山 528000；2、佛山市第一人民医院；3、佛山科学技术学院医学院)

丙型肝炎是由HCV病毒感染所致，据WHO统计，全球感染率高达3%，我国一般人群HCV-Ab阳性率为3.2%[1]。丙型肝炎症状较轻，发展慢，不易引起重视，但易可发展为慢性肝炎、肝硬化和肝癌，已成为严重的公共卫生安全问题。目前尚无有效疫苗预防，临床上也尚无特效的药物和治疗措施[2]。HCV能通过输血传播，因此，对献血者严格筛查和临床上早期检出HCV感染是防止丙型肝炎传播的有效措施。目前，绝大多数血站是通过检测HCV-Ab来对血液进行筛查，医院尤其中小医院也主要通过检测HCV-Ab来进行诊断，但对早期感染者HCV-Ab检测容易漏诊[3]。本文对门诊和住院患者血液标本进行HCV-cAg、HCV-Ab及HCV-RNA联合检测，探讨其对HCV感染的临床价值。

1 材料与方法

1.1 实验对象

1.1.1 丙型肝炎患者 选取佛山市第一人民医院2013年9月至2014年9月间门诊及住院患者121例，所有患者均通过HCV-RNA检测确诊，并排除其他病毒型肝炎病毒感染，符合中华医学会肝病学会、中华医学会传染病学与寄生虫学会制定的《丙型肝炎防治指南》确诊标准[4]。

1.1.2 对照组 随机选择2014年5-7月HCV-RNA检测阴性的120例体检者作为对照组，且在半年后随访，HCV-RNA检测均为阴性。

1.2主要仪器与试剂

1.2.1 仪器 全自动酶标分析仪型号为MLFAME24/20（瑞士哈美顿公司）；PCR荧光定量分析仪型号为ABI-7500（美国ABI公司）。

1.2.2 试剂 ⑴HCV-Ab检测试剂：采用上海科华公司的ELISA检测试剂盒；⑵HCV-cAg检测试剂：采用山东莱博生物科技有限公司生产试剂盒；⑶HCV-RNA检测试剂：中山大学达安基因股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 标本采集及处理 静脉采血、离心分离血清，-70℃冰冻保存。

1.3.2 HCV-RNA检测 采用实时荧光定量法检测，所有操作严格按说明书进行。以HCV-RNA为金标准，确诊患者121例血清用于后续实验。

1.3.3 HCV-cAg检测 设空白对照1孔，阴性、阳性对照各2孔。空白对照加入200μl样本稀释液，其他各孔加入100μl样本稀释液，阴性、阳性对照及待测标本 100μl，37℃孵育 90min，洗板 6 次，加酶结合物 200μl，37℃孵育 30min。再洗板 6次，加显色剂200μl。 37℃避光 10min，加终止液 50μl终止显色，10min内450nm(参考波长630nm)读板，Cut off=NCx（阴性均值）+0.06。

1.3.4 HCV-Ab检测 ELISA法，严格按试剂说明书操作。

1.3.5 统计学分析 应用SPSS统计软件对数据进行分析，配对资料采用χ2检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV标志物检测结果 对121例HCV阳性患者和对照组120例体检者分别进行HCV-Ab、HCV-cAg检测，结果如表1、表2。

2.2 HCV-Ab和HCV-cAg的相关检测参数计算和两者间的检测一致性检验 经计算HCV-Ab和HCV-cAg的检测特异度分别为99.17%和100%，均具有良好的检测特异度；HCV-Ab的检测灵敏度为90.91%，而HCV-cAg的灵敏度为70.25%，但联合检测可使灵敏度得以提高 （具体见表3）；HCV-Ab和HCV-cAg的检测敏感度存在显著性差异（表4），而特异性两者间无显著性差异。另外，HCV-Ab和HCV-cAg两指标间检验结果一致性经统计分析，其Kappa系数为-0.013，说明两者之间的检测结果无一致性。

表1 患者与对照组HCV标志物检查结果

表2 确诊患者HCV标志物检查结果

表3 HCV-Ab、HCV-cAg单独和联合检测对HCV感染的诊断价值

表4 HCV-Ab与HCV-c Ag的敏感度与特异度比较的统计学结果

3 讨论

RNA是HCV感染的直接证据，RNA在HCV感染后的16～15d即可出现，RNA检测可使窗口期大大缩短到13d，HCV-RNA检测具有早期、敏感和特异等优点，但HCV感染后病毒血症有持续、一过和间歇3种模式[5]，此时HCV-RNA检测结果为阴性，一些晚期肝病患者的表达载量太少也无法检出[6，7]；如患者曾用干扰素治疗，干扰抑制HCV-RNA复制，HCV-RNA检测结果阴性也不排除HCV感染的可能[8-10]，因此，HCV-RNA检测也存在一定的漏诊率[11，12]。还有，荧光定量PCR法检测HCV-RNA，影响因素较多，如RNA酶污染或RNA降解等[13]，在样品采集、储存和检测方面都有严格要求，技术上操作要求高，实验条件严格，成本高、设备贵，所以，难以在常规实验室或基层医院推广、普及和应用[14]。

目前，中心血站与中小医院主要通过检测HCV-Ab来对血液进行筛查[15-17]。HCV-Ab是HCV感染的间接依据，第3代试剂检测HCV-Ab窗口期为66d，窗口期长，故HCV-Ab检测时间需在感染大约70d后[18]，容易漏诊早期感染患者，此外，如免疫缺陷患者、血液透析、免疫抑制剂以及其他严重疾病导致体内免疫低下患者，均可致体内HCV-Ab无法检出，导致假阴性。还有，不同厂家包被的HCV抗原组成、来源和用量等不同，导致各厂家试剂灵敏度和特异度存在差异，导致检查结果不一致，结果可能出现假阳性和假阴性，单凭HCV-Ab检测容易漏检。同时，HCV-Ab阳性也无法分清是既往感染还是新近感染，无法说明体内HCV病毒复制的情况，给疾病的诊断和病情判断带来一定的困难。因此，HCV-Ab单独作为诊断指标还有较大的局限性。

HCV-cAg也是HCV早期感染或持续性感染的指标，一般情况下，患者HCV-cAg阳性仅比HCV-RNA在检出时间上晚1~2d，且检测方法易掌握，操作简便，不需要特殊设备，可常规检测。由于HCV-cAg检测可明显缩短窗口期，可为HCV早期诊断提供依据。在血站对献血者进行HCV-cAg检测，可增加HCV的阳性检出率和减少HCV的传播风险。

本文的研究结果显示，单独进行HCV-Ab和HCV-cAg检测时，121例 HCV-RNA确诊患者HCV-Ab和HCV-cAg两指标的检出阳性标本数分别为110例和85例，检测灵敏性分别为90.91%和70.25%，HCV-cAg的灵敏性要低于HCV-Ab，两者间存在显著性差异；两指标的检测特异度分别为99.17%和100%，两者的特异度相近，经统计学分析两者间无显著性统计学差异。HCV感染机体产生HCV-Ab后，发生相对应的抗原抗体结合，可使HCV-cAg检出率降低，本文研究结果也说明HCV-cAg的检出敏感度要低一些。因此，临床上不可将HCV-cAg检测完全取代HCV-Ab的检测，将HCV-Ab和HCV-cAg两种指标结合起来检测，对临床上提高HCV感染的筛查和诊断具有重要的价值。

本文的研究结果显示HCV-Ab和HCV-cAg两检验结果之间存在一定的交叉，说明两种实验方法之间无法相互替代。两者联合检测时，敏感度和阴性预测值等指标较任一单项指标都有了一定程度的提升，而特异度无显著性改变。

综上所述，我们认为，对于患者进行HCV的筛查，最好是将HCV-Ab和HCV-cAg两种指标结合起来检测，这对临床上诊断和预防HCV感染具有重要的价值。

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