黄芩苷用于犬实验性牙髓炎盖髓的研究

闫 佳，许晶晶，陈跃元，谭为霞，雷 蕾

(1.暨南大学口腔医学系，广东 广州 510630；2.深圳市南山区蛇口人民医院，广东 深圳 518067)

黄芩苷用于犬实验性牙髓炎盖髓的研究

闫 佳1，许晶晶1，陈跃元1，谭为霞2，雷 蕾1

(1.暨南大学口腔医学系，广东 广州 510630；2.深圳市南山区蛇口人民医院，广东 深圳 518067)

目的 观察黄芩苷糊剂对Beagle犬实验性牙髓炎模型行直接盖髓术的效果。方法两只健康雄性beagle犬，分为7 d组和30 d组。各选取24颗健康牙齿，用内毒素诱导法制备牙髓炎模型，随机分成三组：黄芩苷糊剂组、Dycal组、牙髓炎组。分别于7 d、30 d后处死Beagle犬，通过组织学方法评价牙髓修复情况。结果盖髓后7 d，黄芩苷糊剂组的炎症反应和组织紊乱程度较Dycal组弱，差异均有统计学意义(P＜0.05)。盖髓后30 d，黄芩苷糊剂组的炎症反应、组织紊乱程度及修复性牙本质形成情况均优于Dycal组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论黄芩苷糊剂用于犬实验性牙髓炎直接盖髓较Dycal疗效更好。

牙髓炎；盖髓术；黄芩苷

牙髓炎是常见的口腔疾病，活髓保存治疗是牙髓治疗学中最符合生物学观点的治疗方法，其中，盖髓剂对治疗成败起着至关重要的作用。本研究将黄芩苷糊剂用于Beagle犬实验性牙髓炎模型的直接盖髓治疗，了解黄芩苷对实验性牙髓炎的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂 雄性SPF级Beagle犬(广东省高要市康达实验动物科技有限公司)，黄芩苷(中国药品生物制品检定所)，Dycal(登士柏公司)，玻璃离子粉剂和液剂(3M公司)。

1.2 黄芩苷糊剂的制备 黄芩苷与生理盐水调和成稠糊状。

1.3 实验方法

1.3.1 实验分组 健康雄性Beagle犬两只，分为7 d组和30 d组。每只犬按上、下、左、右四区分组，各选择无龋坏、牙周正常的6颗牙，共24颗牙齿编号，按随机数表法分成3组：黄芩苷糊剂组12颗牙，Dycal组8颗牙，牙髓炎组4颗牙。

1.3.2 实验模型的建立 根据参考文献[1]，Beagle犬全麻下行侧卧固定，去除牙面菌斑及牙石，消毒后，用裂钻在牙齿唇、颊面颈部距牙龈缘1 mm釉质部位制备宽2 mm、高3 mm的”V”类洞(犬齿距龈缘3 mm)，近髓透红时，用无菌生理盐水冲洗、干燥、隔湿，将5 mg/ml内毒素缓慢注入髓腔(针头进入髓腔约1 mm)，玻璃离子水门汀封闭窝洞。

1.3.3 实验模型的盖髓术 黄芩苷糊剂组、Dycal组去除玻璃离子水门汀，直径0.5 mm球钻在窝洞底(不进入牙髓组织)、无菌生理盐水冲洗下制备穿髓孔，止血、温生理盐水冲洗、干燥窝洞，分别用黄芩苷糊剂、Dycal盖髓，玻璃离子水门汀充填。定期观察每只犬的饮食改变、日常活动及口腔组织的情况。

1.3.4 实验标本的制备 术后7 d、30 d处死动物，4%多聚甲醛颈动脉灌注固定，分离实验牙，截断根尖1/3。实验牙编号，常规固定，连续脱钙两周。常规脱水、透明、浸蜡、包埋。于穿髓孔中央沿牙髓唇舌向制作切片，HE染色，显微镜观察，按Josimeri等[2]的标准进行牙髓组织病理学评价，细胞炎性反应的分级标准为0～3级，0级：穿髓孔对应处牙髓组织中没有或仅有个别炎性细胞；1级：多形及单个核细胞轻度浸润；2级：冠髓有中度炎性细胞浸润；3级：冠髓有重度炎性细胞浸润或脓肿形成。组织紊乱的分级标准为0～3级，0级：正常组织；1级：成牙本质细胞层紊乱，中心牙髓组织正常；2级：全部牙髓组织失去正常形态；3级：牙髓坏死。硬组织形成的分级标准为0～3级，0级：无硬组织形成；1级：穿髓孔下有少量硬组织沉积；2级：穿髓孔下有中等量硬组织沉积；3级：穿髓孔下有大量硬组织沉积，完整的牙本质桥形成。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，各盖髓组不同时点分级数据采用Kruskal-WallisH检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 牙髓炎组 镜下见牙髓炎组穿髓点下方血管扩张充血，局部大量炎症细胞浸润，成牙本质细胞层紊乱，空泡性变。根髓基本正常(图1)。表明本实验成功建立了实验性牙髓炎模型。

图1 牙髓炎(HE×10)

2.2 7 d组牙髓组织病理学评价 盖髓后7 d，黄芩苷糊剂与Dycal组间细胞炎性反应(Z=8.385，P= 0.015)、组织紊乱程度(Z=13.424，P=0.009)差异均有统计学意义，硬组织形成情况(Z=5.210，P=0.266)差异无统计学意义。表明两组都出现了不同程度的炎症反应和组织紊乱，但黄芩苷糊剂组均轻于Dycal组，两组未见完整牙本质桥形成，见表1。

表1 7 d组牙髓组织病理学评价(颗)

2.3 30 d组牙髓组织病理学评价 盖髓后30 d，黄芩苷糊剂与Dycal组间细胞炎性反应(Z= 17.691，P=0.001)、组织紊乱程度(Z=17.645，P=0.001)、硬组织形成情况(Z=24.231，P=0.000)差异均有统计学意义。黄芩苷糊剂组的炎症反应和组织紊乱显著弱于Dycal组，且黄芩苷糊剂组有修复性牙本质桥形成，而Dycal组未见修复性牙本质桥形成，见表2。

表2 30 d组牙髓组织病理学评价(颗)

3 讨 论

牙髓炎是一种混合细菌感染性疾病，内毒素是细菌毒性产物中的主要毒力因子，能直接或间接构成成牙本质细胞和牙髓组织的损伤。本实验参照有关文献[1]用内毒素诱导建立实验性牙髓炎模型，术后第3天，镜下呈现冠髓急性炎症反应，根髓基本正常，类似可复性牙髓炎的病理变化。

牙髓保存治疗中，盖髓剂的作用至关重要。理想的盖髓材料应具有消除感染和炎症、诱导牙髓细胞分化、修复性牙本质形成、保存活髓的特性[3]。目前临床使用的活髓保存材料有氧化锌丁香酚，氢氧化钙玻璃离子/树脂改良型玻璃离子，矿物三氧化物凝聚体和粘结系统等[4]。其中，氢氧化钙作为传统的盖髓材料，是临床首选的盖髓剂，以Dycal为代表的双份糊剂型氢氧化钙更因使用方便、性能良好得到广泛应用。然而，这些盖髓剂虽有诸多优点，但均无显著抗感染、消除炎症的作用。

黄芩中的有效成分黄芩苷具有抗炎、抗菌、抗氧化、清除自由基、调节免疫[5]、降解细菌内毒素[6]等多种生物活性。本实验组前期实验[7]观察到黄芩苷可抑制由LPS诱导的人牙髓细胞TLR4表达及TNF-α分泌，表明黄芩苷可通过阻断LPS的作用途径，起到保护牙髓细胞和抗炎的作用。提示黄芩苷可作为盖髓剂用于控制牙髓炎症。

当外界刺激引起牙髓炎症反应时，牙髓会出现组织水肿，成牙本质细胞受损萎缩或消失，炎症细胞浸润等组织学改变。保髓治疗成功与否主要通过炎症细胞浸润和修复性牙本质形成情况进行评定。本实验通过HE染色对黄芩苷盖髓效果进行评价。结果显示：盖髓后7 d、30 d，黄芩苷糊剂组的牙髓修复情况优于Dycal组。提示黄芩苷可更有效的降解内毒素、保护牙髓组织。而Dycal组疗效较差的原因可能是由于其呈强碱性，对牙髓细胞缺乏保护[8]，难以有效的降解内毒素、促进修复性牙本质形成。

TNF-α是机体应激反应产生较早，并起核心作用的炎症介质，可介导几乎所有内毒素的生物学效应[7]，在牙髓炎症过程中表达显著增加，与被激活的单核巨噬细胞系统合并，介导炎症及免疫反应。柴玉爽等[9]研究黄芩苷对模式识别受体TLR2/4-NOD2的作用及其成药性意义，发现黄芩苷能够特异性的抑制疾病过程中TLR2/4-NOD2的表达，抑制下游炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，从而在一定程度上抑制免疫炎性反应。

牙髓炎治疗的理想效果是消除炎症、恢复可逆性的牙髓损伤，既保患牙，又使牙髓能行使其防御、修复和重建等功能[10]。本实验表明，黄芩苷糊剂用于直接盖髓，具有良好的降解内毒素和保护牙髓细胞的特点，较Dycal能更好地减轻牙髓炎症，发挥牙本质-牙髓复合体的修复再生能力，提高盖髓疗效，对LPS引起的牙髓炎具有潜在治疗作用，为黄芩苷在临床上作为盖髓剂的应用提供了理论基础。

[1]Rutherford RB,Gu K.Treatment of inflamed ferret dental pulps with recombinant bone morphogenetic protein-7[J].Eur J Oral Sci, 2000,108(3):202-206.

[2]Josimeri H,Elisa MAG,Carlos ASC.Biocomp-atibility of an adhesive system applied to exposed human dental pulp[J].Journal of Endod-ontics,1999,25(10):676-682.

[3]彭 轶,刘 浩.两种盖髓材料用于103颗牙盖髓术治疗的效果观察[J].重庆医学,2013,42(9):1019-1020.

[4]金 燕,刘 茜,周红艳,等.活髓保存材料的现状和展望[J].口腔生物医学,2011,2(2):100-103.

[5]雷 芳.黄芩苷药理作用研究进展[J].中国药业,2010,19(15): 87-93.

[6]窦永青,杜文力,薛 毅,等.黄芩苷降解细菌内毒素的定量分析测定[J].华西口腔医学杂志,2007,25(2):169-172.

[7]于 淼,雷 蕾,谭为霞,等.黄芩苷对LPS诱导人牙髓细胞TLR4表达及TNF-α分泌的影响[J].牙体牙髓牙周病学杂志,2009,19 (11):633-636.

[8]钟 波,雷 蕾,于 淼,等.黄芩苷在可复性牙髓炎盖髓术中的应用[J].临床口腔医学杂志,2009,25(5):310-311.

[9]柴玉爽,雷 帆,邢东明,等.黄芩苷对模式识别受体TLR2/ 4-NOD2的作用及其成药性意义[J].中国中药杂志,2013,38(16): 2639-2644.

[10]Trope M.Regenerative potential of dental pulp[J].J Endod,2008, 34(7):206-210.

Experimental study of baicalin as pulp capping agent in beagle dogs.

YAN Jia1,XU Jing-jing1,CHEN Yue-yuan1, TAN Wei-xia2,LEI Lei1.1.Department of Stomatology,Jinan University,Guangzhou 510632,Guangdong,CHINA;2. Shenzhen Shekou People's Hospital,Shenzhen 518067,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo observe the effect of using baicalin as pulp capping agent in experimental models of beagle dog with pulpitis.MethodsTwo healthy male beagle dogs were enrolled in the study.In each dog,24 sound teeth were selected and induced with lipopolysaccharide(LPS)to establish experimental models of pulpitis, which were then divided into 3 groups:baicalin group,Dycal group,pulpitis group.The dogs were sacrificed after 7 days(7 days group)and 30 days(30 days group).Histological methods were applied to assess the repair condition of pulps.ResultsAt 7 days after pulp capping,inflammatory reaction,disorderliness of tissue in baicalin group were slighter than those in Dycal group,and the differences were statistically significant(P＜0.05).At 30 days after pulp capping,inflammatory reaction,disorderliness of tissue and the formation of reparative dentin in baicalin group were better than those in Dycal group,and the differences were statistically significant(P＜0.05).ConclusionThe effect of baicalin as pulp capping agents on experimental dog models with pulptis might be better than Dycal.

Pulpitis;Pulp capping;Baicalin

R-332

A

1003—6350（2015）14—2037—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0737

2015-01-25)

雷 蕾。E-mail：tleil@jnu.edu.cn