枳术丸对慢传输型便秘大鼠的影响

贺梅娟 杨晋翔 赵晨 刘婷

慢传输型便秘(slow transit constipation，STC)是指结肠的传输功能障碍，肠内容物传输缓慢所引起的顽固性便秘。其发病机制较为复杂，目前尚缺乏深入的认识。枳术丸是治疗脾胃病的传统经方，现代研究发现其具有促进肠平滑肌运动的作用［1］，因此探讨枳术丸挥发油对慢传输型便秘(STC)大鼠的治疗作用及可能的作用机理，为临床治疗便秘提供一种新的方法。

1 对象与方法

1.1 对象

8 周龄SPF 级SD 大鼠40 只，雌雄各半，体质量190 ～210 g，由西安交通大学医学院动物中心提供，合格证号:SCXK(陕)2006-001。

1.2 主要仪器和试剂

超临界流体萃取装置(南通市华安超临界萃取有限公司HA220-50-06)。特种导线(上海百银线缆有限公司，医用AF-250A/110V(AC)/7* 0.05 mm线缆)。BL-410 生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)。吐温80(汕头市西陇化工厂，批号20040708)。印度墨水(中山生物科技公司)。

1.3 实验药物

枳术丸挥发油:由生白术、枳实、荷叶三味药组成，饮片购自同仁堂药店，将三者按20∶10∶3混匀成枳术丸，并加工成米粒大小的颗粒，应用超临界CO2萃取获得挥发油，放4℃冰箱中保存，灌胃前加1%的吐温80 充分震荡，混匀后加双蒸水配置成所需浓度枳实挥发油的混悬液。枳术丸挥发油萃取条件:萃取II 压力25 mp，温度35℃;分离I 压力6 mp，温度35℃;分离II 压力6 mp，温度35℃。盐酸吗啡(10 mg/支，生产批号:020316，沈阳第一制药厂)，应用前用生理盐水配置成浓度为1 mg/ml 的溶液。西沙必利片(5 mg/片，生产批号:041127101，西安杨森制药有限公司)，灌胃前将西沙必利片放入研钵中细研后配置成所需浓度的混悬液。

1.4 造模与分组

实验动物购回后进行一周适应性喂养，应用盐酸吗啡造模。根据完全随机设计原理将大鼠分为四个组:每组10 只，雌雄各半，分笼饲养。除健康对照组外，其余3 组大鼠皮下注射盐酸吗啡3.5 mg/kg·d，健康对照组大鼠皮下注射等量等次生理盐水。各组均持续45 天，建立STC 大鼠模型［2-3］。

造模成功后，除健康对照组外，将其余3 组大鼠用拉丁表法再次随机分为3 组，枳术丸挥发油组、西沙必利组、模型对照组，枳术丸挥发油组及西沙必利组均以成人1 天用药量按大鼠体表面积折算公式换算出大鼠每日给药量，按体重最大的大鼠给药3 ml确定药液浓度，即枳术丸挥发油组予1.8 g/(kg·d)枳术丸挥发油混悬液灌胃;西沙必利组予2.9 mg/(kg·d)西沙必利混悬液灌胃;模型对照组及健康对照组均予等量等次蒸馏水灌胃，各组均持续30 天。

1.5 肠道传输功能测定

采用活性炭悬液推进法测定大鼠肠道传输功能。用药结束后，各组大鼠禁食24 小时，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40 mg/kg)，而后仰卧固定于手术台上，剪去腹毛，常规消毒后纵行切开腹部正中约2 cm，用医用1 mL 一次性注射器经回盲部推入印度墨水0.5 mL，测量被墨汁染色的结肠长度。1小时后取出回盲部至直肠末端的全部肠道，在无张力状态下测量肠道全长及被墨汁染色的肠道长度，继而计算肠道推进率［4-5］。

1.6 在体结肠肌电测定

参考相关文献，进行电极的制作、埋植及结肠肌电的记录，最后将枳术丸挥发油组、模型对照组及健康对照组大鼠结肠肌电活动的记录结果3 分钟作为1 个时间段，分别记录每只大鼠每一时间段结肠肌电频率和振幅的均值、标准差及变异系数，再取均值、标准差及变异系数进行组间比较［6-8］。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠肠道推进率比较

健康对照组、模型对照组、西沙必利组、枳术丸挥发油组大鼠肠道推进率经正态检验，符合正态分布(P=0.75＞0.05)，因此组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD 法。四组大鼠肠道推进率比较总体不同或不完全相同(F = 12.37，P = 0.032 ＜0.05)。与健康对照组比较，模型对照组大鼠肠道推进率减弱，两者差异有显著性(P ＜0.05);与模型对照组比较，枳术丸挥发油组、西沙必利组大鼠肠道推进率增强，均有显著性差异(P ＜0.05);枳术丸挥发油组与西沙必利组比较，大鼠肠道推进率无明显差异，见表1。

表1 健康对照组、模型对照组、西沙必利组、枳术丸挥发油组大鼠肠道推进率比较(±s)

表1 健康对照组、模型对照组、西沙必利组、枳术丸挥发油组大鼠肠道推进率比较(±s)

注:与健康对照组比较aP ＜0.05;与模型对照组比较bP ＜0.05。

组别 n 肠道推进率(%)10 24.77 ±5.17%模型对照组 10 19.74 ±3.94% a西沙必利组 10 24.66 ±4.20% b枳术丸挥发油组 10 28.15 ±5.03%健康对照组b

2.2 各组大鼠结肠慢波频率及振幅比较

健康对照组大鼠结肠慢波表现为不规则的近似正弦波样曲线，少数有切迹，呈双峰型，频率为11.5 ～16.0 次/分，平均频率最大相差1 次/分以上，振幅较整齐，平均振幅0.16 ±0.01 mv;慢波频率变异系数为7.83±1.41%，振幅变异系数为8.08±1.25%。

与健康对照组相比，模型对照组中9 只大鼠慢波频率明显减慢(P ＜0.05)，平均频率为6.02±1.10 次/分，振幅增加(P ＜0.05)，平均振幅0.43±0.05 mv，波形仍表现为不规则的近似正弦波样曲线，频率变异系数为(23.43±3.02)%，振幅变异系数为(12.27±1.51)%，与健康对照组相比均有显著性差异(P ＜0.05)。

枳术丸挥发油组7 只大鼠结肠慢波频率较模型对照组加快，平均频率为9.02 ±1.15 次/分，振幅减小，平均振幅0.31 ±0.01 mv，波形仍表现为不规则的近似正弦波样曲线，频率变异系数为(15.96 ±2.95)%，振幅变异系数为(10.79 ±0.91)%，3 只大鼠结肠慢波频率减慢，振幅强弱不等，波形较不稳定，且出现基线位移，因样本量小，未作分析。快波的干扰较大，未作分析。

模型组中另外1 只大鼠结肠慢波波形较不稳定，且出现基线位移，因样本量小，未作分析。快波的干扰较大，未作分析，见表2。

表2 健康对照组、模型对照组、枳术丸挥发油组大鼠结肠慢波频率比较(±s)

表2 健康对照组、模型对照组、枳术丸挥发油组大鼠结肠慢波频率比较(±s)

注:与健康对照组比较aP ＜0.05;与模型对照组比较bP ＜0.05。

组别 n 频率(次/min) 频率变异系数(%) 振幅(mv) 振幅变异系数(%)10 12.90 ±1.07 7.83 ±1.41 0.16 ±0.01 8.08 ±1.25模型对照组 9 6.02 ±1.10a 23.43 ±3.02a 0.43 ±0.05a 12.27 ±1.51a枳术丸挥发油组 7 9.02 ±1.15b 15.96 ±2.95b 0.31 ±0.01b 10.79 ±0.91健康对照组b

3 讨论

枳术丸源于《金匮要略》枳术汤，张元素将枳实、白术的用量比改为2∶1，并将汤剂改为丸剂。方中白术补脾益气，给肠腑化物传导以动力;枳实行气宽中通腑;荷叶可以生发脾胃清阳之气，诸药合用，清者升，壅浊可降可排，清升浊降相辅相承，肠腑传导复常，糟粕难以为积，自然陈恙日愈。现代临床广泛应用于慢性胃炎［9］、消化不良［10］、糖尿病胃轻瘫［11］、便秘［12］等的治疗。现代药理研究也认为枳术丸能够促进肠平滑肌的推进性蠕动［1］;此外，健脾理气类中药能明显增强肠平滑肌蠕动［13］，而白术、枳实均能加强动物肠平滑肌收缩，促进肠蠕动，具有通便作用。

近年来从临床有效的中药中寻找新的活性成分，探索新药是一个大的趋势。挥发油是白术的主要化学成分，也是枳实的主要有效成分之一，有研究表明枳实中挥发油是理气﹑行滞的重要成分［14］，也有研究表明枳实中所含的挥发油有明显的促进在体小鼠胃肠推进、增加推进率的作用［15］。课题组据此来探讨枳术丸挥发油对STC 的治疗作用及可能的作用机理，为寻找治疗STC 的新策略及新药提供有价值的靶标。本实验结果显示，STC 大鼠结肠慢波频率、振幅及变异系数出现异常，这可能是导致结肠传输减慢的重要因素，而枳术丸挥发油可在一定程度上纠正STC 大鼠异常的结肠慢波，这可能是其治疗STC 的机制之一，这为其用于STC 的治疗提供了实验学的参考，希望本研究能够抛砖引玉，使理论及临床工作者重视枳术丸挥发油对STC 的治疗作用。

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