流式细胞术检测白血病微小残留病变与疗效判断及预后关系*

陕西省人民医院血液科(西安 710068)

王 晖 高秋英 张 雅 王 一 焦红侠 周茂华△

·临床研究·

流式细胞术检测白血病微小残留病变与疗效判断及预后关系*

陕西省人民医院血液科(西安 710068)

王 晖 高秋英 张 雅 王 一 焦红侠 周茂华△

目的 ：研究流式细胞术方法在检测白血病微小残留病变(MRD)中的作用及地位，判断其与疗效及预后的关系。方法：选择急性淋巴细胞白血病(ALL)初发患者56例， 将其按照成人ALL危险分组分为低危组、中危组和高危组三组，在所有患者巩固及维持治疗阶段，每3个月运用FCM方法检测白血病微小残留病变，对其进行为期一年的随访，记录下复发率。结果：56例白血病患者在诱导化疗后都获得了完全缓解，巩固及维持治疗阶段四次检测的不同疾病危险度的MRD阳性率差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，HR组的MRD阳性率要明显高于LR和MR组；巩固、维持治疗阶段四次检测结果的MRD阳性组和阴性组的复发率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：运用流式细胞术方法检测白血病微小残留病变对评价疗效、提早预防复发、重新确定疾病危险度和调整治疗策略方法有着重要意义。

白血病微小残留病变(Minimal pesidual disease, MRD)是白血病病人在经过了诱导化疗、达到完全缓解后用传统形态学方法无法检测出的体内残留少量白血病细胞的状态[1]。白血病微小残留病变是白血病复发的根源[2]，但由于MRD其在体内的分布特点复杂，且增殖状况会随着机体的免疫情况变化，因此，寻找快速准确的检测白血病微小残留病变的方法就成为研究人员关注的焦点。检测MRD也对判断患者疗效及预后，指导个性化治疗有着重要的意义。如今，多参数流式细胞术凭借着其快捷灵敏、特异定量的优势成为检测白血病微小残留病变的重要方法之一，也是疗效判定和疾病预后的重要指标。本研究运用流式细胞术方法监测56例白血病患者MRD并探讨其与临床疗效和预后的关系。

对象与方法

1 研究对象 选择陕西省人民医院2010年6月至2014年1月收治的FAB分型为急性淋巴细胞白血病(ALL)的初发患者56例，其中男性病例31例，女性病例25例，年龄在1～70岁之间，平均年龄为41±21.8岁。所有患者都经过血液病相关检查，诊断符合血液病诊断和疗效标准[3]。

2 研究方法 将56例白血病患者按照成人ALL危险分组[4]分为低危组(LR)、中危组(MR)和高危组(HR)3组，其中，LR组16例(28.57%)，MR组30例(53.57%)，HR组10例(17.86%)。

对患者随访一年，运用双参数图的三色流式细胞术(FCM)在患者巩固、维持治疗阶段每3个月检测一次。

3 疗效标准 采用4色标记的5组抗体组合确定初治患者的白血病相关免疫表型(LAIP)，选取敏感的LAIP进行追踪MRD，检测患者的骨髓标本。以患者LAIP阳性细胞比例高于正常值+2倍标准差的定为MRD(+)，低于此值的为MRD(-)[5]。

4 统计学方法 采用SPSS19.0进行统计分析，对本研究中的计数资料运用χ2检验，且当P<0.05时表示差异具有统计学意义。

结 果

1 治疗结果 56例白血病患者在诱导缓解治疗后都获得了完全缓解(CR)，在1年随访过程中共2例病人失访，1例中危组病人，1例高危组病人，失访率为3.58%，其余54例白血病患者均经过了一年的随访，并对其进行了巩固强化治疗，累积复发8例，复发率14.81%。

2 MRD与疾病危险度 56例患者诱导化疗结束治疗三个月后的MRD阳性率结果见表1，55例患者诱导化疗结束6个月后的MRD阳性率结果见表2，54列患者诱导化疗结束9个月和12个月后的MRD阳性率结果见表3和表4。由表可知，诱导化疗结束治疗后各阶段不同疾病危险度的MRD阳性率差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，HR组的MRD阳性率要明显高于LR、MR组。

表1 56例患者诱导化疗结束治疗后3个月3组的MRD阳性率比较

注：与LR组、MR组比较*P<0.05

表2 55例患者诱导化疗结束治疗后6个月3组的MRD阳性率比较

注：与LR组、MR组比较*P<0.01

3 MRD与复发 37例在诱导化疗结束治疗后3个月检测中MRD呈阴性的白血病患者中复发的有1例，复发率为2.70%，19例在诱导化疗结束治疗后3个月检测中MRD呈阳性的白血病患者中复发的有2例，复发率为10.53%，两组的复发率比较其差异具有统计学意义(P<0.05)；35例在诱导化疗结束治疗后6个月检测中MRD呈阴性的白血病患者中复发的有1例，复发率为2.86%，20例在诱导化疗结束治疗后6个月检测中MRD呈阳性的白血病患者中复发的有5例，复发率为25%，两组的复发率比较其差异具有统计学意义(P<0.05)；34例在诱导化疗结束治疗后9个月检测中MRD呈阴性的白血病患者中复发的有1例，复发率为2.94%，20例在诱导化疗结束治疗后9个月检测中MRD呈阳性的白血病患者中复发的有7例，复发率为35%，两组的复发率比较其差异具有统计学意义(P<0.05)。诱导化疗结束治疗后9个月检测MRD呈阳性的20例患者中，LR组复发1例(25%)，MR组复发3例(30%)，HR组复发3例(50%)，3组之间的复发率比较没有显著差异(P>0.05)。

表3 54例患者诱导化疗结束治疗后9个月3组的MRD阳性率比较

注：与LR组、MR组比较*P<0.01

表4 54例患者诱导化疗结束治疗后12个月3组的MRD阳性率比较

注：与LR组、MR组比较*P<0.01

讨 论

MRD的检测有细胞遗传学技术，集落培养，荧光原位杂交(FISH)、流式细胞术(FCM)、聚合酶链反应(PCR)等几种方法[6，7]。尽管流式细胞术方法检测MRD已成为一种诊治白血病的重要手段。但因为MRD在人体中的分布、变化复杂且选用的方案和设备实际具有差异，目前并不能将MRD检测作为判断白血病患者疗效和预后的唯一依据。在实际运用中，我们既应建立FCM检测MRD的规范化、标准化流程，提高该技术在临床中的应用，又应严控质量体系，坚持定期检测，对每个患者进行反复多次白血病微小残留病变检测，根据MRD值变化情况，结合其他临床检查指标，达到评价疗效、提早预防复发、重新确定疾病危险度和调整治疗策略的目标。

[1] Faderl S, Kantarjian HM, Talpaz M. Clinical significance of minimal residual disease in leukemia[J].Int J Oncol,2000,17(6):1277-1287.

[2] 翟志敏, 吴竞生, 潘理明, 等. 多参数流式细胞术对外周血造血前体细胞及急性白血病微小残留病变的研究[J]. 中国实验诊断学,2001,5(6):27.

[3] 杨天栅.急性白血病疗效标准.见:张之南, 沈 悌主编. 血液病诊断及疗效标准[M].北京: 科学出版社,1998：215.

[4] 秘营昌.中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗专家共识—诊断和预后分组解读[J]. 中华血液学杂志,2013,34(11):994-996.

[5] 张之南，沈 悌.血液病诊断及疗效标准(第三版)[M]. 北京：科学出版社，2007:131-133.

[6] 陈 萍.急性淋巴细胞白血病微小残留病的检测及其临床意义[J].国外医学:输血及血液学分册,2002,25(1):24.

[7] 张 丽,罗文达,陈葆国,等.急性淋巴细胞白血病免疫表型与微小残留病检测的意义[J].现代中西医结合杂志,2006,15(9):1147-1150.

(收稿：2015-06-20)

Research on the relationship of flow cytometry detection of minimal residual disease with curative effect evaluation and prognosis Department of Hematology,Shaanxi Provincial People Hospital

( Xi’an 710068 )

Wang Hui Gao Qiuying Zh Ya et al

Objective :To study the role of flow cytometry in the treatment of minimal residual disease of leukemia, judge its relationship with the curative effect and prognosis. Methods :Selected 56 leukemia patients from Shaanxi Provincial People Hospital, they were divided into the low risk group, medium risk group and high risk group on severity, using flow cytometry method to detect patients’ leukemia minimal residual disease after chemotherapy and after chemotherapy of six months. Carry out a one-year follow-up and record the recurrence rate. Results :56 cases had obtained complete remission after therapy, the difference of positive rates of MRD were statistically significant (P<0.05 orP<0.01) after chemotherapy and after chemotherapy of six months. the high group’s positive rate of MRD was higher than that in low risk group, medium risk group. the recurrence rate was different between MRD positive group and negative group. Conclusion :The use of flow cytometry detection method for evaluation of curative effect of leukemia minimal residual disease, early prevention of recurrence, redetermine the degree of disease risk and adjust the treatment strategy has important significance.

Leukapheresis Flow cytometry Prognosis

*广东省卫生厅资助项目(97051 )

白血病 流式细胞术 预后

R552

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.006

△ 广东省人民医院血液科