生三七与蒸制熟三七在复方丹参配伍中部分药理作用的比较研究

李春梅 杨瑞 周新惠 却翎 毛晓健 赵荣华

三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen 的干燥根，是一种常用的的名贵中药，具有散瘀止血，消肿定痛之功效［1］11。临床上有生三七、熟三七两种饮片。经清蒸后的三七称为熟三七，熟三七长于滋补，用于身体虚弱、气血不足的患者。传统中医及民间对三七均有“生撵熟补”之说，即认为生三七化瘀止血作用较强，而熟三七以滋补力胜［2］。

中药有别于天然药物的一个主要方面就是“加工炮制”后应用，而中医的一大特点就是辨证施治和复方配伍。在遣药组方时又非常讲究“药之生熟”，生熟效异，用法不同，各有其功。本实验拟探讨生、熟三七在复方配伍中功效有无差异，为编制《三七生、熟异用饮片临床鉴别手册》提供实验依据。本实验选择三七常用的复方制剂:复方丹参片。组方中丹参、三七、冰片三味药合用，具有活血化瘀，理气止痛之功效，是临床治疗胸痹之胸闷、心前区刺痛，冠心病心绞痛见上述证候者的常用中成药［1］904-905。其中的三七分别以生三七和蒸制三七配入复方丹参中，以观察生、熟三七在复方丹参中配伍后对小鼠失血性贫血、环磷酰胺所致的贫血、小鼠耳廓微循环、全血切变率及主要免疫器官的影响，现报道如下。

1 实验材料

1.1 动物

昆明种清洁级健康小白鼠，18 ～22 g，雌雄各半。购自昆明医科大学实验动物中心，动物合格证号:SCXK(20120008)。

1.2 仪器与试剂

北京众驰ZL1000P 血液流变仪(北京众驰伟业科技发展有限公司)，URIT-2900 全自动血细胞分析仪(桂林优利特医疗电子有限公司)，精密电子天平(型号JA2003 SHP07003，上海恒平科学仪器有限公司生产)，一次性使用含有乙二胺四乙酸二抗凝剂(EDTAK2)采血管(规格:3 mL，湖南省浏阳市医用仪具厂，生产批号:120812)。

三七(云南文山苗乡三七实业有限公司，批号20120920)，经云南中医学院炮制中心赵荣华教授鉴定，为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen 的干燥主根，商品规格为60 头。丹参(云南省药材公司延寿堂经营部，产地:河南，为唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎)、冰片(云南省药材公司延寿堂经营部)，由省药材公司吴应华副主任药师鉴定。

注射用环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，生产批号:12041025);复方丹参片(云南白药集团股份有限公司，生产批号:ZD12002);复方阿胶浆口服液(山东东阿阿胶股份有限公司，生产批号:1204512)。

1.3 实验方法

1.3.1 生三七复方丹参、蒸制熟三七复方丹参制备方法 (1)生、蒸制熟三七粉制备:将生三七洗净，润透，切成0.3 cm 左右厚薄片，晾干，混合均匀，分成二等份。取其中一份用粉碎机粉碎，过80 目筛;另一份置于蒸笼中隔水蒸6 小时至熟透，60℃烘干并粉碎，过80 目筛。(2)丹参稠膏制备［1］527:按药典方法提取，50℃减压浓缩至稠膏(约100 mL);均分成两分。(3)生三七制复方丹参(简称生丹参，以下均同):取一份丹参稠膏加入31.33 g 生三七粉，混合均匀后置于70℃鼓风干燥箱中干燥至恒重(前后两次称重之差小于0.3 mg)得63.28 g，再加入冰片1.77 g 后粉碎并过100 目筛后密封置于干燥器中，每次使用前配成需要浓度的混悬液(其中高剂量浓度为1.11×10-1g/mL;低剂量浓度为0.37 ×10-1g/mL)。熟三七制复方丹参(简称熟丹参，以下均同)的制法同上，把生三七粉替换成熟三七粉即可。

1.3.2 失血性贫血小鼠的实验方法 取小鼠72 只随机分为6 组:生三七制复方丹参高、低剂量组，蒸制熟三七复方丹参高、低剂量组，阳性对照组、空白对照组。断尾取血法取血约0.2 mL/10 g，EDTAK2抗凝，全自动血细胞分析仪检测各组小鼠血常规的正常值(0 小时)。失血后24 小时再取血测定血常规作为失血后数值(24 小时)。确认贫血后开始给药:每天灌胃1 次，灌胃给药均为0.1 mL/10 g，连续给药12 天。于末次给药后30 分钟，对所有小鼠摘眼球法取血，测各组小鼠血常规作为给药后数值(12 天)。将取血后小鼠脱臼处死，快速摘取脾脏、肾上腺、胸腺。用精密电子天平分别称各脏器的鲜重，计算脏器指数［脏器指数=脏器质量(mg)/体质量(g)］［3］1202。

1.3.3 环磷酰胺造成的小鼠贫血的实验方法 取小鼠84 只随机分为7 组:生三七制复方丹参高、低剂量组，蒸制熟三七复方丹参高、低剂量组，阳性对照组、模型组、空白对照组，每组12 只。在给药的前3 天除空白对照组以0.1 mL/10 g 腹腔注射生理盐水外，其余各组腹腔注射环磷酰胺(250 mg/kg)。每天灌胃1 次，连续给药7 天。第7 天末次给药后30 分钟，用摘眼球法对所有小鼠取血，EDTAK2抗凝，再次检测小鼠血常规，将小鼠脱臼处死，快速摘取脾脏，肾上腺，胸腺。用精密电子天平分别称各脏器的鲜重，并计算脏器指数［3］1055。

1.3.4 小鼠微循环障碍的实验方法 取小鼠72 只随机分成6 组:生三七制复方丹参高、低剂量组，蒸制熟三七复方丹参高、低剂量组，复方阿胶浆组、空白对照组，每组12 只。每天灌胃1 次，连续给药7天。于末次给药后 30 分钟开始造模，按0.1 mL/10 g尾静脉注射6%高分子右旋糖苷(40 万单位)后放入冰水中2 分钟，取出，肌内注射水合氯醛溶液0.03 mL/10 g 麻醉，以医用胶布粘贴去耳廓毛，将小鼠腹向下固定在观察台上，调节特制有机玻璃耳托高度，使耳廓平展在耳托上，滴加少许香柏油于耳托和耳廓表面，置显微镜载物台上，在透射光下(冷光源)，用10 ×40 倍镜下观察小鼠耳廓微循环并用显微测微尺分别测录在给药后10 分钟、20 分钟、30 分钟时耳廓微循环细动脉(A)、细静脉(V)血管口径、毛细血管开放数量(毛细血管网交点记数法)，将小鼠从冰水中取出后，用摘眼球法取血，用全自动血液流变仪测小鼠全血液切变率［3］534-537。

1.4 统计学处理

2 实验结果

2.1 对失血性贫血小鼠的影响

造模前后数据两两比较用配对t 检验法，多组之间的两两比较采用LSD 法。采用失血后各组小鼠红细胞总数、血红蛋白含量、白细胞总数均显著降低。连续给药12 天后，红细胞总数、血红蛋白含量、白细胞总数均有不同程度的升高;与空白组比较，生、蒸制熟三七复方丹参低剂量组均能极其显著升高小鼠的红细胞总数(P ＜0.001);生、蒸制熟三七复方丹参高剂量组升高小鼠的红细胞总数，但不显著;生、蒸制熟三七复方丹参高低剂量组均能极其显著升高小鼠的血红蛋白含量(P ＜0.001);生三七制复方丹参高低剂量组及蒸制熟三七复方丹参高剂量组均能极显著升高小鼠的白细胞总数(P ＜0.01)，具体见表1。

表1 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对失血性贫血小鼠血常规指标的影响(±s)

表1 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对失血性贫血小鼠血常规指标的影响(±s)

注:与空白组比较aP ＜0.05;与复方阿胶浆组比较bP ＜0.05。

组别 红细胞(×1012/L) 血红蛋白(g ∕L) 白细胞(×109 ∕L)空白组0 小时 6.74 ±0.88 129.75 ±14.89 6.73 ±1.30 24 小时 4.67 ±0.32 94.58 ±5.90 5.43 ±1.47 12 天 5.79 ±0.59b 91.26 ±4.25b 4.69 ±1.15b复方阿胶浆组0 小时 6.15 ±0.62 125.57 ±13.75 6.79 ±2.04 24 小时 4.27 ±0.63 89.17 ±10.60 6.85 ±1.57 12 天 6.16 ±0.35a 128.57 ±7.57a 6.60 ±1.09a生三七制复方丹参高剂量组0 小时 6.45 ±0.77 130.38 ±19.40 5.85 ±1.44 24 小时 4.64 ±0.94 90 ±18.17 5.36 ±1.26 12 天 5.92 ±0.66 119.09 ±10.61a 6.25 ±0.95a生三七制复方丹参低剂量组0 小时 6.43 ±0.89 130.21 ±5.91 6.38 ±1.16 24 小时 5.00 ±0.54 99 ±14.82 5.3 ±1.22 12 天 6.56 ±0.52 ab 137.85 ±5.67a 6.01 ±1.21a蒸制熟三七复方丹参高剂量组0 小时 6.59 ±0.99 127.43 ±18.09 6.71 ±2.72 24 小时 4.72 ±0.30 92.67 ±9.9 5.7 ±0.77 12 天 6.14 ±0.73 123.18 ±10.90a 6.31 ±1.48a蒸制熟三七复方丹参低剂量组0 小时 6.3 ±1.06 121.43 ±23.2 6.31 ±1.48 24 小时 4.71 ±0.66 93.44 ±18.66 5.12 ±1.02 12 天 6.47 ±0.47a 128.08 ±12.16a 5.72 ±1.02 a

各给药组对胸腺指数及肾上腺指数影响不显著，生三七制复方丹参高剂量组能显著增加失血性小鼠脾脏指数(P ＜0.05)，复方阿胶浆组能显著增加失血性小鼠胸腺指数(P ＜0.05)，具体见表2。

表2 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对失血性小鼠脏器重量的影响(±s)

表2 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对失血性小鼠脏器重量的影响(±s)

注:与空白组比较aP ＜0.05;与复方阿胶浆组比较bP ＜0.05。

组别 胸腺(×10 -3mg/g) 脾脏(×10 -3mg/g) 肾上腺(×10 -3mg/g)空白组 2.62 ±0.67b 6.40 ±0.78 0.25 ±0.07复方阿胶浆组 3.22 ±0.66a 7.22 ±1.74 0.26 ±0.07生三七制复方丹参高剂量组 7.74 ±1.90 7.74 ±1.90a 0.24 ±0.06生三七制复方丹参低剂量组 6.32 ±1.87 6.32 ±1.87 0.25 ±0.09蒸制熟三七复方丹参高剂组 6.38 ±1.91 6.38 ±1.91 0.21 ±0.06蒸制熟三七复方丹参低剂组 4.95 ±1.23 4.95 ±1.23ab 0.23 ±0.06

2.2 对环磷酰胺致血虚小鼠的影响

多组之间的两两比较采用LSD 法。造模后各组小鼠白细胞数均显著降低，连续给药12 天后，均有不同程度的升高，与模型组比较，各组均能显著升高小鼠白细胞数(P ＜0.05)。生三七制复方丹参高、低剂量组及蒸制熟三七复方丹参高剂量组能其显著升高小鼠白细胞数(P ＜0.05)，蒸制熟三七复方丹参高剂量组优于生三七制复方丹参。各给药组均能升高环磷酰胺造成的血红蛋白含量的减少，但只有蒸制熟三七复方丹参高、低剂量组有显著性差异。与空白组比较，各给药组均能极显著升高失血性贫血小鼠的红细胞数(P ＜0.05)，其中以生三七制复方丹参高剂量组极其显著(P ＜0.001)，具体见表3。

表3 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对环磷酰胺所致血虚小鼠血常规的影响(±s)

表3 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对环磷酰胺所致血虚小鼠血常规的影响(±s)

注:与正常对照组比较aP ＜0.05;与复方阿胶浆组比较bP ＜0.05;与模型组比较cP ＜0.05。

组别 红细胞(×1012/L) 血红蛋白(g ∕L) 白细胞(×109 ∕L)正常对照组 7.34 ±0.55c 148.33 ±14.60b 7.43 ±1.29 b模型对照组 5.74 ±0.67ab 119.78 ±26.58a 4.26 ±0.95ab复方阿胶浆 6.82 ±0.80c 130.63 ±25.08a 6.16 ±1.10c生三七制复方丹参高剂量组 7.01 ±1.01c 131.57 ±23.12a 5.41 ±1.62ac生三七制复方丹参低剂量组 6.53 ±1.99ac 131.17 ±4.54a 5.55 ±1.74ac蒸制熟三七复方丹参高剂量组 6.42 ±0.64ac 142.5 ±20.08c 5.89 ±1.21ac蒸制熟三七复方丹参低剂量组 6.57 ±0.63ac 134.5 ±17.13c 5.17 ±1.05 a

经注射环磷酰胺后模型组胸腺指数、肾上腺指数均显著低于正常对照组(P ＜0.01)。连续给药7天后，蒸制熟三七复方丹参组有升高胸腺指数的趋势，但作用不显著;各给药组都有升高脾脏指数的趋势，但只有生三七制复方丹参低剂量组及蒸制熟三七复方丹参高剂量组有显著差异;各给药组对小鼠肾上腺指数无影响，详见表4。

表4 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对环磷酰胺所致血虚小鼠脏器指数的影响(±s)

表4 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对环磷酰胺所致血虚小鼠脏器指数的影响(±s)

注:与空白组比较aP ＜0.05;与模型组比较cP ＜0.05;与复方阿胶浆组比较bP ＜0.05。

组别 胸腺(×10 -3mg/g) 脾脏(×10 -3mg/g) 肾上腺(×10 -3mg/g)正常对照组 3.33 ±0.72b 5.20 ±0.84 0.27 ±0.07模型对照组 1.63 ±0.44a 5.45 ±0.78 0.23 ±0.05复方阿胶浆 1.36 ±0.28a 5.94 ±0.68 0.25 ±0.04生三七制复方丹参高剂量组 1.17 ±0.29ac 5.79 ±0.51 0.28 ±0.04生三七制复方丹参低剂量组 0.98 ±0.22ac 6.39 ±0.85ac 0.30 ±0.07蒸制熟三七复方丹参高剂量组 1.58 ±0.32a 6.85 ±1.47abc 0.26 ±0.04蒸制熟三七复方丹参低剂量组 1.78 ±0.38a 6.17 ±0.90a 0.25 ±0.08

2.3 对小鼠微循环障碍的影响

各给药组对小鼠耳廓微循环动脉口径影响不明显，生三七制复方丹参对静脉口径10 分钟、20 分钟及30 分钟时影响都显著，但蒸制熟三七复方丹参只在10 分钟时影响显著，20 分钟及30 分钟时影响不显著;说明生三七制复方丹参效果优于蒸制熟三七复方丹参，且作用时间更持久，详见表5。

表5 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对小鼠微循环障碍的影响(±s)

表5 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对小鼠微循环障碍的影响(±s)

注:与空白组比较aP ＜0.05;与复方阿胶浆组比较bP ＜0.05。

组别 动脉口径(mm) 静脉口径(mm) 毛细血管开放数(条)空白组10 分钟 0.19 ±0.03 0.34 ±0.06 4.17 ±0.84 20 分钟 0.19 ±0.04 0.36 ±0.06 4.25 ±0.62 30 分钟 0.19 ±0.04 0.36 ±0.06b 4.00 ±0.60复方丹参片组10 分钟 0.19 ±0.05 0.33 ±0.08 4.40 ±0.74 20 分钟 0.19 ±0.06 0.36 ±0.07 4.40 ±0.52a 30 分钟 0.21 ±0.08 0.43 ±0.09a 5.00 ±0.63生三七制复方丹参高剂量组10 分钟 0.21 ±0.05b 0.42 ±0.09ab 3.18 ±0.60ab 20 分钟 0.20 ±0.00 0.44 ±0.04ab 3.73 ±1.00 30 分钟 0.20 ±0.04 0.42 ±0.07a 3.36 ±0.67ab生三七制复方丹参低剂量组10 分钟 0.16 ±0.03 0.46 ±0.09ab 3.67 ±0.78 20 分钟 0.18 ±0.03 0.42 ±0.05a 4.00 ±0.60b 30 分钟 0.20 ±0.00 0.44 ±0.06a 4.17 ±0.72蒸制熟三七复方丹参高剂量组10 分钟 0.21 ±0.05b 0.46 ±0.10ab 3.64 ±0.81 20 分钟 0.17 ±0.04 0.39 ±0.09 3.73 ±0.79 30 分钟 0.19 ±0.03 0.38 ±0.05 3.73 ±0.65蒸制熟三七复方丹参低剂量组10 分钟 0.16 ±0.03 0.43 ±0.09ab 3.56 ±0.73 20 分钟 0.17 ±0.03 0.39 ±0.09 4.11 ±0.82b 30 分钟0.17 ±0.02 0.38 ±0.08 3.67 ±0.50

与空白组比较，复方丹参片组可显著降低全血黏度(低切P ＜0.01，中切P ＜0.05)，生三七制复方丹参高剂量组有降低的趋势，但作用不显著，详见表6。

表6 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对小鼠不同切变率的全血黏度的影响(±s)

表6 生三七制复方丹参、蒸制熟三七复方丹参对小鼠不同切变率的全血黏度的影响(±s)

注:与空白组比较aP ＜0.05;与复方阿胶浆组比较bP ＜0.05。

200正常对照组 82.90 ±25.82b 29.56 ±14.26b 14.65 ±7.64b 9.17 ±4.88组别 切变率1 切变率5 切变率30 切变率b复方丹参片组 42.09 ±17.89a 15.26 ±6.34a 7.14 ±2.99a 4.63 ±2.00a生三七制复方丹参高剂量组 87.59 ±8.01 29.92 ±2.34b 13.03 ±1.17 7.98 ±0.94生三七制复方丹参低剂量组 84.70 ±15.21 30.35 ±5.87b 13.63 ±2.96 8.48 ±2.16蒸制熟三七复方丹参高剂量组 113.26 ±35.81a 39.17 ±12.58b 17.31 ±5.72b 10.72 ±3.65蒸制熟三七复方丹参低剂量组 103.49 ±5.64 36.13 ±2.46b 16.15 ±1.37b 10.09 ±1.00

3 讨论

实验结果表明，生、蒸制熟三七复方丹参均能显著增加血细胞总数、血红蛋白含量及白细胞总数，提示生、蒸制熟三七复方丹参均具有补血的作用。有文献阐述了三七的补血作用［4］及炮制后的熟三七也具有补血作用，生三七与熟三七两者补益功效无显著性差异［5］，根据实验结果表明生三七及蒸制三七在配伍到复方丹参中仍具有补血功效，且与两者补血作用相当，与生三七与蒸制熟三七补血功效理论一致，即三七没有随着复方丹参的配伍遣方而改变原有补益的功效。

生三七制复方丹参扩张动脉口径作用较熟三七制复方丹参持久，且有改善血液黏稠度的趋势，相反熟三七制复方丹参却有升高全血黏度的趋势，提示生三七及蒸制熟三七在配伍到复方丹参中改善微循环方面，存在一定的差异。因此通过对“血瘀”模型动物全血黏度的影响的研究，为临床遣方使用生、蒸制熟三七发挥不同功效提供科学依据。生三七制复方丹参虽然有一定得改善微循环作用，但是效果低于市售的复方丹参片，这可能与在实验过程中对于混合药物的研磨不够精细，药物颗粒较粗有关，致使生物利用度降低，也可能与给药时间周期较短有关。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:11，527，904-905.

［2］徐冬英.三七药用考［J］.中药材，2002，25(7):510-513.

［3］陈奇.中药药理研究方法学［M］.3 版.北京:人民卫生出版社，2011:534-537，1055，1202.

［4］徐冬英.三七补益功效考［J］.中药材，2002，12:906-908.

［5］周新惠，龙丽莉，李春梅，等.生三七与蒸制熟三七部分药理作用的比较研究［J］.环球中医药，2014，7(6):420-426.