培土清心颗粒的抗炎效果研究*

莫秀梅，刘俊峰，陈玉兴，曾小慧，薛素琴，赵 巍，陈达灿△

(1.广东省中医院，广州 510120;2.广东省中医研究所，广州 510095;3.广州中医药大学，广州 510004)

培土清心颗粒的抗炎效果研究*

莫秀梅1，刘俊峰1，陈玉兴2，曾小慧2，薛素琴1，赵 巍3，陈达灿1△

(1.广东省中医院，广州 510120;2.广东省中医研究所，广州 510095;3.广州中医药大学，广州 510004)

目的:评价培土清心颗粒对实验性炎症动物模型的抗炎效果。方法:选择SPF级NIH小鼠及SPF级SD大鼠，采用区组随机实验方法进行分组，包括正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组以及培土清心颗粒高、中、低剂量组，分别创建二甲苯致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高以及大鼠棉球肉芽肿3种动物模型，对造模成功后的动物进行灌胃，观察评价培土清心颗粒的抗炎作用。结果:培土清心颗粒对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及棉球所致大鼠肉芽组织增生均有明显抑制作用。结论:培土清心颗粒具有良好的抗急慢性炎症效果，其抗炎作用与西药吲哚美辛肠溶片和中成药消风止痒颗粒的效果相当。

培土清心颗粒;特应性皮炎;抗炎

特应性皮炎(atopic dermatitis，AD)是一种慢性、顽固反复发作性、炎性皮肤病，其确切的发病机制目前尚不明确，一般认为与一定遗传和环境因素相关，是机体皮肤屏障功能障碍或免疫反应失衡所导致的一系列变应性或非变应性炎症反应［1］。因此，修复皮肤屏障、抑制变态反应、阻断炎症介质是控制AD皮肤炎症病变的重要手段。迄今为止还没有完全根治和控制AD复发的有效治疗方法。常用的激素、抗组胺药、免疫抑制剂等西药更由于毒副作用明显而受到严格限制，这使得包括中医药在内的替代医学治疗日益受到广泛关注［2］。培土清心颗粒是由广东省中医院皮科临床经验方制备而成的颗粒剂，主要用于治疗特应性皮炎、湿疹等顽固、反复发作性、瘙痒性皮肤病，经多年验证可以有效减轻AD患者皮损严重程度，控制瘙痒，改善生存质量，临床疗效确切且副作用少［3］。为探讨培土清心颗粒的疗效机制，本实验观察了药物对3种急慢性炎症动物模型的影响，研究其抗炎作用效果，为培土清心颗粒剂的新药研发提供重要的药效依据。

1 材料与方法

1.1 动物

NIH SPF级小鼠，雌雄各半，体质量11～13 g，由广东省医学实验动物中心提供(合格证号44007200010439、44007200010356)。SD SPF级大鼠，雌雄各半，体质量80～100 g，由广东省医学实验动物中心提供(合格证号44007200011185)。实验动物环境:广东省中医药工程技术研究院SPF级动物实验室(设施使用许可证号 SYXK(粤)2010-0059)。

1.2 药品与试剂

培土清心颗粒由广东省中医药工程技术研究院中药制剂研究室提供(批号201307001)。消风止痒颗粒，吉林紫鑫药业股份有限公司(国药准字Z22025024，批号140205)。吲哚美辛肠溶片(消炎痛)，江苏亚邦爱普森药业有限公司(国药准字H32021431，25 mg×100 s，批号1303002)。

1.3 试剂

二甲苯，广州市中南化学试剂有限公司(批号130817);冰醋酸，广州化学试剂厂(批号20130901-2);EVANSBLUE，UNI-CHEM(批号GD4061465);乙醚，广州化学试剂厂产品(批号20130916-1)。

1.4 仪器

JJ3000动物电子秤，G＆G公司产品;BS224S电子天平(1/万)，德国SARTORIUS产品;UV-2501PC型紫外分光光度计，日本SHIMADZU公司产品;0.8 cm金属打孔器，广州市正宏医疗器械设备有限公司提供。

1.5 统计学方法

采用SPSS 15.0软件进行统计分析，方差齐、正态分布以及组间均数两两比较采用SNK法，方差不齐或非正态分布采用Dunnett’s T3法，多组间均数比较采用单因素方差分析，检验水准α=0.05。

2 方法与结果

2.1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响［4］

表1显示，NIH小鼠84只，雌雄各半，按体质量随机均分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、吲哚美辛肠溶片9.75 mg·kg－1组、消风止痒颗粒5.85 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒3.12 g颗粒· kg－1组、培土清心颗粒1.56 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒0.78 g颗粒·kg－1组。各给药组按20 ml· kg－1分别剂量灌胃给药，正常对照组、模型对照组给予等体积蒸馏水灌胃，每日1次，连续给药7 d。末次给药间隔30 min后，除正常对照组外，其余各组每只小鼠右耳均匀涂抹二甲苯溶液20 μL，正常对照组小鼠右耳涂抹同等量生理盐水溶液，4 h后脱颈椎处死小鼠，剪下双侧耳，用直径8 mm金属打孔器分别打下小鼠双侧耳片、称重，以左右两侧耳质量的差值作为小鼠二甲苯耳廓炎症肿胀度，计算抑制率((对照组耳廓肿胀度－给药组耳廓肿胀度)/对照组耳廓肿胀度×100%)。结果表明，模型对照组小鼠耳廓肿胀度较正常对照组显著升高，差异有统计学意义(P＜0.01)。培土清心颗粒3.12 g颗粒· kg－1、1.56 g颗粒·kg－1、0.78 g颗粒·kg－1组小鼠耳廓肿胀度较模型对照组明显减小，差异有统计学意义(P＜0.01)。

2.1 对冰醋酸所致腹腔毛细血管通透性增高小鼠的影响［4］

表2显示，SPF级NIH小鼠84只，雌雄各半，按体质量随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、吲哚美辛肠溶片9.75 mg·kg－1组、消风止痒颗粒5.85 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒3.12 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒1.56 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒0.78 g颗粒·kg－1组。各给药组按20 ml ·kg－1剂量灌胃给药，各对照组给予等体积蒸馏水灌胃，每天1次，连续给药7 d。末次给药后1 h，各小鼠均以0.5%伊文思蓝生理盐水溶液按照剂量0.1 mL·10 g－1尾静脉注射。正常对照组小鼠随即腹腔注射生理盐水溶液0.2 mL·只－1，其余各组小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL·只－1。20 min后脱颈椎处死小鼠，剪开小鼠腹腔，用6 mL生理盐水洗涤数次，将所有洗涤液吸出加生理盐水至10 mL，3000 r/min离心10 min，于590 nm处取上清液比色测定A值，计算抑制率((对照组A值－给药组A值)/对照组A值×100%)。结果表明，模型对照组小鼠腹腔洗涤液A值较正常对照组显著升高，差异有统计学意义(P＜0.01)。培土清心颗粒3.12 g颗粒·kg－1、1.56 g颗粒·kg－1、0.78 g颗粒·kg－1组小鼠腹腔洗涤液A值较模型对照组显著减小，差异有统计学意义(P＜0.01)。

表1 培土清心颗粒对二甲苯所致耳廓肿胀小鼠的影响(±s)

表1 培土清心颗粒对二甲苯所致耳廓肿胀小鼠的影响(±s)

注:与正常对照组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与模型对照组比较:#P＜0.05，##P＜0.01

组别 鼠数 剂 量 耳廓肿胀度(mg)抑制率(%)正 常 对 照 组 12 等体积 －0.175±0.771—46.4模 型 对 照 组 12 等体积 10.850±4.615＊＊ —吲哚美辛肠溶片 12 9.75 mg·kg－1 6.158±3.075## 43.2消风止痒颗粒 12 5.85 g颗粒·kg－1 5.058±3.042## 53.4培土清心颗粒 12 3.12 g颗粒·kg－1 5.383±2.339## 50.4培土清心颗粒 12 1.56 g颗粒·kg－1 5.683±3.147## 47.6培土清心颗粒 12 0.78 g颗粒·kg－1 5.811±2.557##

表2 培土清心颗粒对腹腔毛细血管通透性增高小鼠的影响(±s)

表2 培土清心颗粒对腹腔毛细血管通透性增高小鼠的影响(±s)

注:与正常对照组比较:＊＊P＜0.05，P＜0.01;与模型对照组比较:##P＜0.05，P＜0.01

组别 鼠数 剂 量 A值(mg) 抑制率(%)正 常 对 照 组 12 等体积 0.078±0.032—25.4模 型 对 照 组 12 等体积 1.138±0.384＊＊ —吲哚美辛肠溶片 12 9.75 mg·kg－1 0.477±0.194## 58.1消风止痒颗粒 12 5.85 g颗粒·kg－1 0.840±0.222## 26.2培土清心颗粒 12 3.12 g颗粒·kg－1 0.797±0.130## 30.0培土清心颗粒 12 1.56 g颗粒·kg－1 0.807±0.209## 29.1培土清心颗粒 12 0.78 g颗粒·kg－1 0.849±0.162##

2.2 对棉球肉芽肿大鼠的影响［5-6］

表3显示，SD大鼠60只，雌雄各半，按体质量随机均分为6组，分别为对照组、吲哚美辛肠溶片6.75 mg·kg－1组、消风止痒颗粒4.05 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒2.16 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒1.08 g颗粒·kg－1组、培土清心颗粒0.54 g颗粒·kg－1组。各组大鼠乙醚浅麻醉，无菌操作下经胸腹部切口1 cm，将2个无菌棉球(每个棉球重20 mg，高压灭菌)分别植入大鼠两侧腋窝皮下，切口缝合，碘酊消毒。植入棉球当天各给药组大鼠按剂量灌胃给药，给药体积为10 mL·kg－1，对照组同法灌胃给予蒸馏水10 mL·kg－1，每天1次，连续7 d。末次给药后30 min脱颈椎处死大鼠，取出大鼠两侧腋窝皮下棉球，称棉球湿重，置60℃烘箱烘6 h至恒重，称棉球干重。以棉球湿重、棉球干重数值减去原棉球质量(20 mg×2)即为肉芽肿湿重、肉芽肿干重，计算抑制率。肉芽肿干重抑制率(%)=(对照组肉芽肿干重－给药组肉芽肿干重)/对照组肉芽肿干重×100%。结果表明，与对照组比较，培土清心颗粒2.16 g颗粒·kg－1、1.08 g颗粒·kg－1、0.54 g颗粒·kg－1组大鼠肉芽肿湿重、干重数值均明显减小(P＜0.01)。

表3 培土清心颗粒对棉球肉芽肿大鼠的影响(±s，n=10)

表3 培土清心颗粒对棉球肉芽肿大鼠的影响(±s，n=10)

注:与正常对照组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别 剂 量 肉芽肿湿重(mg) 肉芽肿干重(mg) 肉芽肿干重抑制率(%)对 照 组 等体积 675.730±48.969 97.900±9.582—16.8吲 哚 美 辛 肠 溶 片 6.75 mg·kg－1 518.110±55.223＊＊ 74.230±9.108＊＊ 24.2消 风 止 痒 颗 粒 4.05 g颗粒·kg－1 548.610±65.294＊＊ 80.360±7.267＊＊ 17.9培 土 清 心 颗 粒 2.16 g颗粒·kg－1 547.660±98.216＊＊ 77.430±6.994＊＊ 20.9培 土 清 心 颗 粒 1.08 g颗粒·kg－1 563.540±71.527＊＊ 76.170±11.258＊＊ 22.2培 土 清 心 颗 粒 0.54 g颗粒·kg－1 554.560±79.304＊＊ 81.480±10.181＊＊

3 讨论

皮肤是人体和外界环境之间的第一道屏障，包括化学、微生物、机械性刺激等各种因素攻击皮肤导致的损伤、抗损伤和修复等一系列复杂反应，就是机体的防御性反应—炎症(inflammation)。变质、渗出和增生是炎症的基本病理变化［7］。顽固反复发作的瘙痒和皮损是特应性皮炎患者的主要临床表现。AD急性发作期主要表现为广泛的红斑、丘疹、水疱甚至渗出、糜烂等，慢性缓解期则以皮肤干燥、粗糙、肥厚、色素沉着为主，两者往往交替反复、缠绵不愈。其组织病理与其他皮炎湿疹病理表现一致，无特异性，均为各种原因刺激诱发的皮肤炎症反应。

炎症根据病程通常可分为急性炎症和慢性炎症两大类。急性炎症以渗出性病变为其特征，炎细胞以粒细胞浸润为主;慢性炎症常以增生性病变为主，其炎细胞则以巨噬细胞和淋巴细胞为主。本实验采用3种模型来观察培土清心颗粒的抗炎效果。其中二甲苯和冰醋酸所致的小鼠模型均属于急性炎症模型，通过较高浓度的炎性物质刺激，导致皮肤血管局部充血、扩张和炎症细胞聚集，急性渗出、水肿，从而形成皮肤急性炎性病灶，是用于评价药物对炎症早期毛细血管通透性影响的主要模型，反映药物对急性炎症的抑制作用［8-9］。棉球肉芽肿实验属于增生性炎症实验，棉球埋入小鼠局部皮下后可产生与临床某些炎症后期病理变化相似的肉芽增生，棉球诱导的小鼠肉芽肿模型造成的病理变化符合慢性炎症模型，是常用的筛选抑制炎症增殖期药物的模型［10-11］。本试验结果显示，培土清心颗粒对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高以及棉球所致大鼠肉芽组织增生均有明显抑制作用。这与培土清心颗粒组方中连翘、白鲜皮、白茅根、珍珠粉等单味中药的抗炎作用一致［12-15］。可见，培土清心颗粒可明显抑制炎症急性期的渗出、水肿以及慢性期的肉芽肿增生，表明该药对皮肤的急慢性炎症均有较好的治疗作用，其抗炎效果与西药吲哚美辛肠溶片、中成药消风止痒颗粒相当。

本试验从抗炎角度初步阐释了培土清心颗粒治疗特应性皮炎的疗效机制。但特应性皮炎的病机十分复杂，加之中药治疗具有多途径、多靶点、多效性等特点，因此对培土清心颗粒的确切治疗机制探讨还有待多角度、多环节开展深入研究，为中药新药的开发和利用提供重要的理论依据。

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Pharmacodynamic Research of the Anti-inflammation Effect on PeiTu QingXin(PTQX)Granules

MO Xiu-mei1，LIU Jun-feng1，CHEN Yu-xing2，ZENG Xiao-hui2，XUE Su-qing1，ZHAO Wei3，CHEN Dan-can1△
(1.Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine(TCM)，Guangzhou 510120，China;2.Guangdong Provincial Institute of TCM，Guangzhou 510095，China;.3.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510004，China)

Objective:To observe the effect on anti-inflammation of PeiTu QingXin(PTQX)granules.Method: Selecting the modols of xylene-induced mouse ear swelling、abdominal cavity capillary permeability increased by aceticacid and cotton pellet granuloma in rats for the study，Treated with PTQX granules，and observing the manifestations to deducing the anti-inflammation eflect of drugs.Results:All doses groups of PTQX granules can obviously reduce xylene-induced mouse ear swelling、aceticacid induced abdominal cavity capillary permeability increasing and cotton pellet granuloma in rats.Conclusion:PTQX granules has well anti-inflammatory propertiem.Anti-inflammatory effect of PTQX granules is similar to indometacin and Xiaofengzhiyang granules.

PeiTu QingXin(PTQX)granules;atopic dermatits;anti-inflammation eflects

R758.2

B

1006-3250(2015)06-0744-03

2015-04-08

广东省中医药管理局(粤中医［2013］17号);广东省财政厅(粤财工［2014］76号，2014KT1524);广东省财政厅(粤财工［2013］134号);广东省财政厅(粤财工［2011］572号)

莫秀梅，主治医师，医学博士，从事中医药治疗变态反应性皮肤病的临床与研究。

△通讯作者:陈达灿，教授，博士研究生导师，从事中医药治疗变态反应性皮肤病的临床与研究，Tel:020-81887233，E-mail:4910702@163.com。