增液润燥汤对干燥综合征模型小鼠颌下腺IL-17表达的影响*

李纪高，李增变，靳东亮，周 全

(1.河南中医学院第一附属医院，河南 郑州450000； 2.郑州市中医院，河南 郑州 450007； 3.新郑市中医院，河南 新郑 451100)

·实验研究·

增液润燥汤对干燥综合征模型小鼠颌下腺IL-17表达的影响*

李纪高1，李增变2，靳东亮3，周 全1

(1.河南中医学院第一附属医院，河南 郑州450000； 2.郑州市中医院，河南 郑州 450007； 3.新郑市中医院，河南 新郑 451100)

目的：观察增液润燥汤对干燥综合征模型小鼠颌下腺IL-17表达的影响，探讨该方治疗干燥综合征的作用机制。方法：采用弗氏完全佐剂及同种鼠颌下腺抗原联合诱导干燥综合征小鼠模型。以增液润燥汤灌胃治疗，并以白芍总苷胶囊灌胃作为对照。ELISA法检测各组小鼠颌下腺IL-17的表达。结果：与正常对照组对比，模型对照组、白芍总苷组和增液润燥汤低、中剂量组颌下腺IL-17表达升高，差别有统计学意义(P<0.05)，增液润燥汤高剂量组颌下腺IL-17较之差别无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组对比，增液润燥汤低、中、高剂量组与白芍总苷组颌下腺IL-17表达降低，差别有统计学意义(P<0.05)。与白芍总苷组对比，增液润燥汤低、中剂量组颌下腺IL-17表达无统计学意义(P>0.05)，增液润燥汤高剂量组颌下腺IL-17表达较之差别有统计学意义(P<0.05)。结论：增液润燥汤能够下调干燥综合征模型小鼠颌下腺IL-17，此是其治疗干燥综合征的作用机制之一。

干燥综合征;白介素-17;增液润燥汤；药效学；动物模型；小鼠

干燥综合征(Sjogren'ssyndrome,SS)是一种以侵犯唾液腺和泪腺等外分泌腺为主的慢性炎症性自身免疫病[1]，以明显的口眼干燥为特征，可造成全身多脏器损害。增液润燥汤基于中医津液的代谢理论组方，治疗干燥综合征有较好的临床疗效。本课题观察了增液润燥汤对干燥综合征模型小鼠颌下腺IL-17的影响，以探索本方治疗SS的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动 物

SPF级BALb/c品系小鼠60只，雌性，体质量18～20g，购自河南省实验动物中心，许可证号：SCXK(豫)2010-0002。

1.2 药品、试剂与仪器

增液润燥汤由北沙参15g、天冬15g、炙紫菀10g、知母10g、乌梅10g、桔梗15g、桃仁10g、制附子6g、炙甘草6g组成。药物均用颗粒剂，由四川新绿色药业有限公司生产，购自河南中医学院第一附属医院。白芍总苷胶囊，宁波立华制药有限公司产品，批号110512；百白破疫苗，武汉生物制品研究所有限责任公司产品，批号20130815-4。TU-1901紫外线可见分光光度计，北京普析新通用仪器有限责任公司产品；冷冻离心机，美国Kendro实验室产品公司产品；T10BS25型组织匀浆机，德国IKA公司产品。

1.3 模型的建立与分组

①抗原的制备：取出同种鼠的颌下腺，剔除淋巴结，放入PBS缓冲液中，充分匀浆，10 000～14000g转速、4 ℃条件下匀速离心5min，取上清液，采用5722分光光度计按考马斯亮蓝比色法测定蛋白抗原含量，将蛋白与弗氏完全佐剂乳化，最终得到质量分数为400mg/L的抗原溶液。②抗原的注射：SPF级BALb/c品系小鼠60只，随机分成正常对照组、模型对照组、白芍总苷组和增液润燥汤低、中、高剂量组，每组10只。第0，14天，除正常对照组外，每只小鼠两侧腹股沟皮下注射抗原溶液， 每侧腹股沟50μL，即每只小鼠注射0.1mL抗原；首次免疫后第2，7天，除正常对照组外，每只小鼠各腹腔注射0.05mL白百破联合疫苗。

1.4 给药方法

自造模第1天开始，正常对照组、模型对照组给予蒸馏水(20μL/g)灌胃，白芍总苷组给予白芍总苷(234μg/g)灌胃，增液润燥汤低、中、高剂量组依次给予增液润燥汤4,8,12mg/g灌胃，1d1次，直至第60天。

1.5 检测指标

第61天摘眼球法处死小鼠，进行相关处理。将冻存于-70 ℃的小鼠颌下腺组织取出,加入预冷的生理盐水,在冰浴中匀浆,离心,取上清液,测定颌下腺IL-17。操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.6 统计学方法

2 结 果

与正常对照组对比，模型对照组、白芍总苷组和增液润燥汤低、中剂量组小鼠颌下腺IL-17表达升高，差别有统计学意义(P<0.05)，增液润燥汤高剂量组颌下腺IL-17较之差别无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组对比，增液润燥汤低、中、高剂量组与白芍总苷组颌下腺IL-17表达降低，差别有统计学意义(P<0.05)。与白芍总苷组对比，增液润燥汤低、中剂量组颌下腺IL-17表达无统计学意义(P>0.05)，增液润燥汤高剂量组颌下腺IL-17表达较之差别有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组小鼠颌下腺IL-17表达对比

注：与正常对照组对比，* P>0.05，** P<0.05；与模型对照组对比，## P<0.05；与白芍总苷组对比，△ P>0.05，△△ P<0.05。

3 讨 论

《素问·阴阳应象大论》中 “燥盛则干”的理论与干燥综合征口干、眼干的临床表现相吻合，多数医家将干燥综合征归属于中医“燥证”范畴。《素问玄机原病式·燥》“诸涩枯涸，干劲皴揭，皆属于燥”的病机，说明干燥症状的出现，总在于津液的失衡失润，或由津液的亏损耗夺，或由津液敷布受阻，最终津液代谢失调而致。《素问·经脉别论》提出了津液的代谢过程，“饮入于胃，游溢精气，上输于脾，脾气散精，上归于肺，通调水道，下输膀胱，水精四布，五经并行。”说明津液的代谢过程与脾胃肺肾经脉相关。另外，若瘀血痹阻经脉，影响津液的输布，致津液相对不足，使局部组织缺乏津液润泽，也可出现干燥症状。在现代医学中，浸润SS患者泪腺和唾液腺的T淋巴细胞一直是研究的热点。目前对SS发病机制的研究多围绕T淋巴细胞产生的炎性因子进行。大量的临床研究及动物实验表明：SS的发病与IL-17表达显著增高有关，SS患者血清IL-17水平明显高于对照组[2]。鉴于此，治疗该病时，针对IL-17的治疗方案在阻止腺体损害方面可能有效。

增液润燥汤以养阴生津为主，辅以宣肺、清胃、健脾、温肾、活血等治法。方中北沙参、知母养肺之阴，益胃生津；天冬入肺、肾经，清肺润燥，滋肾阴；紫菀、桔梗入肺经，长于开肺郁，宣肺气；桃仁活血化瘀，疏通津液运行之通道；乌梅酸甘化阴，生津止渴；制附子温肾阳，以助气化；炙甘草调和诸药。诸药合用，津液生化有源，输布正常，故能取得很好的疗效。

本实验结果显示：高剂量增液润燥汤能明显抑制颌下腺IL-17的表达，且作用优于低、中剂量及白芍总苷胶囊。提示：增液润燥汤可能通过下调颌下腺IL-17表达来发挥抗炎作用，此可能是其治疗干燥综合征的作用机制之一。

[1]张缪佳.风湿性疾病诊断流程与治疗策略[M].1版.北京:科学出版社,2007:163.

[2]朱建东,王忠全,张品南.干燥综合征患者Th17与调节性T细胞免疫失衡的观察[J].放射免疫学杂志,2012,25(3):301-303.

(编辑 陶 珠)

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1001-6910(2015)02-0058-02

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10.3969/j.issn.1001-6910.2015.02.28

周全，副主任医师，doctorzq@sina.com

河南省基础与前沿技术研究计划项目(132300410077)

2014-09-25；

2014-11-24