GP73、AFP－L3与GPC－3联合检测在原发性肝癌诊断中的临床价值

晏文强，谢明水，刘 杨

（湖北医药学院附属随州医院检验科，湖北随州441300）

GP73、AFP－L3与GPC－3联合检测在原发性肝癌诊断中的临床价值

晏文强，谢明水，刘 杨＊

（湖北医药学院附属随州医院检验科，湖北随州441300）

目的探讨高尔基体蛋白73（GP73）、甲胎蛋白异质体3（AFP－L3）和磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（GPC－3）联合检测在原发性肝癌（PHC）诊断中的临床价值。方法 采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测原发性肝癌（PHC组，n＝34例）、肝硬化（LC组，n＝25例）和病毒性肝炎（VH组，n＝27例）患者肝组织和血清GP73、AFP－L3和GPC－3的表达水平，同期选择30例门诊正常体检者作为对照组。观察各组肝组织和血清GP73、AFP－L3和GPC－3的表达水平，并比较GP73、AFP－L3和GPC－3单一和联合检测PHC的阳性率。结果 PHC组肝组织及血清AFP－L3、GP73和GPC－3表达水平均明显高于其他各组（P＜0.05），3项标志物（AFP－L3、GP73和GPC－3）单项检测PHC的阳性率分别为70.6%、76.5%、79.4%，两两指标联合检测PHC的阳性率可至82.3%、85.3%和88.2%，3项指标联合检测PHC的阳性率可高达91.2%，明显高于单项检测率（P＜0.05）。结论 AFP－L3、GP73和GPC－3联合检测可提高PHC阳性率，对早期PHC诊断具有重要的临床意义。

高尔基体蛋白73；甲胎蛋白异质体3；磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3；原发性肝癌；病毒性肝炎；肝硬化

（Chin J Lab Diagn，2015，19：1651）

原发性肝癌（Primary hepatic carcinoma，PHC）是临床较为常见的肿瘤性疾病，此疾病发展迅速，易发生远处转移，多数患者医院就诊时已发展至疾病晚期阶段，丧失治疗的最佳时机。目前临床多选择实验室检测血清甲胎蛋白（Alpha fetoprotein，AFP）表达水平，以及联合超声探查肝脏病理改变等方法早期筛查PHC，但上述方法仍无法准确区别肝硬化结节与小肝癌，容易导致PHC误诊和漏诊等情况发生［1］。目前有研究认为［2］，部分PHC患者由于肝癌细胞分化程度极差血清AFP表达水平呈较低水平，而部分慢性肝病患者由于肝细胞呈代偿性增殖使得血清AFP明显升高，上述情况均导致AFP检测假阳性和假阴性等情况的发生，故单一采用AFP诊断PHC的灵敏性较差。因此本研究拟探讨高尔基体蛋白73（GP73）、甲胎蛋白异质体3（AFP－L3）和磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（GPC－3）联合检测在PHC诊断中的临床价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择湖北医药学院附属随州医院消化科、感染科及肿瘤科2010年7月至2013年7月期间住院治疗的86例肝脏疾病患者作为研究对象，其中男50例，女36例，年龄范围为34－60岁，平均年龄为（45.9±12.6）岁，根据肝脏疾病的类型不同将上述患者共分为3组，PHC组（原发性肝癌，n＝34例）、LC组（肝硬化，n＝25例）和VH组（病毒性肝炎，n＝27例），同期选择30例在体检中心检查者作为研究对照组，其中男17例，女13例，年龄范围为36－61岁，平均年龄为（47.5±11.2）岁。四组在各方面比较均无显著性差异（P＞0.05）。

1.2 肝脏病理组织来源

病毒性肝炎组的肝组织源自部分拟行抗病毒治疗的患者，肝硬化组的肝组织源自部分为确诊代偿期肝硬化患者，两组标本均为肝组织穿刺病理检查而获得，肝癌组织为手术切除肿瘤组织所获得，患者均签署知情同意书，本研究已通过院伦理委员会批准。

1.3 实验试剂及仪器

AFP－L3亲和吸附离心管购自北京热景生物技术有限公司，GP73蛋白检测试剂盒购自上海信裕生物科技有限公司，ELX800酶标仪购自上海天呈医流科技股份有限公司，全自动免疫分析仪购自广州华粤行仪器有限公司，GPC3蛋白酶联免疫吸附检测试剂盒购自美国BioMosaics公司，AFP－L3、GP73及GPC3抗体及配套试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.4 血清检测方法及阳性标准

根据实验试剂盒操作说明书首先洗脱AFPL3，然后检测血清AFP－L3和AFP表达水平，计算AFP－L3／AFP的比值，AFP－L3（%）＞15%视为阳性结果；采用ELISA法检测血清GP73、GPC3表达水平，GP73＞100μg／ml、GPC3＞400ng／L均视为阳性结果。

1.5 免疫组化检测

采用免疫组化法半定量检测AFP－L3、GP73和GPC3蛋白的表达水平，细胞质出现棕黄色颗粒视为阳性细胞。采用相应图像分析软件对每张组织切片进行分析，随机选取5个视野，然后取其平均数值作为最终检查结果。

1.6 统计学分析

本研究数据资料均选择SPSS13.0统计软件予以分析，计量比较采取t检验，以P＜0.05表示有显著性差异。

2 结果

2.1 各组肝组织AFP－L3、GP73和GPC3表达水平比较

PHC组肝组织中AFP－L3、GP73和GPC3表达水平明显高于其他组（P＜0.05），见图A－C及表1。

表1 各组肝组织AFP－L3、GP73和GPC3表达水平比较

2.2 各组血清AFP－L3、GP73和GPC3表达水平比较

PHC组血清AFP－L3、GP73和GPC3表达水平明显高于其他三组（P＜0.05），见表2。

表2 各组血清AFP－L3、GP73和GPC3表达水平比较

2.3 AFP－L3、GP73和GPC－3单一和联合检测PHC阳性率比较

3项标志物（AFP－L3、GP73和GPC－3）单项检测PHC的阳性率分别为70.6%、76.5%、79.4%，AFPL3、GP73和GPC－3单项检测PHC的特异性分别为90.0%，86.7%，83.3%，两两指标联合检测PHC的阳性率可提高至82.3%、85.3%和88.2%，两两指标联合检测的特异性分别为80.0%，76.7%，73.3%，3项指标联合检测PHC的阳性率可高达91.2%，明显高于单项检测率（P＜0.05），见表3。

3 讨论

作为临床预测PHC疾病发生的重要实验室指标，AFP－L3已得到美国FDA的认可逐渐应用于肝癌疾病的早期筛查方面［3－6］。有较多临床研究也证实，AFP－L3在早期诊断PHC和良恶性肝硬化结节鉴别诊断方面发挥着重要的作用［7，8］，且相关研究还发现，肝脏出现异常病理改变之前，AFP－L3%即出现明显升高表现［9］。还有部分研究结果实，AFPL3在早期诊断PHC和良恶性肝硬化结节鉴别诊断方面发挥着重要的作用［7，8］，且相关研究还发现，肝脏出现异常病理改变之前，AFP－L3%即出现明显升高表现［9］。还有部分研究结果显示，PHC患者的血清AFP－L3表达阳性率可高达60%，而非PHC的慢性肝脏疾病患者其血清AFP－L3表达阳性率小于5%［10］。部分肝癌细胞分化程度不佳的PHC患者AFP－L3%显著性升高，而在慢性肝脏疾病患者中则无明显改变［3］，故认为AFP－L3可用于鉴别诊断血清AFP水平过高的慢性肝脏疾病以及PHC。有研究人员发现［5，6］，经积极抗肿瘤治疗且AFP－L3%明显降低的PHC患者，其3年生存率和治疗后复发率均明显高于AFP－L3%未出现明显降低的PHC患者，故AFP－L3也可作为评估抗肿瘤治疗效果和预测患者预后情况的有效实验室指标。Yoshida等研究人员将AFP－L3（%）＞15%视为阳性结果［7］，发现AFP－L3与PHC病情分期及肝癌直径等有着密切的相关性，故本研究也将其作为阳性诊断标准。

表3 AFP－L3、GP73和GPC－3单一和联合检测PHC阳性率比较

有研究认为GP73与PHC有着极为密切的相关性，在动物实验中还发现，肝癌模型动物的血清GP73表达水平明显高于其他动物［8］。GP73临床诊断慢性肝脏疾病的特异性和灵敏性可高达74%和95%，其诊断价值明显优于AFP等其他临床常用指标［9］。还有临床研究也证实，PHC患者血清GP73表达水平明显高于其他各组肝脏患者及正常对照组，其诊断特异性和敏感性可达到69%和75%［11］。

GPC3则是近些年发现的肝癌特异性标志［12，13］。国外相关研究发现［14］，HCC患者血清中可检测出可溶性GPC3的表达，其表达水平明显高于肝硬化患者和正常对照组，检测的敏感度也明显高于AFP。GPC3诊断直径＜3cm肝癌患者可高达76%的阳性率，而在肝硬化结节中表达水平极低，此指标有助于鉴别良恶性肿瘤病变［15，16］。GPC－3在HCC患者中表达水平较高的原因可能是肝细胞恶性病变使得胚胎表达GPC－3的现象重复出现；或参与HCC中上调生长因子及其受体间的相互作用，最终导致肝细胞发生恶性病变［17，18］，GPC－3作为特异性的HCC标志物已得到研究人员的广泛认同。

本研究结果显示，AFP－L3、GP73和GPC－3在PHC组患者肝组织及血清中的表达水平均明显高于其他各组（P＜0.05），3项标志物（AFP－L3、GP73和GPC－3）单项检测PHC的阳性率分别为70.6%、76.5%、79.4%，两两指标联合检测PHC的阳性率可提高至82.3%、85.3%和88.2%，3项指标联合检测PHC的阳性率可高达91.2%，明显高于单项检测率（P＜0.05）。综上所述，AFP－L3、GP73和GPC－3联合检测可明显提高PHC的诊断阳性率，对早期诊断PHC具有十分重要的临床价值。

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The clinical value of GP73，AFP－L3 combined GPC－3 detection with in the diagnosis of primary hepatic carcinoma

YAN Wen－qiang，XIE Ming－shui，LIU Yang.
（Department of Laboratory，the Central Hospital of Suizhou Affiliated to Medical College of Hubei，Suizhou441300，China）

ObjectiveTo investigate the clinical value of Golgi protein 73（GP73），alpha fetoprotein heterogeneity 3（AFP－L3）combined Glypican－3（GPC－3）detection with in the diagnosis of primary hepatic carcinoma.Methods The expression levels of GP73，AFP－L3and GPC－3in liver tissue and serum of primary hepatic carcinoma（group PHC，n＝34），liver cirrhosis（group LC，n＝25）and viral hepatitis（group VH，n＝27）patients were detected by immunohistochemical and enzyme immunoassay.At the same period，30cases of normal examination were selected as control group.The expression levels of GP73，AFP－L3and GPC－3in liver tissue and serum of all groups were observed，and compared the positive rate of GP73，AFP－L3，GPC－3single detection and combined detection to primary hepatic carcinoma.Results The expression levels of GP73，AFP－L3and GPC－3in the liver tissue and serum of PHC group were significantly higher than that of other groups（P＜0.05）.The single test positive rate of AFP－L3，GP73and GPC－3were 70.6%，76.5%，79.4%to PHC，two indicators combined detection of PHC were 82.3%，85.3%and 88.2%，3indicators combined detection of PHC was 91.2%.The rate of 3indicators combined detection was higher than that of single indicator（P＜0.05）.Conclusion The combined detection of AFP－L3，GP73and GPC－3could improve the positive rate of PHC.It had an important clinical significance for early diagnosis of PHC.

Golgi protein 73；Alpha fetoprotein heterogeneity 3；Glypican－3；Primary hepatic carcinoma；Hepatitis B virus；Liver cirrhosis

R735.7

A

2014－08－23）

1007－4287（2015）10－1651－04

吴阶平医学基金会（LDWMF－SY－2011C011）

＊通讯作者