血液细菌感染患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC水平变化

李 超，袁宝军，张淑青，佟艳艳，王菊惠，张会芬

（开滦总医院检验科，河北唐山063000）

血液细菌感染患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC水平变化

李 超，袁宝军＊，张淑青，佟艳艳，王菊惠，张会芬

（开滦总医院检验科，河北唐山063000）

目的探讨中性粒细胞CD64指数、C－反应蛋白（CRP）、白细胞（WBC）及中性粒细胞和淋巴细胞绝对值比值（N／L）在血液细菌感染患者中的水平变化及临床意义。方法 采用流式细胞术检测105例血液细菌培养阳性患者（阳性组）、66例血液细菌培养阴性患者（阴性组）及50例健康体检人员（正常组）外周血中性粒细胞CD64指数、免疫比浊法测定血清CRP水平及血液分析仪检测WBC数及N／L比值。结果 与正常组比较，阳性组和阴性组中性粒细胞CD64指数、CRP、WBC水平及N／L比值明显升高，差异均具有统计学意义（均P＜0.01）。阳性组中性粒细胞CD64指数、CRP水平及N／L比值明显高于阴性组，差异均具有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。与G－菌组比较，G＋菌组中性粒细胞CD64指数、N／L比值明显降低，差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。阳性组患者中性粒细胞CD64指数与CRP呈轻度正相关（rs＝0.377，P＜0.05）。结论 中性粒细胞CD64指数、CRP及N／L比值均为较好的血液细菌感染指标；中性粒细胞CD64指数和N／L比值可能有助于G＋菌与G－菌的鉴别。

中性粒细胞CD64指数；C－反应蛋白；白细胞；血液细菌感染

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1693）

细菌感染是威胁人类健康、导致人类死亡的主要原因之一。血液白细胞计数（WBC）、白细胞分类、C－反应蛋白（CRP）等均作为反映感染性质和严重程度的指标［1，2］。近年来研究发现，中性粒细胞表面CD64分子在细菌感染时表达升高，可作为早期细菌感染良好的检测指标［3－5］。本研究通过观察105例血液细菌培养阳性患者外周血中性粒细胞CD64指数、WBC、中性粒细胞和淋巴细胞绝对值比值（N／L）及血清CRP水平变化，探讨其在血液细菌感染中的价值。

1 对象和方法

1.1 对象 本次研究对象来自2011年5月－2014年5月本院收治的疑似血液感染患者，105例血液细菌培养阳性患者（阳性组），男性61例，女性44例，年龄46－70（57.73±11.47）岁，为不同部位2次或多次血培养阳性且为同一种细菌感染者，经鉴定革兰氏阳性（G＋）菌（G＋菌组）包括：表皮葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌及停乳链球菌等。革兰氏阴性（G－）菌（G－菌组）包括：铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、温和气单胞菌、流感嗜血杆菌及粘质沙雷菌等。66例排除血液细菌感染的发热患者（阴性组），男性39例，女性27例，年龄40－74（57.19±18.16）岁。50例健康查体人员（正常组），男性30例，女性20例，年龄55－72（平均53.75±7.65）岁。所选对象均无自身免疫性疾病、外伤及外科手术等组织损伤。经统计学分析，各组年龄及性别差异均无统计学意义，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 试剂和仪器 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的抗CD14单克隆抗体，藻红蛋白（PE）标记的抗CD64单克隆抗体，同型对照IgG1FITC／IgG2aPE双色单克隆抗体，以上试剂均购自美国BD Biosciences。血培养瓶和微生物鉴定卡片购自法国梅里埃公司。血清CRP检测试剂盒购自日本关东化学株式会社。所用仪器为：美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪、日立7180型全自动生化分析仪、Sysemex XT－1800全自动五分类细胞分析仪、法国梅里埃公司的Bace／Alert3D全自动血培养仪和VITEK2compact微生物鉴定仪。

1.3 标本采集 所有研究对象均在高热寒战时及抗生素治疗前抽取静脉血注入血培养瓶中，立刻送检，同时，采集静脉血2ml于乙二胺四乙酸K2抗凝管保存，采集后6h内处理分析。另外4ml静脉血于干燥管，静置1h，3 000r／min低温离心10min（离心半径为17.5cm），提取血清后置－70℃冰箱保存，统一测定。

1.4 检测方法 （1）中性粒细胞CD64指数检测：取2支流式试管，各取100μl抗凝全血，分别加入荧光标记CD14FITC／CD64PE，IgG1FITC／ IgG2aPE单克隆抗体各20μl，室温避光孵育20 min，加红细胞裂解液2ml，涡旋混匀，避光10min，300g／min离心5min，弃上清，用磷酸盐缓冲液清洗2次，加入含1%多聚甲醛的PBS 0.5ml。置流式细胞仪按常规进行分析。以前向角、侧向角光信号及FL1（CD14－FITC）荧光信号分别对淋巴细胞群、单核细胞群及中性粒细胞群进行设门，相应荧光标记的同型对照染色细胞为阴性对照，同时调节电压，阈值，各通道之间的荧光补偿，以淋巴细胞作为内部阴性对照，单核细胞作为内部阳性对照，分析各细胞群CD64平均荧光强度，计算中性粒细胞CD64指数。每个样品收集10000个细胞。检测前使用BD Calibrite三色Beads校准流式细胞仪，严格按照说明书操作。用cellquest软件分析结果。（2）血清CRP和WBC检测严格按照操作说明书操作。

1.5 统计学分析 采用SPSS13.0统计软件进行处理。对于正态分布的计量资料数据以均数±标准差（x—±s）表示，多组计量资料比较采用单因素方差分析F检验，多个均数之间两两比较采用q检验；偏态分布的计量资料以中位数（M）、四分位数间距（Q）表示，两组间比较采用Mann－Whitney U检验，多组间比较采用Kruskal－Wallis H检验，多组间两两比较Nemenyi检验；相关性采用Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血液细菌培养阳性患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC水平

与正常组比较，血液细菌培养阳性组和阴性组中性粒细胞CD64指数、CRP、WBC水平及N／L比值明显升高，差异均具有统计学意义（均P＜0.01）。阳性组中性粒细胞CD64指数、CRP水平及N／L比值明显高于阴性组，差异均具有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05），WBC水平变化不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 血液细菌培养阳性患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC水平（以M和Q表示）

2.2 G＋菌感染患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC水平

与G－菌组比较，G＋菌组中性粒细胞CD64指数、N／L比值明显降低，差异均具有统计学意义（P＜0.05），CRP与WBC水平虽略有减低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 G＋菌感染患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC水平（以M和Q表示）

2.3 血液细菌培养阳性患者中性粒细胞CD64指数、CRP及WBC间相关分析

结果显示，阳性组患者外周血中性粒细胞CD64指数与CRP呈正相关（P＜0.05），与其他指标间均无相关性。

3 讨论

CD64是相对分子量为72000的跨膜糖蛋白，是IgG的Fc段高亲和力受体，属免疫球蛋白超家族的成员，主要分布于单核细胞、巨噬细胞及树突细胞表面。中性粒细胞表面CD64在静息时微量表达，当机体感染或内毒素入侵时可在刺激后4－6小时立即升高［6］。大量表达的CD64可通过抗体依赖细胞介导细胞毒作用、细胞吞噬作用、免疫复合物作用及释放细胞因子等清除病原微生物［7］。本研究结果显示，阳性组和阴性组中性粒细胞CD64指数明显高于正常组，并且阳性组高于阴性组，表明当机体受到细菌感染后，中性粒细胞CD64指数开始升高，随着病情的加重，细菌由感染部位进入血液，呼吸爆发活动增强，中性粒细胞进一步活化，CD64指数增加［8］，中性粒细胞CD64指数可能有助于血液细菌感染的早期诊断［9］，本研究结果还显示，G＋菌组中性粒细胞CD64指数低于G－菌组，认为中性粒细胞CD64的活化对G－菌感染刺激更为敏感，可能与G＋菌和G－菌细胞壁结构，抗原性及毒性有关。中性粒细胞CD64指数在鉴别G＋菌与G－菌感染时可作为参考指标。

CRP是一种急性时相反应蛋白，由肝脏合成，急性感染时，CRP水平升高，6－12小时到达高峰，病情好转随机下降，是细菌感染的敏感指标［2］。WBC是人类非特异性免疫的重要组成部分，在机体免疫防御和抵抗病原菌侵袭过程中发挥重要作用［10］。本研究结果显示，阳性组和阴性组CRP、WBC及N／L比值均明显高于正常组，且阳性组CRP和N／L比值高于阴性组，表明机体受到细菌刺激后，免疫防御增强，CRP、WBC及N／L比值均增加，但CRP和N／L比值增加明显，可能随着细菌侵袭入血液，CRP和 N／L比值能更好反映细菌感染性程度，CRP和N／L比值在反映病情严重程度方面优于WBC。值得注意的是，在G＋菌组和G－菌组比较中发现，N／L比值在G＋菌组明显低于G－菌组，N／L比值不仅可作为细菌感染的检测指标，而且可能有助于血液感染中G＋菌与G－菌的鉴别。

此外，相关性分析显示，阳性组患者中性粒细胞CD64指数与CRP呈正相关，2项指标的联合检测可能对早期诊断血液感染价值更大。但中性粒细胞CD64指数测定需要昂贵仪器，技术含量高，而N／L比值测定仪器价廉、方法简单、易于操作和推广，联合检测CRP和N／L比值可能更适用于基层。

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Changes of neutrophil CD64 index，C－reaction protein and white blood cell levels in patients with blood bacterial infection

LI Chao，YUAN Bao－jun，ZHANG Shu－qing，et al.（Department of Clinical Laboratory，Kai Luan General Hospital，Tangshan063000，China）

ObjectiveTo explore the changes and significance of neutrophil CD64index，C－reaction protein（CRP），white blood cell（WBC）and ratio of neutrophil and lymphocyte（N／L）in patientis with blood bacterial infection.Methods The levels of peripheral blood neutrophil CD64index，WBC and serum CRP were determined in 105patients with positive blood culture（positive group），66patients with negative blood culture（negative group）and 50healthy controls（normal group）by Flow cytometer，hematology analyzer and immunoturbidimetry.Results Compared with healthy controls，CD64index，WBC，CRP and N／L values in positive group and negative group patients were significantly increased（all P＜0.01），CD64index，CRP and N／L values in positive group patients were significantly higher than that in negative group（P＜0.01，P＜0.05）.CD64index and N／L values in Gram positive patients were significantly decreased compared with Gram negative patients（P＜0.05）.There was a slight positive correlation between CD64index and CRP in positive group patients（rs＝0.377，P＜0.05）.Conclusion CD64index，CRP and N／L are sensitive indexes for patientis with blood bacterial infection.CD64index and N／L ratio may be useful for distinguishing between Gram positive or Gram negative infections.

neutrophil CD64index；C－reaction protein；white blood cell；blood bacterial infection

R515.3

A

李超（1976－），女，副主任技师，主要从事临床免疫学检验及研究。

2014－10－17）

1007－4287（2015）10－1693－04

＊通讯作者