支气管灌洗液P16基因启动子甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用

2015-04-04崔超张军李淼石锦军吴万鹏谷俊东

山东医药 2015年7期

关键词：肺肿瘤非小细胞肺癌甲基化

崔超，张军，李淼，石锦军，吴万鹏，谷俊东

(1天津医科大学研究生院，天津 300070；2天津市海河医院；3天津市人民医院)

支气管灌洗液P16基因启动子甲基化在非小细胞肺癌诊断中的应用

崔超1,2，张军2，李淼2，石锦军2，吴万鹏2，谷俊东3

(1天津医科大学研究生院，天津 300070；2天津市海河医院；3天津市人民医院)

摘要：目的观察支气管灌洗液P16基因启动子甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)诊断中的临床应用价值。方法检索Pubmed、Medline、CNKI、维普及万方数据库，收集公开发表的关于支气管灌洗液P16基因启动子甲基化用于NSCLC诊断的相关研究。采用STATA11.0统计软件对诊断试验的敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比及ROC曲线下面积进行Meta分析。结果共纳入10项研究。支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断NSCLC的敏感性为0.61(95%CI:0.57～0.65)，特异性为0.81(95%CI:0.78～0.85)，阳性似然比为5.71(95%CI:2.56～12.73)、阴性似然比为0.47(95%CI:0.40～0.57)、诊断ROC曲线下面积为0.72(95%CI:0.68～0.76)。结论支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断肺癌的敏感性和特异性均较高，可作为NSCLC微创诊断方法。

关键词：肺肿瘤；非小细胞肺癌；P16基因；甲基化

近年来，肺癌表观遗传学成为肺癌领域的研究热点，非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织标本及支气管灌洗液中存在多基因启动子的甲基化改变，并有望成为肺癌无创诊断方法。P16基因是一种细胞周期相关基因，直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，在人类50%肿瘤细胞株发现有纯合子缺失，突变。有学者认为P16是比p53更重要的一种新型抗癌基因。已有研究[1]显示，在NSCLC患者肿瘤组织和其他体液(包括支气管灌洗液)中可以检测到P16基因启动子的甲基化改变并可作为诊断NSCLC的方法。因此，本研究采用Meta分析的方法观察支气管灌洗液中P16基因启动子甲基化在NSCLC诊断的中临床应用价值。

1资料与方法

1.1文献检索方法英文检索关键词为“P16/INK4A”、“lung cancer”、“lung carcinoma”、“methylation”，中文检索关键词为“肺癌”、“非小细胞肺癌”、“肺肿瘤”、“P16基因”、“甲基化”。检索Pubmed、Medline、CNKI、维普及万方等数据库，检索时间为1996年～2014年8月。收集公开发表的关于支气管灌洗液P16基因启动子甲基化用于NSCLC诊断的研究。

1.2 纳入与排除标准纳入标准：研究对象为病理学确诊的NSCLC患者；甲基化检查方法为甲基化特异性聚合酶链反应；原始研究提供P16基因启动子甲基化频率。排除标准：无病理学诊断的NSCLC患者或小细胞肺癌患者；甲基化检查方法不可靠；重复发表的文献或数据；原始研究中未提供P16基因启动子甲基化发生的频率。

1.3数据提取采用双人平行摘录方法，由两位研究者独立阅读所获文献题目和摘要，在排除明显不符合纳入标准的试验后，对可能符合纳入标准的试验阅读全文以最终确定是否符合纳入标准。两位评价者交叉核对纳入试验的结果，对有分歧而难以确定是否纳入的试验通过讨论或由第三位评价者决定其是否纳入。提取内容包括：①一般资料：题目、作者姓名、发表日期、文献来源；②研究特征：研究对象的一般情况、各组患者的基线可比性、诊断实验方法、诊断金标准；③结局指标：纳入诊断试验的敏感性、特异性、真阳性、假阳性、假阴性和真阴性。

1.4纳入研究质量评价按照“Cochrane手册提供的诊断试验质量评价标准”对每一篇入选文献的质量进行量化评价。对于Cochrane手册中的疾病谱系、选择标准、诊断金标准、疾病进展偏倚、部分参展偏倚等标准进行评价。对于每一条标准，如果入选文献中明确满足则为“Yes”；含糊不清则为“Unclear”；某条标准未提及则为“No”。对每一篇文献的质量评价采取双人平行评价的方法。

1.5统计学方法采用STATA11.0统计软件。统计学异质性采用Q统计量的I2检验来分析，各研究间不存在明显的异质性(双侧P>0.05)，采用固定效应模型合并数据；各研究间存在明显的异质性(P≤0.05)，采用随机效应模型合并数据。采用Begg法对发表偏倚进行量化检测。

2结果

2.1文献检索结果最终检索并纳入符合要求的文献共10篇[2～11]，其中来自中国的研究7篇，来自日本、意大利和希腊的研究各1篇。所有纳入的原始研究均提供了较为完整的数据资料。详见表1。

2.2纳入研究的质量评价纳入分析的10篇文献质量较高，所有纳入研究的文献均报道了纳入疾病的病谱的代表性，9篇文献报道了诊断试验的标准，只有4篇文献未报道是否实施了盲法。

2.3支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断NSCLC的敏感性和特异性以病理学诊断为金标准，支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断NSCLC的敏感性为0.61(95%CI:0.57～0.65)，特异性为0.81(95%CI:0.78～0.85)，阳性似然比为5.71(95%CI:2.56～12.73)、阴性似然比为0.47(95%CI:0.40～0.57)，详见表2。支气管灌洗液P16基因启动子甲基化诊断NSCLC的ROC曲线下面积为0.72(95%CI:0.68～0.76)。

2.4发表偏倚评价所有文献不存在发表偏倚(t=0.69，P>0.05)。

3讨论

肺癌是目前临床上最为常见的呼吸系统恶性肿瘤，近年来随着吸烟人数的增多，环境污染等因素的影响，我国肺癌发病率出现逐年升高的趋势。新近的流行病学数据显示，大约全球每年肺癌新发病例人数高达120万，死亡人数为100万[12]。肺癌从临床病理学角度一般分为NSCLC和小细胞肺癌，其中NSCLC约占所有肺癌发病人数的80%。临床流行病学资料显示，约80%的NSCLC患者确诊时已为晚期，大多发生远处转移，这些患者已无法接受根治性手术治疗，预后较差[13]。因此，需早期筛查NSCLC高危患者。

研究[14]显示，在NSCLC患者肿瘤组织中发现了众多基因启动子的甲基化改变，包括p16、MGMT、ECAD等，这些基因启动子的甲基化改变与其mRNA及相应蛋白表达降低有一定的联系。同时，这种抑癌基因启动子的甲基化改变在非肿瘤患者组织标本或体液中未能检测到。这种现象提示抑癌基因启动子甲基化检测有望成为NSCLC等实体肿瘤诊断的重要手段。近年来关于支气管灌洗液中p16基因启动子甲基化的相关文献较多，但其用于NSCLC临床诊断价值各家报道并不一致。因此，本研究采用循证医学的方法探讨支气管灌洗液中p16基因启动子甲基化用于NSCLC临床诊断的应用价值，已期为临床医务工作者提供一定的依据。本Meta分析结果显示，支气管灌洗液p16基因启动子甲基化诊断NSCLC的敏感性和特异性均较高，可作为肺癌微创诊断方法。

虽然本研究显示p16基因启动子甲基化用于NSCLC诊断有良好应用前景，但数据合并过程中存在较大的统计学异质性，这种异质性会对结果产生一定的影响。因此，有条件的情况下应进一步进行大规模的前瞻性诊断试验来进一步评估。

参考文献：

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[14] 齐战,杨大运.肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化状态观察[J].山东医药,2011,51(46):70-71.

(收稿日期：2014-10-08)

通信作者：谷俊东

基金项目：天津市卫生局科技基金项目(2012KZ040)。

中图分类号：R734.2