HPLC法测定姜蒲清眩片中丹酚酸B含量研究

王 晗，陈云婷，杨希凡，王中彦

(1.吉林省食品药品认证中心，吉林 长春 130062;2.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110015)



HPLC法测定姜蒲清眩片中丹酚酸B含量研究

王 晗1，陈云婷1，杨希凡1，王中彦2*

(1.吉林省食品药品认证中心，吉林 长春 130062;2.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110015)

目的：采用高效液相色谱( HPLC)法测定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量。方法：色谱柱为Linksil C18柱 (4.6 mm×200 mm，5μm)，流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)，流速为1mL·min-1，柱温为30℃，检测波长286nm。结果：丹酚酸B在8.69～139.00 μg·mL-1范围内线性关系良好，r=0.9995，平均加样回收率为100.4%，RSD为1.13%。结论：采用HPLC法可测定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量，样品处理方法简单，测定方法准确、可靠,专属性强。

姜蒲清眩片；HPLC；丹酚酸B

姜蒲清眩片是源于中药经验方研制的复方新药，主要用于治疗糖尿病视网膜病变。该复方中药成分复杂，质量难以控制，其中丹酚酸B为主要有效成分。本研究建立HPLC法测定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量，方法准确可靠，易于操作，可用于蒲清眩片的质量控制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

岛津LC-10AT高效液相色谱仪，HW-2000工作站，SPD-10AV检测器；KQ-4000KDE型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FA1104电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)。

1.2 材料

丹酚酸B对照品(批号：111562-201009)，购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈(色谱纯，山东禹王实业有限公司)；甲酸(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；姜蒲清眩片(沈阳药科大学，批号：110430、110501、110502)。

2 方法与结果

2.1 检测波长的选择

称取丹酚酸B对照品适量，以适量75%的甲醇溶液定容，制备对照品溶液，行空白溶剂做对照，采用紫外可见分光光度法在200～600nm波长范围内扫描，以确定最大吸收波长。结果见图1。

由图1可以看出，丹酚酸B在287nm处有最大吸收，与《中国药典》中规定的286nm相差不大，故确定286nm为检测波长。

2.2 色谱条件[1]

色谱柱为Linksil C18(4.6 mm×200mm，5μm)；甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流速1mL·min-1；柱温30℃；检测波长286nm。

图1 丹酚酸B紫外吸收光谱

2.3 丹酚酸B对照品溶液的制备

取丹酚酸B对照品适量，加75%的甲醇稀释制备浓度为347.52μg/mL的对照品储备液，取储备液2mL，置于10mL容量瓶中，加75%的甲醇稀释制备69.5μg/mL的对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备

取姜蒲清眩片10片，研成细粉，精密称取细粉约0.25g，置于具塞锥形瓶中，加70%的乙醇25mL，超声处理30min，放冷后加70%的乙醇补足减失重量，滤过，取续滤液进样。

2.5 空白干扰试验

按姜蒲清眩片的制备工艺制备无丹参的阴性制剂，并按供试品溶液的制备方法处理阴性制剂作为阴性对照溶液，精密吸取阴性对照液、丹酚酸B对照品溶液和供试品溶液各10μL，进样。

结果表明：阴性对照溶液在丹酚酸B对照溶液出峰处无色谱峰，不会干扰供试品中丹酚酸B的检测。见图2。

图2 空白干扰试验HPLC色谱

2.6 线性关系考察

精密量取丹酚酸B对照品储备液2.5mL置于100mL容量瓶，取2.5mL置于50 mL容量瓶，取2.5、5.0、7.5、10.0mL置于25mL容量瓶中，加75%的甲醇稀释并定容，配制浓度分别为8.69、17.38、34.75、69.50、104.25、139.00μg/mL系列溶液，进样。

以峰面积(Y)对质量浓度(X)进行线性回归，得到回归方程：Y=5 567.7X+742.19，r=0.999 5。结果表明，丹酚酸B在8.69～139.00μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。结果见表1。

表1 线性关系考察结果

2.7 精密度试验

取供试品溶液，连续进样6次，记录峰面积，表明精密度良好。结果见表2。

2.8 重复性考察

取同一批号供试品粉末6份，按供试品溶液的制备方法处理后进样，计算含量，平均结果为4.113mg·g-1，RSD为0.87%，说明该方法重复性良好。

表2 精密度考察

2.9 溶液稳定性

取供试品溶液，室温下放置，分别在0、4、6、8、10、12h进样10μL，记录峰面积。结果表明，供试品溶液在室温条件下12h内稳定性良好。结果见表3。

表3 溶液中稳定性考察

2.10 加样回收率

精密称取己知含量的供试品粉末9份，分别加入丹酚酸B对照品溶液适量，制备高、中、低三组浓度样品，按“2.4”项下方法处理后进样测定，计算回收率。结果见表4。

表4 加样回收率

2.11 样品含量测定

对3批姜蒲清眩片样品进行测定，结果见表5。

表5 样品测定结果 (n=3)

3 讨论

本实验比较了3种品牌的色谱柱：Linksil C18(4.6mm×200mm，5μm)、Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)、 Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)，结果表明供试品在3种色谱柱上均可较好地分离，表明该方法耐用性良好。在提取方法上，本实验比较乙醇回流提取和超声提取方法，结果无显著差异，因超声提取操作简便，故选用超声提取方法。

本研究建立HPLC法测定姜蒲清眩片中丹酚酸B的含量，准确可靠，专属性强，易于操作，可用于蒲清眩片的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2009:71.

(责任编辑：李岚春)

2015-07-14

王晗(1986-)，男，硕士，吉林省食品药品认证中心药师，研究方向为药剂学及药学管理。

王中彦(1965-)，沈阳药科大学副教授,硕士生导师，研究方向为微粒分散药物制剂与中药缓控释给药体系设计。E-mail：wangzhongyanlab@163.com

R286

A

1673-2197(2015)20-0030-02

10.11954/ytctyy.201520013