不同分子分型乳腺癌TOPⅡα表达与新辅助化疗疗效的相关性

不同分子分型乳腺癌TOPⅡα表达与新辅助化疗疗效的相关性

杨良权1，周东光1，娄欢欢2，李光辉1

(1秦皇岛市妇幼保健院，河北秦皇岛066000；2秦皇岛市开发区医院)

摘要：目的观察不同分子分型乳腺癌DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOPⅡα)表达与新辅助化疗疗效的相关性。方法化疗前经巴德针穿刺活检病理检查证实为乳腺癌的女性患者共141例，分子分型为Luminal A型28例、Luminal B型19例、三阴性型28例、Luminal B-like型35例、Her-2表达型31例，其乳腺癌组织中TOPⅡα表达阳性和阴性者分别为10例和18例、8例和11例、20例和8例、23例和12例、24例和7例。术前所有患者接受并完成新辅助化疗，评定化疗疗效，分析各型乳腺癌的疗效与TOPⅡα表达的关系。结果Luminal A型、Luminal B型、三阴性型、Luminal B-like型、Her-2表达型患者中TOPⅡα表达阳性和阴性者的化疗有效率分别为60.0%(6/10)和55.6%(10/18)、62.5%(5/8)和54.5%(6/11)、90.0%(18/20)和87.5(7/8)、91.3%(21/23)和50.0%(6/12)、95.5%(23/24)和42.9%(3/7)；在Luminal B-like型、Her-2表达型乳腺癌中，TOPⅡα表达阳性和阴性者的化疗有效率相比，分别为P<0.05、P<0.01；Luminal A型、Luminal B型、三阴性型乳腺癌中，TOPⅡα表达阳性和阴性者的化疗有效率相比，P均>0.05。结论 在分子分型为Luminal B-like型、Her-2表达型乳腺癌中，TopⅡα阳性表达者新辅助化疗的有效率高于TopⅡα阴性者，TopⅡα阳性表达可作为预测Luminal B-like型、Her-2表达型乳腺癌新辅助化疗疗效的指标。

关键词：乳腺肿瘤；乳腺癌；乳腺癌分子分型;DNA拓扑异构酶Ⅱα；新辅助化疗；多药耐药

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.030

中图分类号：R737.9文献标志码：B

doi[4] Lare S , Arnould L , Apetoh L, et al. Pathologic complete response to neoadjuvant chemotherapy of breast carcinoma is associated with the disappearance of tumor-infiltrating foxp3+ regulatory T cells [J]. Clin Cancer Res, 2008,14(8):2413-2420.

收稿日期：(2015-07-22)

随着分子生物学的发展，以肿瘤分子表达差异为基础的乳腺癌分子分型对于解决肿瘤的异质性、分期的合理性、预后判断的准确性及乳腺癌的个体化治疗等问题将有重要意义。20世纪70年代开始的乳腺癌新辅助化疗，目的是降低肿瘤分期以提高手术的切除率和保乳手术率，同时可以了解化疗药物的敏感性[1～3]。影响乳腺癌化疗疗效的因素有很多，而肿瘤细胞的多药耐药是重要原因之一，多药耐药产生的机制是多基因参与、多步骤综合作用的结果。DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOP Ⅱα)作为耐药基因之一，是目前研究的热点。本研究对不同分子分型乳腺癌TOPⅡα表达与新辅助化疗疗效的相关性进行了观察，以便为乳腺癌制定个体化方案提供参考。

1资料与方法

2012年1月～2014年10月秦皇岛市妇幼保健院收治的乳腺癌患者141例，均为女性，年龄31～61岁；临床分期为Ⅱ期86例、Ⅲ期55例。纳入标准：①女性，可手术治疗的乳腺癌，化疗前经超声、CT、骨扫描等检查排除远处转移，无同期发生的其他器官的恶性疾病；②入院前未接受内分泌治疗、化疗及放疗等影响肿瘤大小、临床分期、淋巴结状态的相关治疗；③有可测量或可评价的肿瘤病灶，钼钯或B超可测病变直径≥3 cm；④化疗前经巴德针穿刺活检病理检查证实为乳腺癌，且均为浸润性导管癌，完善雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB-2、Ki-67、TOPⅡα检查；⑤无明显化疗禁忌；⑥新辅助化疗后接受保乳术或改良根治术，术后大体标本行常规病理学检查；⑦按2013中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范的定义分类标准对乳腺癌进行分子分型。排除标准：①有远处转移的Ⅳ期乳腺癌患者；②有化疗禁忌、不能耐受化疗的乳腺癌患者。

术前所有患者按EC×4→T×4的3周方案化疗进行化疗(EC为表柔比星100 mg/m2、第1天,环磷酰胺600 mg/m2、第1天；T为多西他赛100 mg/m2)。2周期后进行疗效评估，期间评估无效(SD和PD)者中转手术，有效(CR和PR)者完成所有周期化疗后14～21 d接受手术治疗。

计算化疗有效率[有效率=(CR例数+PR例数)/病例总数×100%]。分析各型乳腺癌化疗疗效与TOPⅡα表达的关系：采用Excel表格建立乳腺癌新辅助化疗及相关因素数据库，进行资料的筛选分析，转入SPSS17.0统计软件进行统计分析，计数资料组间比较采用χ2检验和Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

141例乳腺癌分子分型为Luminal A型28例、Luminal B型19例、三阴性型28例、Luminal B-like型35例、Her-2表达型31例，其乳腺癌组织中TOPⅡα表达阳性和阴性者分别为10例和18例、8例和11例、20例和8例、23例和12例、24例和7例。

Luminal A型、Luminal B型、三阴性型、Luminal B-like型、Her-2表达型患者中TOPⅡα表达阳性和阴性者的化疗有效率分别为60.0%(6/10)和55.6%(10/18)、62.5%(5/8)和54.5%(6/11)、90.0%(18/20)和87.5(7/8)、91.3%(21/23)和50.0%(6/12)、95.5%(23/24)和42.9%(3/7)；在Luminal B-like型、Her-2表达型乳腺癌中，TOPⅡα表达阳性和阴性者的化疗有效率相比，分别为P<0.05、P<0.01；Luminal A型、Luminal B型、三阴性型乳腺癌中，TOPⅡα表达阳性和阴性者的化疗有效率相比，P均>0.05。

3讨论

乳腺癌的治疗已进入分子生物学时代，以分子分型为基础的个体化治疗更有针对性，对提高乳腺癌化疗效果、避免不必要的过度治疗及改善预后具有重要意义。对患者在新辅助化疗前后通过体检或影像学检查发现可测量的病灶，可从临床上评估化疗效果，化疗结束后行手术治疗者还可从病理学角度再次评估乳腺癌化疗效果。因此，有学者[4]认为乳腺癌新辅助化疗可以预测化疗效果。但新辅助化疗的疗效有时不甚理想，而肿瘤的耐药性是影响其疗效的原因之一。桂贤等[5]报道，TOPⅡα表达高低与肿瘤耐药成反比，其所介导的耐药与细胞内药物靶酶含量及活性改变或DNA修复机制有关，主要机制如下：①TOPⅡα基因点突变或缺失：等位基因的突变、重排、甲基化、TOPⅡα 调节因子改变和TOPⅡα以外基因的改变，引起肿瘤细胞中TOPⅡα 蛋白减少和催化活性降低，改变了TOPⅡα蛋白的氨基酸序列和对药物的敏感性，导致药物作用靶分子减少，引起药物诱导DNA断裂减少。②TOPⅡα磷酸化水平提高：TOPⅡα的高磷酸化与其催化活性和易解离复合物形成呈负相关，酶的去磷酸化可降低酶的活性，也可对药物的敏感性产生影响，从而产生耐药。③ TOPⅡα水平降低：TOPⅡα和TOPⅡβ对药物的敏感性不尽相同，天然药物大多作用于TOPⅡα，而在形成耐药后Top IIα 减少，这种亚型的转换一般发生在基因水平，使抗癌药物的作用靶点减少或丧失，产生耐药[6]。因此，检测肿瘤细胞中TOPⅡα蛋白含量对筛选抗癌药物很重要，可作为判定乳腺癌对抗癌药物的敏感性或抗药性的指标[7]，有助于临床对乳腺癌化疗药物的选择。以蒽环类序贯紫杉类为主的化疗方案是目前最为常用的乳腺癌辅助化疗方案。TOPⅡα表达水平是药敏基础，其高表达者对TOPⅡα 抑制剂敏感，肿瘤的预后也较好；而TOPⅡα低表达或活性下降则导致TOPⅡα抑制剂细胞毒作用降低，使肿瘤对抗癌药物敏感性下降、耐药性增高。Lumnianl A型和Luminal B型乳腺癌中TOPⅡα呈低表达，抗癌药物的作用靶点减少，化疗的有效性较差。在Her-2扩增的Luminal B-like和Her-2表达型中，新辅助化疗的有效率分别为91.3%和95.5%，这与TOPⅡα高表达及Her-2扩增有关。芬兰Tampere大学[8]首先报道了TOPⅡα基因的异常(扩增或缺失)，其体外实验研究提示 TOPⅡα和Her-2基因均扩增的乳腺癌细胞对蒽环类药物更加敏感，而Her-2扩增、TOPⅡα不扩增的细胞对蒽环类药物敏感性差。Nielsen等[9]通过67例乳腺癌患者经阿霉素治疗后的研究结果证实，TOPⅡα扩增与Her-2呈正相关，而TOPⅡα扩增亦与其临床疗效关系密切，即95%的患者当TOPⅡα与Her-2共扩增时其疗效明显高于其他亚组(P=0.038)。蒽环类药物化疗的疗效可通过TOPⅡα基因表达情况来预测，而蒽环类疗效通过Her-2预测其实质是TOPⅡα表达发挥作用的[10]。这与本研究结果一致，证实了Luminal B-like型和Her-2表达型乳腺癌中TOPⅡα的表达较其他分子分型乳腺癌新辅助化疗的有效率更高。但杨燕华等[11]报道，蒽环类药物可以通过多种机制诱导细胞的死亡，在乳腺癌中蒽环类药物杀死肿瘤细胞的机制不一定只是通过抑制TOPⅡα，可能比预测的更为复杂，还需进一步探索。

三阴性乳腺癌是一种特殊类型的乳腺癌，具有特殊的生物学行为及临床病理特征，由于缺乏内分泌治疗及针对Her-2的分子靶向治疗方法，其治疗手段的选择相对于其他类型乳腺癌也就受到限制，目前公认的是以化疗为主的综合治疗手段。理论上讲，TOPⅡα阳性者较阴性者的新辅助化疗有效率高，但在本研究中三阴性型乳腺癌患者TOPⅡα阴性和阳性者的化疗有效率差异并无统计学意义，这可能与三阴性乳腺癌自身的特殊性、影响新辅助化疗的其他因素、样本量不足、未予具体分型等有关。在后续研究中，将加大样本量，具体分型，进行多因素分析，进一步探讨其TOPⅡα在三阴性乳腺癌中的表达与新辅助化疗疗效的关系。

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[3] Gianni L, Eiermann W, Semiglazov V, et al. Neoadjuvant chemotherapy with trastuzumab followed by adjuvant trastuzumab versus neoadjuvant chemotherapy alone, in patients with Her2-positive locally advanced breast cancer (the NOAH trial): a randomised controlled superiority trial with a parallel Her2-negative cohort[J]. Lancet, 2010,375(9712):377-384.

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[9] Nielsen KV, Müller S, Moller S，et al. Aberrations of Erb-2 and TOP2A genes in breast cancer [J]. Mol Oncol, 2010,4(2):161-168.

[10] Mukherjee A, Shehata M, Moseley P, et al. Topo2α protein expression predicts response to anthracycline combination neo-adjuvant chemotherapy in locally advanced primary breast cancer [J]. Br J Cancer, 2010,103(12):1794-1800.

[11] 杨燕华，王树森.乳腺癌中TOP2A与蒽环类药物关系的研究进展[J].中国普外基础与临床杂志，2014,21(8)：1029-1033.