PDIA3在足月胎膜早破患者胎盘、胎膜组织中的表达及意义

张展，魏静，张琳琳，常爱民，薛闪辉，王金铭(郑州大学第三附属医院，郑州450052)

PDIA3在足月胎膜早破患者胎盘、胎膜组织中的表达及意义

张展，魏静，张琳琳，常爱民，薛闪辉，王金铭
(郑州大学第三附属医院，郑州450052)

摘要:目的观察足月胎膜早破( tPROM)患者胎盘、胎膜组织中蛋白质二硫键异构酶A3( PDIA3)的表达变化，并探讨其临床意义。方法选择tPROM患者30例(观察组)、正常足月产妇30例(对照组)，分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测两组胎膜、胎盘组织中的PDIA3蛋白和mRNA。结果观察组胎盘、胎膜组织中PDIA3蛋白阳性表达率分别为93.33%、86.67%，对照组分别为60.00%、50.00%，P均＜0.05。观察组胎盘、胎膜组织中PDIA3 mRNA相对表达量分别为2.025±0.180、1.440±0.053，对照组分别为0.958±0.418、1.024± 0.049，两组比较，P均＜0.05。结论tPROM患者胎盘、胎膜组织中PDIA3呈高表达，其可能参与了tPROM的发生、发展。

关键词:胎膜早破;蛋白质二硫键异构酶A3;胎膜组织;胎盘组织

胎膜早破( PROM)是指在临产前胎膜自然破裂，发生于孕周≥37周者称为足月PROM ( tPROM)，可导致早产率升高、围生儿病死率增加、宫内感染率及产褥感染率均升高等［1］。目前，其发病机制尚未明确。蛋白质二硫键异构酶( PDI)是一种主要存在于哺乳动物和酵母内质网腔的多功能应激相关蛋白［2］，蛋白质二硫键异构酶A3( PDIA3)是该家族巯基蛋白氧化还原酶的重要组成部分。研究发现，未足月PROM患者胎盘组织中PDIA3蛋白表达上调［3］，但尚未见其在tPROM患者胎盘、胎膜组织中表达情况的报道。2014年5～12月，我们检测了PDIA3在tPROM患者胎盘、胎膜组织中的表达水平，探讨其在tPROM发生、发展中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选择郑州大学第三附属医院收治的经剖宫产分娩的tPROM患者30例(观察组)，年龄( 27.1±3.7)岁，孕( 38.6±1.9)周;初产妇18例，经产妇12例。排除临产前行人工破膜、用药物诱导而致破膜、发育异常或者骨盆畸形、病理妊娠及不明原因引起的发热者。另选择同期正常足月经剖宫产分娩的产妇30例(对照组)，年龄( 26.6±4.1)岁，孕( 38.9±1.4)周;初产妇16例，经产妇14例。两组均为单活胎，剖宫产指征为骨盆狭窄、患者要求等。两组均签署知情同意书，一般资料具有可比性。

1.2样本获取和组织切片两组均收集脐带附着处母体面胎盘组织和胎膜破口处2 cm×2 cm大小的胎膜，4%甲醛溶液固定、4℃过夜，石蜡包埋后切片备用。

1.3胎盘、胎膜组织PDIA3蛋白检测采用免疫组化法，操作均严格按照使用说明书进行;以兔抗人PDIA3抗体( 1∶100倍稀释)为一抗，对切片进行染色，DAB显色。结果判定: PDIA3蛋白主要表达在细胞质，呈黄色颗粒状。无阳性细胞为0分，阳性细胞≤10%为1分，10%～50%为2分，50%～75% 为3分，＞75%为4分;棕褐色染色计3分，棕黄色计2分，淡黄色计1分，无染色计0分。两项评分乘积≤3者阴性，＞3者为阳性。

1.4胎盘、胎膜组织PDIA3 mRNA检测采用实时荧光定量PCR法。利用超纯RNA提取试剂盒提取总RNA，利用逆转录试剂盒合成cDNA;参照Gen-Bank中人PDIA3基因序列，应用Primer Express 5.0软件设计引物。PDIA3上游引物为5'-CAGCCAGCAACTTGAGGGA-3'，下游引物为5'-GTTAGTGAGATGTGAAGGACGAA-3'，扩增片段为119 bp;以GAPDH作为内参照。反应体系10 μL，反应条件: 95℃、10 min，95℃、30 s，60℃、1 h，35个循环。mRNA的相对表达量采用2－ΔΔCT进行计算。操作重复3次，取平均值。

1.4统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计量资料用珋x±s表示，两组间比较用独立样本t检验及

χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组PDIA3蛋白表达比较观察组胎盘、胎膜组织中PDIA3蛋白阳性表达率分别为93.33%、86.67%，对照组分别为60.00%、50.00%。两组比较，P均＜0.05。

2.2两组PDIA3 mRNA表达比较观察组胎盘、组织中PDIA3 mRNA相对表达量分别为2.025± 0.180、1.440±0.053，对照组分别为0.958± 0.418、1.024±0.049。两组比较，P均＜0.05。

3　讨论

PDI家族是一类具有分子伴侣活性的在内质网中起作用的巯基—二硫键氧化还原酶，属折叠酶［4］，可催化内质网中新生肽链的氧化折叠，并在内质网相关的蛋白质降解途径、蛋白质转运、钙稳态、抗原呈递、病毒入侵等方面起重要作用。PDIA3 是PDI家族重要成员，是一种多功能分子伴侣。研究发现，缺氧内皮细胞中PDIA3蛋白及mRNA水平均明显升高，从而降低内皮细胞活力、促使内皮细胞适应缺氧环境。PDIA3与机体免疫密切相关，并且通过绑定特定的DNA片段参与应激反应［5］，PDIA3可直接进入主要组织相容性复合体Ⅰ类( MHC-Ⅰ)分子的肽结合槽中并与其结合，后与免疫原性多肽结合并呈递至CD+8T细胞，活化T细胞，特异性杀伤感染细胞［6］。目前发现，PDIA3与血栓形成、胚胎发育、阿尔茨海默病、肥胖相关性弱精症、子宫内膜癌、帕金森等有关［7～10］。

本研究发现，观察组胎盘、胎膜组织中PDIA3表达水平明显高于对照组。其作用机制可能为:①生殖道病原微生物上行感染或者血行感染通过胎膜、胎盘组织介导，引起母胎界面促炎细胞因子上升，激活基质金属蛋白酶活性，使胶原纤维降解。PDIA3分子可通过作用于MHC-Ⅰ分子，参与抗原提呈过程，特异性地直接杀伤被感染的细胞。②创伤、羊膜腔压力升高、宫颈内口松弛、胎儿先露部与骨盆入口衔接不好、胎膜发育不良等原因可导致tPROM发生，继发性引起炎症反应，最终导致热休克反应发生，合成PDIA3等多种热休克蛋白［11］。胎盘、胎膜组织缺血、缺氧或炎症时，可导致分泌蛋白过量或未折叠和错误折叠蛋白的累积，诱导PDIA3的表达，维持细胞必需的蛋白质构象，保护其生命活动。③胎盘、胎膜组织中可见凋亡细胞，细胞过度凋亡可导致胎膜弱化、老化，最终导致tPROM。因此，PDIA3过表达可能参与tPROM的发生、发展，有望作为诊断PROM的一种生物标记物。

参考文献:

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收稿日期:( 2015-05-03)

基金项目:河南省郑州市科技计划项目( 131PCXTD624)。

文章编号:1002-266X( 2015)30-0053-02

文献标志码:B

中图分类号:R714.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.30.022