5 种尿沉渣染色方法的效果比较

严雪梅，刘 宝，夏曙华

(1.四川大学生命科学学院，四川成都 610064;2.贵阳中医学院第一附属医院，贵州贵阳 550001;3.贵州医科大学附院微生物免疫科，贵州 贵阳 550004;4.贵州医科大学 医学检验学院，贵州 贵阳 550004)

尿沉渣染色显微镜检查是目前辅助临床医生诊断泌尿系统疾病的常规方法，能识别尿液有形成分，提高病理成分的鉴别［1－3］。由于尿沉渣中各种成分的多样性、复杂性、易变性及各种染料的亲和率不同，使尿沉渣各种有形成分在不同的染色方法下所表现的特点也各不同，因此根据临床需要合理选择染色方法，具有重要的临床意义［4－8］。本研究采用美国DiaSys R/S500 尿沉渣分析工作站筛选180 例尿液异常标本，采用常见的5 种尿沉渣染色方法进行检查，比较5 种方法的染色效果，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器、试剂与标本

美国DiaSys R/S500 尿沉渣分析工作站，带图像采集仪的OLYPUMS 显微镜，水平离心机，10 mL尿沉渣离心管。BASO 尿沉渣Sternheimer－Malbin改良染色液(S–M 染液，批号408111);Sternheimer 染色液(S 染液，批号409111);自配的Berhe－Muhlberg 染色液(B－M 染液)、阿利新兰－中性红染色液(阿－中染液)和瑞氏－姬姆萨复合染色液(瑞－姬染液)。所用标本来源于美国DiaSys R/S500 尿沉渣分析工作站筛选180 例尿液异常标本。

1.2 方法

1.2.1 标本制备 取异常尿液标本10 mL 置入尿沉渣离心管中，400 g，离心5min，弃上清液，保留下层0.2 mL 尿沉渣充分混匀，进行尿沉渣染色条件的选择、定性及半定量试验。

1.2.2 染色条件的选择 随机取60 例离心后的尿沉渣异常标本，经多次试验，选择出不同染色时间、不同尿液与染液的比例，进行染色效果的比较。S－M、S、阿－中及B－M 染色法按尿液∶染液比例为3 ∶1、2 ∶1、1 ∶1、1 ∶2 及1∶3，瑞－姬法按尿液∶染液比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4 及1∶5。

1.2.3 定性及半定量试验［2］取120 例离心后的尿沉渣异常标本，按筛选出的最佳染色条件对其进行染色，镜检，采图;根据尿沉渣染色定性、半定量结果评判标准对结果进行判定。

1.3 统计处理

采用SPSS 17.0 统计软件进行统计分析。半定量结果采用多个样本比较的秩和检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 染色时间

结果显示，S－M、S、阿－中染色法最佳时间为2 ～5 min，B－M 染色法Ⅰ液最佳时间为1 ～2 min、Ⅱ液为2 ～3 min，瑞－姬法Ⅰ液最佳时间为1 min、Ⅱ液为10 ～15min。见表1。

表1 5 种尿沉渣染色方法不同染色时间的效果比较Tab.1 The effects of different dyeing time of five kinds of dyeing methods

2.2 尿液与染液比例

根据尿液与染液不同比例进行染色，筛选出S－M、S、阿－中、B－M、瑞－姬5 种染色法的最佳尿液与染液比例分别为:1∶1、2∶1、1∶2 ～1∶3、1∶2及1∶3 ～1∶5。

2.3 定性结果

镜下可见S 染液染色背景清晰或有少量杂质分布，有形成分结构清晰易辨别(图1A);S－M 染液染色背景的清晰度、杂质含量与S 法的染色效果相近，但有形成分与背景颜色的对比度和有形成分核、浆等层次结构着色情况不如S 法鲜明(图1B);B－M 染液染色背景较清晰，但有形成分结构模糊，识别困难，细菌不着色(图1C);阿－中染液染色背景杂质较多，不清晰，有形成分结构模糊，不易分类(图1D);瑞－姬染液染色背景清晰，杂质较多，有形成分与背景颜色相近，结构模糊(图1E)。

2.4 半定量结果

经秩和检验，S 与S－M 染色法之间差异无统计学意义(P ＞0.05)，B－M、阿－中及瑞－姬染色法间差异无统计学意义(P ＞0.05)，而S、S－M染色法与B－M、阿－中染液及瑞－姬染色法比较，差异有统计学意义(P ＜0.05)，见表2。

表2 5 种尿沉渣染色方法的半定量结果(n)Tab.2 The semi quantitative results of urinary sediment stained by five kinds of dyeing methods

图1 尿沉渣5 种染色方法染色效果(×400)Fig.1 Staining effect of five kinds of dyeing methods

3 讨论

尿沉渣染色显微镜检查有助于临床医生对患者泌尿系统疾病的诊断，由于尿沉渣中有形成分的多样性和对染料亲和力的不同，导致尿沉渣在不同的染色方法下所表现的特点也各不相同，因此选择较好的染色方法至关重要［1－4］。本文选择临床常用的5 种尿沉渣染色方法进行比较，发现S－M、S、阿－中染色法的最佳染色时间为2 ～5 min，阿－中染色法染色5 min 后有大量褐色集结成块的杂质逐渐覆盖在管型或其它有形成分上，致使识别和分类困难;B－M 染色法，背景较清晰，但有形成分结构模糊，识别困难，细菌不着色，与文献［9］报告一致;B－M、瑞－姬染色法的最佳染色时间与文献［4］相同。本研究中S－M、S、阿－中、B－M、瑞－姬染色法尿液与染液的最佳染色比例分别为:1∶1;2∶1;1∶2 ～1∶3;1∶2;1∶3 ～1∶5，此类研究未见报道。

从染色效果来看，5 种染色方法中，以S 染色法染色效果最佳，背景清晰，有形成分和背景颜色对比鲜明，各有形成分着色层次分明，结构清晰，易于识别，并可进行进一步的分类;其次为S－M 染色法，而B－M，瑞－姬和阿－中3 种染色法，染色效果相对较差。半定量结果经秩和检验，S 与SM 染色法之间差异无统计学意义(P ＞0.05);BM、阿－中及瑞－姬染色法间差异无统计学意义(P＞0.05);而S、S－M 染色法与B－M、阿－中染液及瑞－姬染色法比较，差异有统计学意义(P ＜0.05)。以上研究结果均说明BASO 尿沉渣S－M染色法、S 染色法染色效果和方法最佳，尤以S 染色法染色效果更佳，更适合于临床尿沉渣染色显微镜的检查和应用。

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