影响奶牛超数排卵效果因素的分析与研究

2015-03-25倪兴军薛仰全余四九

中国牛业科学 2015年1期

关键词：经产供体孕酮

倪兴军，薛仰全，余四九

(1.甘肃酒泉职业技术学院，甘肃酒泉 735000；2.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070)

影响奶牛超数排卵效果因素的分析与研究

倪兴军1，薛仰全1，余四九2

(1.甘肃酒泉职业技术学院，甘肃酒泉 735000；2.甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070)

[目的]为了充分利用优良母牛遗传资源，发挥超数排卵技术对改良奶牛品种的重要作用。[方法]本试验采用CUE-MAT孕酮栓+FSH+PGF2α法和自然发情+FSH+PGF2α法对酒泉地区饲养奶牛进行超数排卵研究，重点就不同激素处理、季节、供体母牛体况、胎次等单一因素对超排效果影响进行观察，[结果]表明:春季(4.00)<秋季平均可用胚数(4.86)<冬季平均可用胚数(5.07)。平均可用胚率：秋季(56.04%)>冬季(50.71%)>春季(43.54%)。春、秋两季在可用胚率上差异有统计意义(P=0.024<0.05)，春、冬两季在可用胚率上差异无统计意义(P=0.223>0.05)，秋、冬季在可用胚率上差异无统计意义(P=0.342>0.05)。经产母牛和青年母牛平均可用胚数分别为9.06和9.65，平均可用胚率分别为55.83%、56.48%。经产母牛和青年母牛可用胚率之间差异无统计意义(P=0.902>0.05)，但青年母牛的超排效果略高于经产母牛。[结论]为当地从事超数排卵工作提供基础性参考资料。

奶牛；超数排卵；影响因素

目前，在生产上超数排卵技术的效果往往受多种因素影响，如激素处理方法、供体的营养状况、季节、环境因素、遗传性状等，导致了超数排卵效果差异较大，也严重阻碍了该项技术的推广应用[1]。本文从激素处理、季节、供体牛营养状况及年龄等方面，系统的探讨了单一因素对奶牛超数排卵效果的影响，为提高超数排卵效果提供技术依据。

1 材料与方法

1.1 供体牛的选择与饲养

供体牛是从甘肃祁牧乳业有限责任公司、酒泉市雄鹏乳业有限责任公司的高产荷斯坦奶牛群中选取的，体质健康、膘情中上，无生殖系统疾病、传染病和寄生虫病，有正常的发情周期。按奶牛的日常饲养管理标准进行饲喂管理,保证充足的维生素和微量元素(如注射VA、VD、VE，冬季每日补充胡萝卜2kg)，单独组群、编号，保持饲养环境相对稳定。

1.2 主要试验药物与仪器设备

1.2.1 主要试验药物 FSH(100单位×10支,兽药字(2007)110044648)：宁波市三生药业有限公司；PGF2α(0.2 mg/2mL/瓶、批号000513)：上海市计划生育科学研究所；CUE-MATE孕酮栓(1.56 g/支,10支/合，为CIRD第二代产品)：加拿大贝尔尼奇兽药厂生产; 杜氏磷酸缓冲液(PBS)：自制(按奶牛胚胎移植技术规程 NY/T1445-2007的标准要求)。

1.2.2 主要仪器设备保定架、移植枪、灭菌塑料硬外套及软外套、剪毛剪、高压灭菌锅、冷冻仪(日本)、连续变倍体视显微镜(北京泰克)、二通管(日本产冲胚管)、冲胚器(50m1注射器)、集卵杯(φ9塑料平皿)等。

1.4 超排方法

方法Ⅰ：CUE-MATE孕酮栓+FSH+PGF2a法(以下简称孕酮栓法) 在发情周期的任何1 d(除发情当日)，将CUE-MATE孕酮栓置入阴道内，该天计为0 d，从第4天开始连续4 d，按照逐天递减的方法注射FSH，共计400单位/头(用10 mL 0.9%生理盐水充分稀释,早、晚对半肌注；注射第1天的剂量为总剂量的40%，以后每天递减10%)，在注射FSH的第4天的早、晚注射PGF2α 0.4 mg/头，第9天取出 CUE-MATE栓，第10～13天观察发情。

方法Ⅱ：自然发情+FSH+PGF2α法(简称自然发情法) 母牛发情后9～12 d开始连续4 d按照逐天递减的方法注射FSH(用法同上)，共计400 mg/头，在注射FSH的第4天的早、晚注射PGF2α 0.4 mg/头，之后观察发情。

1.5 人工授精

在供体牛安静接受爬跨后第1次输精，12 h后第2次输精，每次输精为2支。发情日记为第0天，在第7天采用非手术法冲胚。

1.6 胚胎的回收采集

供体牛超排发情后的第7天采用二路冲卵管法进行非手术冲卵。用侧漏式集卵杯在显微镜下检胚。二次检查用PBS液冲洗集卵杯2-3次，清洗后再镜检、回收胚胎。

1.7 统计分析

试验数据统计结果用SPSS Statistics17.0软件分析。

2 结果

2.1 不同超排处理方法超数排卵效果的比较

本试验结果表明，如表1所示。自然发情法和孕酮栓法超排回收的平均可用胚胎数分别为4.54枚和4.86枚，可用胚率分别为55.05%和56.04%，两者差异无统计意义(P=0.846>0.05)，但孕酮栓法的超排效果略高于自然发情法。

2.2 不同营养状况供体牛超数排卵效果的比较

本试验挑选膘情上、中、下3 等共47头高产荷斯坦奶牛，用孕酮栓法进行超排处理，结果表明，如表2所示。上、中、下3等膘情供体牛获得的平均可用胚胎数分别为6.13、5.39、3.29，可用胚率分别为58.60%、58.08%、44.66%。下等体况的供体牛与上、中等体况的供体牛在可用胚率上差异有统计意义(P=0.028<0.05，P=0.032<0.05)，而上等体况和中等体况供体牛在可用胚率上差异无统计意义(P=0.925>0.05)。

表1 不同激素处理方案对供体牛超数排卵效果的影响(头、枚、%)

表2 供体牛营养状况对超数排卵效果的影响(头、枚、%)

注：表中同列数据肩标不同小写字母者表示差异有统计意义(P<0.05)。

2.3 不同季节供体牛超数排卵效果的比较

本试验选择膘情适中高产荷斯坦奶牛51头，采用孕酮栓法进行超排处理，结果表明，见表3。平均可用胚数：春季(4.00)<秋季平均可用胚数(4.86)<冬季平均可用胚数(5.07)。平均可用胚率：秋季(56.04%)>冬季(50.71%)>春季(43.54%)。春、秋两季在可用胚率上差异有统计意义(P=0.024<0.05)，春、冬两季在可用胚率上差异无统计意义(P=0.223>0.05)，秋、冬季在可用胚率上差异无统计意义(P=0.342>0.05)。

2.4 不同年龄供体牛超数排卵效果的比较

本试验分别选择膘情适中的高产荷斯坦经产母牛(2～6胎)18头、青年母牛(1.5～2岁未产牛犊)20头，采用孕酮栓法进行超排处理(结果见表4)。结果表明，经产母牛和青年母牛平均可用胚数分别为9.06和9.65，平均可用胚率分别为55.83%、56.48%。经产母牛和青年母牛可用胚率之间差异无统计意义(P=0.902>0.05)，但青年母牛的超排效果略高于经产母牛。

表3 季节对超排效果的影响(头、枚、%)

注：表中同列数据肩标不同小写字母者表示差异有统计意义(P<0.05)，有相同字母表示差异无统计意义(P>0.05)。

表4 经产母牛和青年母牛超排效果的比较(头、枚、%)

3 讨论

3.1 不同超排处理方法对供体牛超数排卵效果的影响

超数排卵是在雌性哺乳动物发情的适当时间，注射外源促性腺激素，使卵巢比自然发情时有更多的卵泡发育并排卵的一种方法，简称“超排”。通过外源性激素的注入，可提高血液中促性腺激素浓度，降低发育卵泡的闭锁，增加早期卵泡发育到成熟卵泡的数量，从而使雌性动物每次排卵数目增加。促卵泡素(FSH)是一种较常用的超排激素，是由腺垂体嗜碱性粒细胞合成和分泌的一种糖蛋白激素，其生理作用是促进卵泡的成熟发育、刺激卵巢生长及增加卵巢的重量，由于其在动物体内的半衰期短(不足180 min)，因此需要多次注射[2]

吴亦方等采CUE-MATE法和自然发情法对荷斯坦奶牛进行超数排卵，结果表明，CUE-MATE法和自然发情法平均获得的可用胚胎数分别为4.81和5.08枚，二者差异不显著( P>0.05)，CUE-MATE 法和自然发情法的可用胚率分别为58.52%和57.92%，差异也不显著( P>0.05)[3]。李金辉等[4]用FSH+PG法处理供体牛获得头均可用胚数4.2枚左右，刘俊平等[5]用FSH+PG+GnRH法处理供体牛获得头均可用胚数6.2枚左右，乔海生等\%[6]用CIRD+GnRH+FSH+PG法处理供体牛获可用胚数为5.4～8.8枚。说明不同超排方法的超排效果不同。

本试验在相同饲养条件下，分两组分别采用CUE-MATE孕酮栓+FSH+PGF2a法和自然发情+FSH+PGF2α法对受体牛进行超数排卵处理。结果表明，自然发情法和CUE-MATE法超排回收的平均可用胚胎数分别为4.54枚和4.86 枚，CUE-MATE法的超排效果略高于自然发情法；CUE-MATE法和自然发情法超排的可用胚率分别为55.05%和56.04%，两者差异无统计意义 (P=0.846>0.05)，但CUE-MATE法的可用胚率略高于自然发情法，与吴亦方等的研究结果相似。本试验未达到了国际胚胎移植协会报道的6枚水平[7]。

3.2 不同营养状况供体牛对超数排卵效果的影响

供体牛的营养状况是影响其超排反应的重要因素，因为体质好的牛卵巢机能好，排卵多；而体质差的母牛，排卵较少。Prakash等[8]认为，供体体况对超排反应和回收胚胎数量有显著影响，体况差的牛导致并加剧黄体的早期退化(发情后6～8 d)，影响超排的效果，使供体的胚胎发生退化，甚至回收不到胚胎。朱玉林认为[9]，只要是超排时母牛处于增重过程中(能量正平衡状况)，选择膘情偏瘦的牛做供体不影响超排效果。

本实验证明，用CUE-MATE孕酮栓+FSH+PGF2α法进行超排处理，上、中、下3等膘情供体牛获得的平均可用胚胎数分别为6.13、5.39、3.29，可用胚率分别为58.60%、58.08%、44.66%，也说明了供体牛营养状况对超排效果有影响。下等体况的供体牛与上、中等体况的供体牛在可用胚率上差异有统计意义(P=0.028<0.05，P=0.032<0.05)，而上等体况和中等体况供体牛在可用胚率上差异无统计意义(P=0.925>0.05)。

3.3 不同季节对供体牛超数排卵效果的影响

季节是个笼统的概念，它产生的影响实际上是气温、湿度、气流、光照等自然条件的影响，以及随之而来的饲料类型和日粮组成的改变。研究表明，季节和环境的变化会显著影响超排效果。即使在同一季节，气候条件、营养水平不同，动物的感受刺激也不尽相同，它们影响动物的超排效果。一般的说，严寒、酷热均对家畜造成应激，这些极端刺激对生理的不良影响会作用于生殖内分泌轴，继而影响到发情和排卵[10]。

张俊功等研究表明，鲁西黄牛不同季节超数排卵获可用胚差异不显著(P>0.05)，但胚胎可用率冬季高于春、秋两季(P<0.01)[11]。本实验采用CUE-MATE孕酮栓+FSH+PGF2α法进行超排处理，平均可用胚数：春季(4.00)<秋季平均可用胚数(4.86)<冬季平均可用胚数(5.07)。平均可用胚率：秋季(56.04%)>冬季(50.71%)>春季(43.54%)。春、秋两季在可用胚率上差异有统计意义(P=0.024<0.05)，春、冬两季在可用胚率上差异无统计意义(P=0.223>0.05) ，秋、冬季在可用胚率上差异无统计意义( P=0.342>0.05)。本试验与张俊功等研究结果不同，可能是南北不同区域气候原因造成的。

3.4 不同年龄供体牛对超数排卵效果的影响

随着年龄的增长，家畜的卵巢机能减退或萎缩，超排效果也会日趋不明显。供体母畜应为2～4胎的青壮年健康经产母牛的超排效果较好[12]。乔利敏等[13]认为，供体母畜应为青壮年母畜，至少有1胎以上的正常繁殖史，一般情况下不宜对无繁殖史的青年母牛或过老的母牛进行超排。青年母牛经超排处理后，排卵数和胚胎回收率均高于经产母牛，这可能是由于青年母牛对超排药物敏感性高的缘故。

丁红[14]的试验说明，年轻母羊对激素反应的敏感性强于老龄母羊，因此选3～4岁母羊作供体为宜，5岁以上母羊超排效果趋于下降。胎次对超排的影响也是非常重要的。1～3胎随着胎次的增加平均排卵数增加，3～8胎则随胎次增高平均排卵数下降。

本实验采用CUE-MATE孕酮栓+FSH+PGF2α法对经产母牛和青年母牛进行超排处理，平均可用胚数分别为9.06和9.65，平均可用胚率分别为55.83%、56.48%。经产母牛和青年母牛两者的可用胚率差异无统计意义(P=0.902>0.05)，但青年母牛的超排效果略高于经产母牛。但本研究发现青年母牛超排所获可用胚胎数与经产母牛相比无明显差异，可能是由于本试验所用的青年母牛在1.5～2.0岁，其生殖系统和机能发育完成，同时青年母牛对激素应答反应敏感，故而1.5～2.0岁青年母牛超排效果与经产牛超排效果差异较小。

由此可见，酒泉地区在未来的奶牛超数排卵或胚胎生产中，超数排卵技术可采用CUE-MATE孕酮栓+FSH+PGF2α法进行超排处理，供体母牛可选取2～6胎经产母牛或1.5～2.0岁未产青年母牛均可，膘情体况在中等以上，在秋、冬季节进行超排处理，效果理想。

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Affecting Factors Analysis of Superovulation in Dairy Cow

NI Xin-jun, XUE Yang-quan, YU Si-jiu

(1.JiuquanVocationalandTechnicalCollege，Jiuquan，Gansu735000;2.CollegeofVeterinaryMedicine,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou,Gansu730070)

【Objective】To make full use of genetic resources of the excellent cow, superovulation technology applied in dairy cow was studied.【Method】 Two different methods was used. The first one (CUE-MAT progesterone suppository +FSH+PGF2α) was calleded as experiment group, and the second one (natural estrus +FSH+PGF2α) was called as control group. Both were studied in the superovulation of dairy cow in Jiuquan area. The observed factor affecting superovulation included the different hormone treatments, season, body condition of the cow and parity the number of accouterments.【Result】The result indicated that the number of available embryos in spring (4.00) was less than that in autumn (4.86), and both of them were less than the number of available embryos in winter (5.07). The average rate of embryo available of fall (56.04%) was higher than that of winter (50.71%) and spring (43.54%). The available embryo rate of spring and autumn season showed significant difference (P= 0.024). Available embryo rate of spring and winter demonstrated similar (P = 0.223). There was no statistically significant difference in rate of available embryos of autumn and winter (P=0.342). The average number of available embryos were 9.06 and 9.65, respectively, and the average available embryo rate of 55.83% and 56.48%, respectively. There was no statistically significant difference between the available embryo rate of the cows and young cow (P=0.902). However, the effect of super row in young cow was slightly higher than the cows.【Conclusion】The above experiment data could provide some basic reference data for superovulation in local area.

Cow; Superovulation; Influencing factors