风湿性心脏病患者外周血细胞因子和Treg细胞检测的意义

华 杰

（应城市人民医院检验科，湖北孝感432400）

风湿性心脏病患者外周血细胞因子和Treg细胞检测的意义

华 杰

（应城市人民医院检验科，湖北孝感432400）

风湿性心脏病（rheumatic heart disease，RHD）为一种自身免疫性疾病，由A组乙型溶血性链球菌感染导致风湿热后遗症，主要病理基础为受累心脏瓣膜发生弥漫性纤维化，瓣口狭窄，或关闭不全，引发心脏血流动力学紊乱，占心脏外科疾病约30%［1］。RHD患者体内存在有对心肌、心内外膜、血管平滑肌起反应的抗体，发生链球菌感染时可激发机体发生自身免疫反应，出现相应病变。RHD患者免疫功能显著低于正常人［2］。链球菌M蛋白为一种超抗原，可大量激活机体内T细胞、自身反应性T细胞，诱发RHD［3］。笔者回顾性分析32例RHD患者的临床资料，以探讨IL－10、TGF－β1等外周血细胞因子的血清浓度与CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg水平在RHD发生发展中的意义，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年2月－2013年10月我院诊治的RHD患者32例，男18例，女14例，年龄39－69岁，平均年龄（45.2±6.3）岁。所有患者均经过超声心动图与瓣膜术后病检确诊RHD，纽约心脏病学会心功能分级为Ⅱ－Ⅳ级，排除合并肝肾功能不全、冠心病、急慢性感染、恶性肿瘤、甲状腺功能亢进、糖尿病、近期使用免疫调节制剂、近期有风湿活动及其他自身免疫性疾病患者。合并单纯二尖瓣狭窄患者13例，二尖瓣狭窄并关闭不全患者15例，二尖瓣及主动脉瓣狭窄并关闭不全患者4例。选择同期健康查体人员32例为对照组，两组患者在年龄、性别、生活环境等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法 选择美国BioLegend公司生产的Foxp3－APC单克隆抗体、荧光抗体鼠抗人CD4－FITC、CD25－PE，选择美国R＆D公司生产的IL－10、TGF－β1的ELISA试剂盒。抽静脉血10ml，经肝素抗凝。5ml离心后取血清，采用ELISA法检测IL－10、TGF－β1；5ml用淋巴细胞分离液分离单个核细胞（PBMC），计数细胞后，将细胞浓度调整至1×106／ml。取细胞悬液100μl，加入20μl CD4－FITC、CD25－PE抗体，室温避光反应20min，离心弃上清，加入固定破膜液1ml，室温孵育20min，加入20μl Foxp3－APC抗体，避光反应30min，染色缓冲液洗涤离心，流式细胞仪检测，以CD4设门分析CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞亚群，每份计数为104个细胞，以CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞占CD4＋T淋病细胞比例表示结果。

1.3 统计学方法 使用SPSS13.0统计软件，计量资料采用均数±标准差（x—±s）表示，两样本均数比较采用t检验，以P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者IL－10、TGF－β1浓度比较 经上述检测分析，观察组IL－10及TGF－β1浓度均显著低于对照组（P＜0.01）。详见表1。

IL－10观察组组别n TGF－β1 32 25.6±4.5 7.3±2.9对照组32 32.6±4.4 13.2±2.6 T 6.29 8.56 P 0.000.00

2.2 两组患者Treg细胞比较 经上述检测及对比分析，观察组CD4＋CD25＋细胞／淋巴细胞比值及CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T细胞比值均显著高于对照组（P＜0.01）。详见表2。

表2 两组患者Treg细胞比较

表2 两组患者Treg细胞比较

细胞观察组32例组别例数CD4＋CD25＋细胞／淋巴细胞CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg／CD4＋T 5.8±0.6 2.9±0.3对照组32例2.7±0.8 1.4±0.3 T 17.53 20.00 P 0.0000.000

3 讨论

风湿性心脏病为一种自身免疫性疾病导致的结果，与多种细胞因子共同作用有关。IL－10是一种抗炎因子，由多种细胞分泌，具有抑制多种炎症因子与自身抗体合成的作用［4］。本研究中观察组IL－10显著低于对照组（P＜0.05）。提示当心脏的瓣膜出现自身免疫炎症时，因机体内抗炎因子IL－10含量降低使炎性因子持续存在，瓣膜局部长期受炎性因子的侵蚀出现病变，形成心脏瓣膜病。TGF－β主要有TGF－β1、TGF－β2、TGF－β3三种类型。各种淋巴细胞、树突状细胞、单核细胞及血小板可分泌合成TGF－β1，有研究发现RHD伴心衰患者心肌中TGF－β1表达显著增强，与左室大小密切相关［5］。在离体受损瓣膜中内皮基质细胞、浸润的成纤维细胞、巨噬细胞中均发现有TGF－β增加，对纤维化、钙化、胶原沉积具有促进作用［6］。本研究表明观察组患者体内TGF－β1显著低于对照组（P＜0.01）。提示RHD与血清中TGF－β1含量关系不大，但心脏瓣膜炎症时，因局部淋巴细胞浸润，TGF－β1表达增加的淋巴细胞可通过局部旁分泌TGF－β1，到达局部心肌、瓣膜组织中，因此仅表现为局部TGF－β1升高导致瓣膜发生病变。

Treg细胞对自身免疫性疾病的发生具有抑制作用，当CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞减少时，机体的细胞免疫功能低下，体液免疫功能增强，此时B细胞被活化，机体产生大量抗体出现自身损害，即发生自身免疫性疾病［7］。同时因致病因子的不断扩散、长期持续存在，使疾病不断反复发作［8］。有研究证实［9］类风湿性关节炎、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、白塞病、原发性干燥综合征等风湿性疾病患者体内Treg细胞比例均比健康人低［10］。本研究中进一步证实了RHD患者体内Treg细胞显著低于健康人（P＜0.05）。提示机体更易发生自身免疫性疾病，RHD患者病程较长，且易反复，可能与Treg细胞减少与致病因子扩散且长期存在有关。患者心脏瓣膜受自身抗体的长期攻击，持续的免疫炎性反应使瓣膜增厚、挛缩，最终出现心脏瓣膜性疾病［11］。TGF－β可刺激T细胞产生大量Treg，TGF－β1降低［12］，T细胞产生Treg细胞减少，RHD患者体内CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg也相应减少。同时Treg细胞主要通过分泌IL－10、TGF－β1发挥免疫调节作用，RHD患者体内CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞减少，同时血清中IL－10、TGF－β1浓度也相应减低。说明RHD患者免疫异常与IL－10、TGF－β1的降低及Treg细胞的减少均有关。

综上所述，IL－10、TGF－β1等外周血细胞因子血清浓度及CD4＋、CD25＋、Foxp3＋Treg等调节性T细胞的检测能够反映RHD患者的免疫功能，对于患者病情的评估及预后的评价均具有重要意义。

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2014－07－22）

1007－4287（2015）10－1752－02