miniVIDAS在检测生殖和泌尿系沙眼衣原体感染中的应用探讨

单吉苹 王双力

(1哈尔滨市第一医院 黑龙江 哈尔滨 150000;2武警黑龙江总队医院 黑龙江 哈尔滨 150076)

miniVIDAS在检测生殖和泌尿系沙眼衣原体感染中的应用探讨

单吉苹1王双力2

(1哈尔滨市第一医院 黑龙江 哈尔滨 150000;2武警黑龙江总队医院 黑龙江 哈尔滨 150076)

目的：应用miniVIDAS对生殖和泌尿系中尿液和分泌物样本进行沙眼衣原体检测，从而论证其敏感性和特异性。方法：收集疑似或确诊泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物标本共490份。应用miniVIDAS对尿液和分泌物样本进行沙眼衣原体检测，结果与实时荧光定量聚合酶链反应(realtime PCR)进行比较，从而评价其在尿液和分泌物标本检测中的敏感性和特异性。结果：1、拭子样本检测结果:应用miniVIDAS共检出20份阳性样本，经与real-time PCR的结果比对，其结果高度一致;对280份阴性结果与real-time PCR的结果比对，其结果也完全一致。从而说明miniVIDAS在检测拭子样本的敏感度、特异度等方面其结果均达到100%。2、尿液样本检测结果:应用miniVIDAS共检出30份阳性样本，与real-time PCR结果比对后，10份为真阳性，20份为假阳性。160份阴性样本经比后全部一致。经过一致性分析，miniVIDAS检测尿液样本的敏感度为100%，特异度为87.8%。结论：应用miniVIDAS对生殖和泌尿系中尿液和分泌物样本进行沙眼衣原体检测与real-time PCR的结果未达到高度一致。可能是由于尿液中含有与沙眼衣原体抗原非常相似的其他微生物，从而与固相载体的抗体进行非特异性结合，而令尿液检测衣原体的特异度偏低，说明miniVIDAS对尿液样本沙眼衣原体感染的检测并不适合做为筛选实验。

miniVIDAS;沙眼衣原体;尿液;分泌物

本实验方法是通过将法国生物梅里埃miniVIDAS的酶联荧光免疫法所得结果与实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)进行比较，从而评价其在尿液和分泌物标本检测中的敏感性和特异性。

一、材料与方法

1.标本来源：2014年6月至12月由哈尔滨市第一医院检验科收集的疑似或确诊泌尿生殖道感染患者尿液及分泌物标本共490份。其中男性拭子样本150份，女性拭子样本150份。男性首段尿样本110份，女性首段尿样本80份。

1.1 标本采集方法：

1.1.1 尿液样本采集∶采集前先用生理盐水清洁尿道口，采集前至少2h不要排尿，用高压无菌试管收集10-00ml的首段尿液;取离心沉淀物.

1.1.2 拭子样本采集：首先在采样前先用生理盐水清洗男性尿道口和女性宫颈外分泌物，用专用棉拭子(或宫颈刷)于尿道口或宫颈口取尿道分泌物或宫颈口分泌物，密闭送检;

2.仪器与试剂：

2.1 仪器：法国生物梅里埃公司miniVIDAS全自动荧光酶免疫分析仪、Roche LightCycler2.0检测分析仪、高速低温离心机，生物安全柜，恒温水浴箱，

2.2 试剂：miniVIDAS配套试剂盒和达安基因沙眼衣原体核酸检测试剂盒。

3.使用Roche LightCycler2.0检测分析仪检测衣原体：

取PCR反应管，分别加入待测标本及阴阳性临界值质控品 2μl，6500rpm离心，之后将各反应管按顺序放入圆形卡盘，按照仪器操作程序进行PCR扩增;调整荧光数值(Fluorescene)为F1/F2，调整噪声容限，使阴性质控品Ct值为40，临界阳性质控品Ct为32～34，强阳性质控品 Ct为18～20，最后记录仪器自动分析计算出的Ct值。

4.使用miniVIDAS检测衣原体：

实验开始前先将固相载体和试剂条置于室温环境下15min，然后在装有样本的试管中加入2mlVIDAS样本处理液，室温30min后将试管震荡混匀，然后置于95℃水30min。冷却混匀后在试剂条样本孔内加入350微升，上机检测。同时设S1为标准、C1为阳性对照、C2为阴性对照。结果判定：当TV＜60为阴性;60＜TV＜80为临界;TV＞80为阳性。

二、结果

1.拭子样本检测结果：应用miniVIDAS对本实验中300份拭子样本所进行的检测中，共检出20份阳性样本，其中男性5份和女性15份，经与real-time PCR的结果比对，其结果完全一致;对280份阴性结果进行比对，其结果也完全一致，从而说明miniVIDAS在检测拭子样本的敏感度、特异度等方面其结果均达到100%。

2、尿液样本检测结果：应用miniVIDAS对本实验中尿液样本所进行的沙眼衣原体检测中，共检出30份阳性样本，其中男性10份和女性20份，经与real-time PCR的结果比对，男性中3份为真阳性，7份为假阳性;女性中7份为真阳性，13份为假阳性。阴性样本160份与real-time PCR结果全部一致。经过一致性分析，miniVIDAS检测尿液样本的敏感度为100%，特异度为87.8%。从而说明两者的结果未达到高度一致。

三、讨论

本实验中，尿液样本完全由患者自行留取，很大程度上并不能保证取得的是首段尿，男性拭子标本是自行留取，而女性宫颈拭子样本也是由不同的医生取得，因此取样也不能确保相对一致性，本次研究总计只取得了50份阳性样本，衣原体的阳性率偏低，故此可能会影响miniVIDAS敏感度的准确性。应用miniVIDAS检测尿液样本的敏感度为100%，特异度为87.8%，可能是由于尿液中含有与沙眼衣原体抗原非常相似的其他微生物，从而与固相载体的抗体进行非特异性结合，而令尿液检测衣原体的特异度偏低，说明miniVIDAS对尿液样本沙眼衣原体感染的检测并不适合做为筛选实验。

［1］陆静，韩宇研.输卵管性不孕与沙眼衣原体、淋病双球菌解尿体感染的关系［J］.中华妇产科杂志，2008，33(63)：71-73.

［2］彭慧兰，曹来英，魏敏.孕妇与不孕症妇女解尿支原体、沙眼衣原体的研究［J］.第四军医大学学报，2012，26(1)：64-66.

［3］何秋波，余蜀丹，于建斌，等.性病门诊患者泌尿生殖道衣原体、支原体感染分析［J］.郑州大学学报(医学版)，2003，38(4)：603-604

［4］Mardh P A.Tubal factor infertility，with special regard to chlamydial salpingitis［J］.Curr Opin infect Dis，2014，17(1)：49-52.

R318.16

B

1009-6019(2015)09-0057-02