胶原纤维和弹力纤维双重染色方法的改进

孟峰芳

（武夷山市立医院病理科 福建 武夷山 354300）

前言

胶原纤维染色的作用

（1）与淀粉样物的区别：胶原纤维发生病变如坏死或透明变性时，它与淀粉样物在HE染色时被染为粉红色，不好区别。应用本染色法，能将胶原纤维染为红色，而淀粉样物将被染为黄色。（2）应用与间胚叶来源肿瘤的区别：如纤维瘤（肉瘤），平滑肌、横纹肌瘤（肉瘤），神经纤维瘤（肉瘤）、恶性纤维组织细胞瘤等，由于都含有大量的纤维，HE 染色均为红色。应用本染色法，可将胶原纤维染成红色，肌源性组织被染为黄色。（3）应用与其他慢性炎症的区别。如慢性阑尾炎，疤痕愈合时，纤维愈复病灶可被染为鲜红色，SARS病患者愈合后有的肺部可出现疤痕，粘连，此时可显红色。（4）可用于鉴定肝硬化及创伤组织的修复程度。肝硬化时的肝组织有许多不同大小的假小叶，用上述方法显示时，可显示出不同的组织结构。本法可将包绕假小叶的胶原纤维染成红色。

弹力纤维染色的作用

（1）动静脉的辨认：在血管病变时是动脉还是静脉以及是否为血管壁难辨认时，弹力纤维染色有助于辨认。有弹力板者为动脉，有弹力纤维构成血管轮廓者为血管。弹力纤维抗损伤能力较强，故弹力性纤维构成血管轮廓不易损坏。（2）弹力纤维瘤的诊断：弹力纤维染色可见瘤样病变内有大量弹力纤维增生，非真性肿瘤。（3）心血管先天性弹力组织增生，这组疾病有先天性内膜炎及冠状动脉的弹力纤维组织增生。弹力纤维染色有助于诊断。（4）弹力纤维损伤性疾病：这组疾病有肺气肿、动脉粥样硬化、大动脉中层炎症、肺癌中肿瘤细胞的胸膜侵犯程度等。弹力纤维染色有助于这些疾病的观察诊断。（5）一些与弹力纤维变化有关的皮肤疾病的诊断与鉴别诊断：这组疾病有皮肤松弛症，萎缩性硬化性苔藓等，其诊断与鉴别诊断常依赖于弹力纤维染色，以观察弹力纤维变化。高质量的染色方法对显示这两种纤维成分具重要意义，现介绍方法如下。

【试剂配制】

（1）天狼星红（Siriured）饱和苦味酸液1%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液90ml。

（2）维多利亚蓝（Victoria blue）染色液 维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5分钟。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中，继续煮沸3分钟，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸一起放在60。C 恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再将其溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g，放置至成熟后使用。

【染色方法】

（1）组织切片厚6um，脱蜡至水。

（2）将切片入70%乙醇中洗2min。

（3）直接浸入盛有维多利亚蓝液瓶中染0.5h。

（4）入95%乙醇中分色数秒钟。

（5）蒸馏水洗2min。

（6）用天狼星红（Siriured）饱和苦味酸液染切片15min。

（7）无水乙醇直接分化脱水。

（8）二甲苯透明，中性树胶封固。

【结果】

胶原纤维呈红色，弹力纤维成蓝绿色，红细胞及肌肉呈黄色。（图1，2）

【讨论】

1.胶原、弹力纤维染色切片的厚度要厚于HE 染色，这样做出来的切片染色清晰，对比度好。

2.天狼星红饱和苦味酸液分别配制，临用时混合。染色封固后的切片，须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩

注：在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维。

Ⅰ型胶原纤维：紧密排列，显示很强的双折光性，呈黄色或红色的纤维。

Ⅱ型胶原纤维：显示弱的双折光，呈多种色彩的疏松网状分布。

Ⅲ型胶原纤维：显示弱的双折光，呈绿色的细纤维。

Ⅳ型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜，呈淡黄色。

3.维多利亚蓝液用乙醇分色后，要立即在水中浸洗。浸洗后显微镜下观察分色程度，分色不够可再用乙醇分色。本试剂配置时间越久越好，新配置的试剂成熟时间大概需要几个月，笔者所用试剂配制于2003年，现使用依然染色鲜艳、快速。染色后回收，可重复使用，平时密闭遮光保存。

众所周知，特殊染色大都为退行性染色，本法重复性好，对比清晰，色彩鲜艳且不易褪色。

［1］ 王伯沄.病理学技术［M］.北京：人民卫生出版社，2001：149－151