吡喹酮抗体内培养欧猬迭宫绦虫裂头蚴的作用与评价

黄金妹，张 强，陈泽威，邱明卫，高雨静，钟赛凤，甘秀凤，吕 刚，芦亚君

(海南医学院热带医学与检验医学院，海南 海口 571199)

吡喹酮抗体内培养欧猬迭宫绦虫裂头蚴的作用与评价

黄金妹，张 强，陈泽威，邱明卫，高雨静，钟赛凤，甘秀凤，吕 刚，芦亚君

(海南医学院热带医学与检验医学院，海南 海口 571199)

目的 探讨吡喹酮经灌胃及注射两种方式抗SD大鼠体内欧猬迭宫绦虫裂头蚴的效果。方法将50只SD大鼠每只感染5条欧猬迭宫绦虫裂头蚴，培养两周后随机分组进行药物治疗。灌胃治疗组：使用吡喹酮药物浓度分别为600 mg/kg、1 200 mg/kg、1 800 mg/kg及2 400 mg/kg进行灌胃治疗7 d，灌肠对照组以单纯植物油灌肠；注射治疗组：配制30%吡喹酮注射液以注射剂量分别为0.2 ml和0.5 ml进行注射治疗3 d及6 d，注射对照组以无菌生理盐水注射。疗程结束后剖杀大鼠，计算减虫率，如大鼠体内剩余虫体则进行切片及HE染色。结果吡喹酮作用于大鼠体内裂头蚴，各用药组减虫率与对照组减虫率差异均有统计学意义(P＜0.05)，其中灌胃法以1 800 mg/kg剂量组减虫率最高，注射法以0.5 ml 6 d组减虫率最高。虫体切片染色后观察，体壁有明显的断裂，甚至深入基质区。结论吡喹酮抗体内裂头蚴虫体有良好的效果，其抗虫机制可能与吡喹酮对裂头蚴组织结构的破坏而致虫体死亡有关。

欧猬迭宫绦虫裂头蚴；吡喹酮；灌胃；注射

欧猬迭宫绦虫(Spirometra erinaceieuropaei)又称曼氏迭宫绦虫(Sparganum mansoni)，其中绦期幼虫裂头蚴可寄生在人体引起裂头蚴病[1]。裂头蚴病是一种严重威胁人类健康的疾病[2-3]，呈世界性分布，其中我国有1 000多例裂头蚴病，分布于27个省、市和自治区[4]。

欧猬迭宫绦虫裂头蚴可侵犯人体多个组织和器官，如眼、皮下、腹壁、脑等[5]，虫体能破坏组织、导致失明或瘫痪，甚至死亡[6-7]。目前裂头蚴病治疗方案主要为手术取出虫体，对于浅表寄生部位者较为常用及有效，但对于脑部寄生或深部寄生者，如能采用有效的保守治疗则更易为患者接受。本文主要探讨吡喹酮药物对SD大鼠体内欧猬迭宫绦虫裂头蚴的作用，为保守治疗裂头蚴病提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 欧猬迭宫绦虫裂头蚴 裂头蚴虫体采自于海南省海口市秀英区及定安县的野生青蛙体内，选取体长为4～13 cm、虫体完整、伸缩活动剧烈的裂头蚴作为实验对象。

1.2 实验动物 雄性SD大鼠(体重200～220 g)购自长沙市天勤生物技术有限公司。

1.3 试剂 吡喹酮原粉购自Sigma公司，植物油、苯甲醇、乳酸乙酯、苯甲酸苄酯、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、二特丁基羟基甲苯(BHT)购自海南诣高仪器有限公司。

1.4 治疗药物 吡喹酮原粉溶于植物油配制不同浓度的吡喹酮-植物油溶液作为灌胃药物；配制高浓度吡喹酮注射液即30%吡喹酮注射液[8]作为注射药物。

1.5 实验动物感染与治疗 将50只SD大鼠随机分为10组，每只大鼠经口饲5条完整裂头蚴虫体，感染两周后进行治疗。(1)灌胃治疗组：吡喹酮药物浓度分别为600 mg/kg、1 200 mg/kg、1 800 mg/kg、2 400 mg/kg，每次灌胃2 ml，1次/d，治疗7 d，灌肠对照组以单纯植物油灌胃；(2)注射治疗组：30%吡喹酮注射液剂量分别为0.2 ml、0.5 ml，腹腔注射2次/d、治疗3 d及7 d，注射对照组以无菌生理盐水注射。

1.6 吡喹酮药物作用观察 各组感染裂头蚴的SD大鼠在治疗结束后处死解剖，于体内查找裂头蚴，进行虫体计数并计算减虫率，减虫率=(对照组虫数-治疗组虫数)/对照组虫数×100%。如获得裂头蚴虫体，则取出虫体做切片及HE染色。

1.7 统计学方法 应用统计学软件SPSS19.0对各组数据进行描述性分析，减虫率的比较进行χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 吡喹酮对大鼠体内裂头蚴作用效果 吡喹酮-植物油溶液经灌胃作用于受染大鼠7 d后，各用药组减虫率与对照组减虫率比较差异有统计学意义(P＜0.05)，其中1 800 mg/kg剂量组减虫率最高(96%)，600 mg/kg剂量组最低(80%)，但各用药组间减虫率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。30%吡喹酮注射液经腹腔注射作用于受染大鼠3 d和6 d后，各用药组减虫率与对照组减虫率差异有统计学意义(P＜0.05)，其中注射0.5 ml 6 d组减虫率最高(96%)，0.2 ml 3 d组最低(84%)，但各用药组间减虫率比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表2。?

表1 吡喹酮-植物油溶液对大鼠体内裂头蚴虫体的作用效果

表1 30%吡喹酮注射液对大鼠体内裂头蚴虫体的作用效果

2.2 SD大鼠死亡情况 在治疗过程中，灌胃法给药大鼠均无死亡，30%吡喹酮注射液0.2 ml剂量注射大鼠无死亡，0.5 ml剂量注射2 d后大鼠死亡1只，5 d后死亡2只，需重复实验以补充数据。

2.3 裂头蚴虫体HE染色 将裂头蚴虫体切片及HE染色，光学显微镜下观察发现，裂头蚴虫体经吡喹酮作用后，有明显的体壁皮层断裂(见图1A、1B)，断裂处甚至深入基质区(见图1C)。

图1 裂头蚴虫体HE染色标本

3 讨论

吡喹酮是一种高效、低毒的抗血吸虫病首选药物[9]，而其对裂头蚴的作用研究尚少[10-11]。目前裂头蚴病的治疗以手术方法居多，术中取虫务必保证虫体完整取出方能根治，对于裂头蚴寄生人体深部不便手术的患者，可用40%酒精与2%普鲁卡因局部封闭杀虫[12]，但效果不佳。

本文探讨吡喹酮作用于体内裂头蚴的效果，腹腔注射30%吡喹酮注射液及灌胃法减虫率均达到80%以上。本实验用高浓度吡喹酮注射液最大剂量为0.5 ml，药量远低于吡喹酮对大鼠腹腔注射的LD50(LD50=0.8 g/kg)[13]，但仍有少数大鼠死亡，可见吡喹酮注射液对实验动物毒性作用大于灌胃法，口服吡喹酮药物安全性要高于注射用药。

经药物作用后获得的裂头蚴切片染后发现，虫体体壁有明显的断裂，断裂较深处则深入基质区，表明吡喹酮对裂头蚴虫体毒性作用可能是对体壁损伤、改变细胞通透性，影响生理功能、代谢吸收而致虫体死亡[14-15]；吡喹酮抗裂头蚴的分子机制尚不明了，需进一步实验研究阐明。

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Effect and evaluation of praziquantel on Sparganum erinaceieuropaei in vivo.

HUANG Jin-mei,ZHANG Qiang, CHEN Ze-wei,QIU Ming-wei,GAO Yu-jing,ZHONG Sai-feng,GAN Xiu-feng,LV Gang,LU Ya-jun.Tropical and Laboratory Medical College,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan CHINA

ObjectiveTo explore the effect of praziquantel onSparganum erinaceieuropaeiin SD rats by gastric perfusion and injection.MethodsFifty SD rats were selected and infected with five plerocercoids each.After two weeks,the 50 SD rats were randomly divided into 10 groups for drug treatment:perfusion treatment groups with the concentrations of praziquantel of 600 mg/kg,1 200 mg/kg,1 800 mg/kg,2 400 mg/kg,0 mg/kg(vegetable oil instead,the perfusion control group)for 7 d;injection treatment groups with 30%praziquantel of 0.2 ml,0.5 ml for 3 d and 6 d,normal saline(the injection control group).After the treatment,rats were sacrificed.The reduction rate of plerocercoid was calculated.The remaining plerocercoid in rat was sliced and stained by HE.ResultsThe reduction rate showed statistically significant difference in the treatment group and the corresponding control groups(P＜0.05).The reduction rate of 1 800 mg/kg group was the highest in perfusion treatment groups.The reduction rate of 0.5 ml for 6 d group was the highest in injection treatment groups.The plerocercoid was stained and the body wall has obvious fracture,even deep into matrix area.ConclusionThe effect of praziquantel on plerocercoid is significant.The mechanism may be related to that praziquantel causes damage in organizational structure of plerocercoid and then thus results in death.

Sparganum erinaceieuropaei;Praziquantel;Gastric perfusion;Injection

R-332

A

1003—6350（2015）10—1409—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0505

2014-12-05)

国家级创新创业训练计划项目(编号：201211810057)

芦亚君。E-mail：luyajuncc@163.com