吡格列酮联合辛伐他汀对兔动脉粥样硬化CD40-CD40配体系统的影响*

辽宁医学院附属第三医院心内科(锦州 121000)

邱雅慧 薛 凌

吡格列酮联合辛伐他汀对兔动脉粥样硬化CD40-CD40配体系统的影响*

辽宁医学院附属第三医院心内科(锦州 121000)

邱雅慧 薛 凌

目的: 探讨吡格列酮辛伐他汀与CD40-CD40L系统相互作用机制以及其对兔动脉粥样硬化的影响。方法: 40只实验兔，随机分为5组，每组8只：正常对照组(A组)、高脂模型组(B组)、吡格列酮组(C组)、辛伐他汀组(D组)、联合用药组(E组)，实验共16周。16周末检测如下指标：①血脂；②血清超敏C反应蛋白质(hsCRP)、人可溶性CD40配体(sCD40L)、基质金属蛋白梅9(MMP-9)；③测定斑块/内膜面积比；④斑块部位CD40L的表达。结果: 各用药组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)升高，高密度脂蛋白(HDL-C)降低；各用药组hsCRP、sCD40L、MMP-9升高，斑块/内膜面积比出现下降，CD40的表达降低，联合用药组效果更佳。结论: 吡格列酮、辛伐他汀通过抑制CD40-CD40L信号通路抑制炎症反应，调脂等不同途径抑制动脉硬化的形成，联合应用具有协同作用。

动脉粥样硬化(AS)是一种多种因素共同作用的慢性炎症性疾病[1]。目前研究发现CD40-CD40L系统在炎症过程中发挥重要作用的信号通路[2]。CD40与CD40L广泛存在于与动脉硬化相关的各种细胞和血小板中，可调节多种炎症反应，被认为可能是AS炎症进程的关键环节。本实验通过观察吡格列酮联合辛伐他汀对兔AS形成的影响以及对CD40-CD40L信号系统的影响，探讨其抑制AS的可能作用机制，为临床提供理论依据。

材料与方法

1 实验动物及分组 健康日本大耳白兔雄性40只，辽宁医学院实验中心提供，兔龄3个月左右，体重2.0 ±0.15kg。适应性喂养1周，随机分为5组(n=8)。正常对照组(A组)；高脂模型组(B组)；吡格列酮组(C组)；辛伐他汀组(D组)；联合用药组(E组)；实验共16周。

2 观测指标 实验结束时留取血清及动脉标本检测。①全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)； ②ELISA测定高敏C反应蛋白质(hsCRP)、人可溶性 CD40 配体(sCD40L)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)；③油红o染色，测定斑块/内膜面积比，④免疫组织化学法测定斑块部位CD40的表达。

结 果

1 血脂结果 与A组相比，B、C、D、E组TC、TG、LDL-C升高，HDL-C降低(P<0.01)；与B组相比较，C、D和E组TC、TG、LDL-C含量均显著降低(P<0.01)，HDL-C含量显著升高(P<0.01)；与C、D组相比，E组TC、TG、LDL-C含量均降低(P<0.05)，HDL-C含量升高(P<0.05)。

2 hsCRP、sCD40l、MMP-9检测结果 与A组相比，B、C、D和E组hsCRP、sCD40L、MMP-9水平显著升高(P<0.01)；与B组相比，C、D组和E组hsCRP、sCD40L、MMP-9水平显著降低(P<0.01)；与C、D组相比，E组hsCRP、sCD40l、MMP-9水平显著降低(P<0.05，附表)。

3 病理形态学观察斑块/内膜面积比 与B组比较，其余各组斑块面积/内膜面积均出现降低；与C、D组比较，E组斑块面积/内膜面积明显下降, 差异有显著性(P<0.05，附表)。

4 CD40表达结果 与A组相比，B、C、D及E组主动脉内膜斑块可见CD40表达；与B组比较，C、D、E组主动脉内膜CD40表达显著降低， E组与C、D组相比，CD40表达减少(P<0.05)。

附表 各组血清hsCRP、sCD40L、MMP-9的变化

注：与A组相比 *P<0.01；与B组相比#P<0.01；与C、D组相比◇P<0.05。

讨 论

在AS发生过程中，CD40-CD40L在动脉粥样硬化斑块中的多种细胞广泛存在，与AS斑块的发生发展关系密切[3]。研究发现与AS密切相关的功能性分子(细胞因子、黏附分子和基质金属蛋白酶等)的分布与CD40-CD40L的分布具有明显的一致性，CD40L与AS斑块形成、斑块破裂相关[4]。本实验结果显示免疫组化显示药物组动脉粥样硬化斑块中CD40表达较模型组减少，推断吡格列酮及辛伐他汀具有抗AS作用与阻断CD40-CD40L信号通路有关。

近期研究显示PPAR-γ激活后能够抑制促炎因子、炎症因子靶基因的活化与转录，减少促炎细胞因子干扰素γ、肿瘤坏死因子-α、白介素-2的表达。促炎细胞因子可以增加CD40-CD40L mRNA的表达，使巨噬细胞和活化T细胞表面CD40表达增加[5]。因此推断PPAR-γ的活化间接减少了CD40-CD40L系统的表达，在AS过程中发挥了相应的保护作用。本实验结果也显示PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制了动脉粥样硬化发展过程中CD40-CD40L的表达，减轻炎症反应，抑制AS斑块的形成。辛伐他汀也可以使CD40-CD40L表达减少，调节血脂，抑制血管炎症反应、抑制粥样斑块的发展。本实验结果表明：与单一用药相比，斑块面积在联合用药时能够明显降低，其他指标如血脂、炎症因子等也较单一用时改善。实验表明吡格列酮和辛伐他汀药物联合可以干预AS的发生发展与阻断CD40-CD40L系统相关，具有协同作用。下一步需要进行长期临床实验来明确两类药物的相互作用效果。

[1] Tuttolomondo A, Di Raimondo D, Pecoraro R,etal. Atherosclerosis as an inflammatory disease[J]. Curr Pharm Des, 2012, 18(28):4266-4288.

[2] Borcherding F, Nitschke M, Hundorfean G,etal.The CD40-CD40L pathway contributes to the proinflammatory function of intestinal epithelial cells in inlammatory bowel disease[J]. Am J Pathol, 2010, 176(4): 1816-1827.

[3] Tousoulis D, Androulakis E, Papageorgiou N,etal. From atherosclerosis to acute coronary syndromes: the role of soluble CD40 ligand[J].Trends Cardiovasc Med， 2010，20(5):153-64.

[4] Robles-Carrillo L,Meyer T,Hatfield M,etal.Anti-CD40L immune complexes potently activate platelets in vitro and cause thrombosis in FCGR2A transgenic mice[J].J Immunol,2010, 185(3): 1577-1583.

[5] Jung UJ, Torrejon C, Chang CL,etal. Fatty acids regulate endothelial lipase and inflammatory markers in macrophages and in mouse aorta: a role for PPARγ[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32(12):2929-2937.

(收稿：2015-08-10)

*辽宁省科学事业公益研究基金(GY2012-B-005)

动脉硬化 @CD40-CD40配体 动物，实验 兔

R543.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.003

辽宁省锦州市科学技术计划项目(12B1D26)