红细胞内神经元特异性烯醇化酶检测

吴坤芳，蔡玉玲

（海南省人民医院检验科，海南海口570311）

红细胞内神经元特异性烯醇化酶检测

吴坤芳，蔡玉玲

（海南省人民医院检验科，海南海口570311）

神经元特异性烯醇化酶（neuron－specific enolase，NSE）是参与糖酵解途径的烯醇化酶中的一种，存在于神经组织和神经内分泌组织中。常人血清NSE水平为5－15ng／ml，而红细胞内NSE及其同工酶的含量测定尚未见报道，我们现将实验结果分析如下。

1 .材料和方法

1.1 样本 收集在我院做健康体检且体检各项指标均在生物参考区内人员20名，男、女各10名。男性最大年龄81岁，最小29岁，平均44.6岁。女性最大年龄55岁，最小22岁，平均41岁。

1.2 方法 抽取血清2ml和红细胞悬液10ml（1 ml全血加9ml生理盐水）。红细胞悬液用生理盐水洗涤3次（2 000r／10分钟），配成一定比例的红细胞悬液混均在Sysmex－XE2100血球仪测血常规，取红细胞、血红蛋白、平均红细胞体积、血小板数。然后取20μl加380μl蒸馏水溶血后行NSE测定，血清和红细胞悬液离心（3 000r／5分钟）取上清液行NSE测定。所有实验在2小时内完成。

1.3 仪器和试剂 NSE测定使用Roche、cobas－C601电化学发光免疫分析仪，Sysmex－XE2100血球仪检测血常规，试剂和定标本液均采用原公司产品，质控为伯乐公司提供。

1.4 统计学方法 取均值和标准差。按计算平均红细胞血红蛋白浓度和平均红细胞血红蛋白含量的方法，计算平均红细胞内NSE浓度和平均红细胞内NSE含量。根据男、女平均红细胞内NSE浓度与血清平均NSE浓度计算其相差倍数。根据红细胞内NSE平均含量与血红蛋白平均含量计算溶血每产生1g／L Hb测出多少μg／L的NSE。男、女之间平均红细胞内NSE浓度与溶血每产生1g／L Hb就可以产生多少μg／L的NSE，采用配对t检验。

2 结果

2.1 红细胞洗涤3次后，90%以上的血小板已被清除，达到洗涤的目的。溶血NSE值为20μl红细胞悬液加入380μl蒸馏水溶血后所测NSE值减上清液检测的NSE值再乘上稀释倍数20。

2.2 平均红细胞内NSE浓度是血清浓度的817倍，其中男性为726倍、女性为922倍，女性高。但是平均红细胞内NSE浓度男、女之间差异没有统计学意义，t值为0.336。平均红细胞内NSE含量与红细胞大小有关系，大细胞含量较小细胞多。男性溶血每产生1g／L Hb就可以产生24.84μg／L的NSE，女性溶血每产生1g／L Hb就可以测出27.83 μg／L的NSE，男性比女性低，（t＝1.25），差异没有统计学意义。

2.3 平均红细胞内NSE含量为（747.46±115.9）×10－12μg，平均红细胞内NSE浓度为（8.61± 1.48）×103μg／L。结果见表1。

表1 男、女性血清及红细胞内NSE含量和浓度检测结果（x—±s）

3 讨论

NSE是烯醇化酶的一种同工酶，其特异地存在于神经元、神经内分泌细胞和少突胶质细胞内，其他脏器及脑脊液中的分布水平不及中枢神经系统的1%。由于NSE是神经元损伤的敏感性和特异性生化标志物，近年来有关颅脑损伤后血清与脑脊液中NSE活性改变的研究受到越来越多的关注，大量动物实验及临床研究表明，NSE活性改变与疾病的早期诊断、病情变化、临床预后密切相关。NSE检测作为肿瘤标志物可提高肺癌诊断的敏感性、特异性和准确性［1］。血清NSE浓度是反映新生儿HIE严重程度的敏感生化指标，NSE浓度变化趋势是新生儿HIE预后评估的有效指标之一［2］。NSE浓度变化趋势可预示脑组织损伤程度［3］。

红细胞和血小板内有其同工酶，与NSE存在部分交叉免疫反应［4］。从实验结果可见：平均红细胞内NSE的浓度为8.61±1.48×103μg／L，是正常人群血清平均浓度10.54±2.63μg／L的817倍。女性溶血每产生1g／LHb就可以测出27.83μg／L的NSE，男性溶血每产生1g／L Hb就可以测出24.84 μg／L的NSE，女性高于男性是因为女性红细胞内血红蛋白低于男性，（t＝1.25），差异没有统计学意义。溶血浓度与NSE测定值程正相关。这与邹自英报道：溶血每产生1g／LHb可以测出34.53μg／L的 NSE［5］，结果相似。NSE测定的生物参考区为0－16.3μg／L，从实验结果可见稍有溶血NSE检测值就可能超出测定的生物参考区，如果不注意标本的留取和送检而造成红细胞损伤就会造成错误的检测结果，误导临床诊断和治疗。

红细胞内NSE浓度是清血浓度的817倍。它比AST（10倍）、ALT（7倍）、K＋（23倍）、CK（69倍）［6］，高很多倍。从检测平均红细胞内NSE含量和浓度说明血清NSE检测对标本的要求极高，红细胞稍有损伤就可出现假阳性结果，所以应禁止有溶血的标本进行NSE水平测定。

［1］李佩青，周 伟，张喆，等.血清神经元特异性烯醇化酶与围产儿缺氧缺血性脑病相关性研究［J］.中国妇幼保健，2013、15：2402.

［2］郝立成，张 双，李树华.血清BDNF及NSE检测在惊厥儿童中的临床应用价值［J］.中国妇幼保健，2013，5：783.

［3］姜艳红，刘 冰，吕晓娴.电化学发光检测神经元特异性烯醇化酶影响因素分析［J］.现代肿瘤医学，2012，09：1944.

［4］张亚松，肖登岩，麦富巨.温度、时间及溶血对全血标本中NSE测定的影响［J］.医学临床研究，2008，7（25）：1193.

［5］邹自英，黄 海，袁成良.标本保存时间和溶血对神经元特异性烯醇化酶测定的影响［J］.西南国防医药，2006，6：610.

［6］GUDER WG.Thrombocytes as aninterfering factor in chinical chemisty［J］.Clin chem.Clin Biochem，2002，28（6），445.

2014－09－18）

1007－4287（2015）10－1762－02